毓麟茶质量控制方法研究

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摘要：目的 建立毓麟茶的质量控制方法。方法 采用薄层色谱法对毓麟茶中黄芪、蛇床子、五味子、枸杞子进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定君药五味子有效成分五味子醇甲的含量。色谱条件：Welch Materials C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），甲醇-水（70∶30）为流动相，检测波长250 nm。结果 薄层色谱鉴别方法简便，专属性强。五味子醇甲0.222～0.222 0 μg范围内呈良好的线性关系，r=0.999 9，平均加样回收率为98.96%，RSD=0.74%。结论 所建立的方法可用于该制剂的质量控制。

关键词：毓麟茶；高效液相色谱法；薄层色谱法；五味子醇甲

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.07.023

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）07-0061-03

Study on Quality Control Methods of Yuling Tea LI Qin1， WEI Liang-bing1， MENG Mei1，2， GAO Jia-rong1，2， XIA Lun-zhu1，2 （1.Department of pharmacy， The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine， State Administration of National Chinese Drugs Medicament Laboratory of Grade 3， Hefei 230031， China；2.Anhui University of Chinese Medicine， Hefei 230032， China）

Abstract：Objective To establish the quality standard of Yuling Tea for its quality control. Methods Astragalus， Fructus cnidii L， Schisandra chinensis and Lycii Fructus in Yuling Tea were identified by TLC. The content of Schisandrin was determined by HPLC. Welch Materials C18 column （250 mm×4.6 mm， 5 μm） with mobile phase of methanol-water （70∶30） was used. The detective wavelength was 250 nm. Results The TLC for identification was simple and special. Schisandrin showed a good linear relationship in 0.222-0.222 0 ?g， r=0.999 9. The average recovery was 98.96%， and RSD was 0.74%. Conclusion The method can accurately determine the content of Schisandrin in Yuling Tea. It can be used for quality control of the preparation.

Key words：Yuling Tea；HPLC；TLC；Schisandrin

毓麟茶是安徽中医药大学第一附属医院的经验方，由黄芪、枸杞子、五味子、蛇床子等14味中药组成，具有补肾填精、调气血、和肝脾的功效，适用于不孕不育、男子弱精症及女子卵巢功能失调，于2007年取得医疗机构制剂批准文号（皖药制字Z20080010）。本试验采用薄层色谱法对其中的黄芪、蛇床子、五味子、枸杞子进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（HPLC）对五味子中五味子醇甲的含量进行测定，为毓麟茶提供质量控制方法。现报道如下。

1 仪器与试药

CAMAG NANOMAT4 点样仪，CAMAG TLC PLATE HEATERIII 加热板，SK3200H超声仪，CAMAG紫外光灯，Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，BP211D电子分析天平（德国赛多利斯公司），SK3200H超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司），HH-S型电热恒温水浴锅（江苏省医疗器械厂）。

毓麟茶（安徽中医药大学第一附属医院制剂中心生产，批号20120318、20120524、20120710），黄芪对照药材（批号121462-201001）、蛇床子对照药材（批号121030-201005）、五味子对照药材（批号120922-201004）、枸杞子对照药材（批号121072-201104）及五味子醇甲对照品（批号110857-201009）均购自中国药品生物制品检定所，色谱甲醇（国药集团化学试剂有限公司，批号20111203），其余试剂均为分析纯。

2 薄层色谱鉴别

2.1 黄芪

取本品7 g，置索氏提取器中，加入100 mL甲醇，加热回流至提取液近无色，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水20 mL使溶解，用水饱和的正丁醇溶液萃取3次，每次20 mL，弃去水液，合并正丁醇液，用氨水调pH 8～9的水萃取2次，每次20 mL，将正丁醇液浓缩至干，加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[1]。另取黄芪对照药材2 g，加甲醇同法制得对照药材溶液。再按处方比例取除黄芪外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水（20∶25∶25∶10）在10℃以下静置后的下层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且无阴性干扰。

2.2 蛇床子

取本品5 g，加乙醇30 mL，超声处理15 min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[2]。另取蛇床子对照药材1 g，同法制得对照药材溶液。再按处方比例取除蛇床子外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷（3∶3∶2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（254 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，且无阴性干扰。

2.3 五味子

取本品10 g，加三氯甲烷30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取五味子对照药材1 g，同法制得对照药材溶液。再按处方比例取除五味子外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述溶液各2 ?L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以石油醚（30～60 ℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上层液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，有相同颜色的荧光斑点，且无阴性干扰。

2.4 枸杞子

取本品10 g，加水50 mL，超声处理30 min，放冷，滤过。滤液用乙酸乙酯20 mL（10、5、5 mL）分3次振摇萃取，合并提取液，浓缩至1 mL，作为供试品溶液[3]。另取枸杞子对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再按处方比例取除枸杞子外的其他药材，依本品制备工艺制备，按供试品溶液的制备方法制得阴性对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中华人民共和国药典》（一部）附录ⅥB]试验，吸取上述供试品溶液和阴性对照溶液5 ?L和对照药材溶液2 ?L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置，显相同颜色的荧光斑点，且无阴性干扰。

3 五味子醇甲含量测定

3.1 色谱条件及系统适应性试验

Welch Materials C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；甲醇-水（70∶30）为流动相；流速：1.0 mL/min；进样量：10 mL；柱温：25 ℃ ；检测波长：250 nm[4-5]。取制备的供试品溶液，按色谱条件进样，记录色谱图，结果理论板数按五味子醇甲峰计不低于2000，五味子醇甲与周围的峰分离度均大于1.5。

3.2 对照品溶液制备

精密称取105 ℃干燥至恒重的为五味子醇甲对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.222 mg的溶液，即得。

3.3 供试品溶液制备

取本品颗粒，研成细粉，精密称取毓麟茶10 g，至圆底烧瓶中，精密加甲醇50 mL，称定质量，超声处理（频率53 kHz，功率150 W）30 min，放冷，精密称定，用甲醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液25 mL，蒸干，用甲醇溶解并定容至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45 ?m微孔滤膜过滤，弃去初滤液，即得[6-7]。

3.4 阴性对照试验

按处方及制备工艺制备不含五味子药材的阴性样品，再按供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。按“3.1”项下色谱条件，吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 ?L，分别注入液相色谱仪，进行测定。结果供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照在此保留时间无干扰（见图1）。因此，可在此系统条件下对五味子醇甲进行定量分析。

A B

C

注：A.对照品；B.供试品；C.阴性对照

图1 毓麟茶中五味子醇甲HPLC图

3.5 线性关系考察

分别精密称取五味子醇甲储备液（每1 mL含0.222 mg） 0.5、1、2、3、4、5 mL至5 mL容量瓶中，加甲醇稀释溶解至刻度，配制成不同浓度的对照品溶液，按上述色谱条件进样，对照品溶液进样10 ?L。记录五味子醇甲峰面积积分值，以五味子醇甲进样量浓度为横坐标，五味子醇甲峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，得到五味子醇甲对照品的回归方程为Y=43884.997X+23.235，r=0.999 9（n=6）。结果表明，五味子醇甲在0.222～0.222 0 ?g范围内与峰面积呈良好线性关系。

3.6 精密度试验

精密称取五味子醇甲对照品（0.088 8 mg/mL）。按色谱条件测定，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD=0.18%。表明此方法测定五味子醇甲对照品精密度良好。

3.7 重复性试验

精密称取毓麟茶同一批号样品（批号20120318）10 g，共6份，按上述方法制备供试品溶液，精密量取该溶液10 mL，按上述色谱条件注入液相色谱仪，结果五味子醇甲的平均含量为0.057 3 mg/g，RSD=0.97%。表明重复性良好。

3.8 稳定性试验

精密取按供试品溶液制备法制备的同一批供试品溶液，分别与0、2、4、8、12、24 h进样10 ?L，注入高相液相色谱仪，测定并记录五味子醇甲的峰面积积分值，计算RSD=1.65%。表明样品溶液在24 h内稳定性较好。

3.9 加样回收率试验

精密称取毓麟茶（批号20120318）5 g，共6份，每份精密加入五味子醇甲溶液（0.222 mg/mL）1.3 mL，按“3.3”项下方法制成供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件进样10 ?L，测定峰面积，根据五味子醇甲含量，计算回收率，见表1。表明用此方法测定五味子醇甲含量加样回收率良好，方法准确、可靠。

3.10 样品含量测定

取3批毓麟茶，精密称取10 g，按“3.3”项下方法制成供试品溶液，按“3.1”项下色谱条件进样10 ?L，测定各样品中五味子醇甲的含量，结果见表2。

表1 五味子醇甲加样回收率试验结果

取样量

（g） 样品中含量（mg） 加入量（mg） 测得量（mg） 回收率 （%） 平均回收率

（%） RSD

（%）

4.991 5 0.285 5 0.288 6 0.570 2 98.64

5.001 3 0.286 1 0.288 6 0.571 1 98.76

5.003 8 0.286 2 0.288 6 0.570 4 98.47 98.96 0.74

5.000 4 0.286 0 0.288 6 0.575 6 100.34

4.991 5 0.285 5 0.288 6 0.569 4 98.37

5.010 5 0.286 6 0.288 6 0.572 8 99.17

表2 毓麟茶中五味子醇甲含量测定结果

批号 取样量（g） 五味子醇甲含量（mg/g） RSD（%）

20120318 10.011 6 0.057 2

20120524 10.001 2 0.057 4 0.83

20120710 10.033 6 0.058 1

4 讨论

在试验过程中，蛇床子的薄层鉴别参考2010年版《中华人民共和国药典》（一部）蛇床子项下在365 nm紫外光灯下观察，但斑点不清晰、颜色对比度较差，故在254 nm紫外光灯下观察，结果对应斑点清晰。黄芪的薄层鉴别曾用过2010版《中华人民共和国药典》（一部）黄芪的鉴别方法，但因斑点不清晰，后采用《现代实用中药控制质量技术》[2]中的方法，结果对应斑点清晰，分离度较好。

根据2010年版《中华人民共和国药典》，五味子醇甲的色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（65∶35）为流动相，检测波长为250 nm，理论板数五味子醇甲峰计算应不低于2000。根据实际情况，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（70∶30）为流动相，与其他物质分离度较好。

本试验分别对毓麟茶中黄芪、蛇床子、五味子、枸杞子进行了薄层鉴别，结果斑点清晰、专属性强、重复性好，阴性对照溶液无干扰，可分别用于鉴别该制剂中的相应的成分。对毓麟茶中的五味子醇甲进行了含量测定，方法准确度高，灵敏度强。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：61-62.

[2] 苗明三，李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：933.

[3] 孟楣，高家荣，魏良兵.薄层色谱法鉴别枸杞子的实验研究[J].中国药事，2007，21（11）：912-913.

[4] 廖彩霞，戴德雄，诸葛周.HPLC法测定参芪五味子分散片中五味子醇甲[J].中草药，2012，43（3）：505-506.

[5] 苏桃，陆兔林，毛春芹，等.不同粒度五味子有效利用率评价[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（3）：96-99.

[6] 秦建平，吴建雄，毕宇安.HPLC同时测定益心舒片中五味子醇甲、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和丹参酮ⅡA的含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（2）：77-81.

[7] 龙海燕，李文莉.HPLC法测定复方益肝灵胶囊中五味子醇甲含量[J].药物分析杂志，2010，30（2）：282-284.

（收稿日期：2012-12-21，编辑：陈静）