金钗石斛花、茎化学成分的比较研究

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摘要：目的 首次比较研究金钗石斛花、茎的物质基础。方法 采用系统预试法、薄层色谱法、高效液相指纹图谱法对金钗花、茎的化学成分进行比较研究；结果：比较研究了金钗石斛花、茎的化学成分。结论：该方法能够较为全面的反应金钗石斛花、茎的物质基础差异。

关键词：金钗石斛 化学成分 比较研究

石斛又名石斛兰，为兰科石斛属植物。不仅医疗保健价值很高，而且由于花形、花姿优美，艳丽多彩，种类繁多，花期长，深受各国人民喜爱和关注，在国际花卉市场上占有重要的位置。石斛是我国古文献中最早记载的兰科植物之一。1500年以前的《神农本草经》中就有记载。千年以来它一直和灵芝，人参等一样被列为上品中药。其性味：甘淡微咸。性属清润，清中有补，补中有清。但是由于其品种繁杂，对其质量控制较为困难。金钗石斛药用历史悠久，产量较大，因此我们选择其进行研究。就石斛属类药理作用来说。目前研究表明，石斛属类植物具有免疫调节、显著的抗肿瘤作用、治疗白内障、对胃肠道作用、抗氧化活性、抗诱变、以及对心血管系统作用。石斛中某些菲类成分具有明显抗肿瘤作用以及强有力的抗炎效果；双苄基类化合物具有潜在的抗突变活性；多糖和生物碱具有抗炎、明目、增强免疫作用；酚类化合物主要表现在抗衰老等方面作用。而对其芴酮类成分药理作用研究较少。就金钗石斛花来说，目前没有对其药理作用进行研究，也没有对花和茎的化学成分进行比较研究。

1 仪器试药

1.1 药材：石斛花及其茎采于贵州赤水，经鉴定为金钗石斛D.nobile Lindl.。

1.2 仪器、设备以及数据处理软件

Agilent 1200型HPLC色谱仪（配有G2180AA-DAD检测器，G1311A四元梯度泵、G1322A在线脱气装置、G1316A柱温箱）；Agilent1200化学工作站；Sartorius系列电子分析天平；国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版（2004）；Chormap中药色谱指纹图谱解决方案软件（试用版）；薄层色谱系统。

1.3 试剂：Fisher Chemical 乙腈（HPLC级）、实验室自制重蒸馏水、薄层展开试剂以及系统预试试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 供试品的制备

分别取金钗石斛花、金钗石斛鲜茎20g，切碎。加入10倍量（200ml）95%乙醇（医用酒精）浸泡过夜，微沸回流提取2次，每次2小时，过滤，合并提取液，浓缩至20ml（每毫升含生药量：1g）。

2.2系统预试实验

2.3薄层色谱比较（花-茎排列）

薄层色谱条件：

石油醚-丙酮=10：6、氯仿-丙酮-水=7：3：0.25、

氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水=15：40：22：10 （冷藏过夜取下层）

点样量：10ul

图1 薄层色谱比较图

石油醚部位 乙酸乙酯部位 正丁醇部位

可以看出：花与茎之间在石油醚部位、正丁醇部位相同斑点较少；乙酸乙酯部位相同斑点较多。

石油醚部位：茎样品中，在Rf较高部分有比较明显的红色荧光斑点，而花中不太明显，可能为色素的含量不同；而花的样品中，在顶部有蓝色荧光斑点，而茎未见此斑点。

乙酸乙酯部位：花和茎样品在Rf较低部分有2-3个相同斑点，而茎在Rf较高部分出现了特有的斑点。

正丁醇部位：经生物碱显色剂确定，Rf值较低部位花和茎均见2-3个生物碱斑点，茎中的生物碱含量较高。

2.4高效液相指纹图谱比较

2.4.1液相色谱条件

流动相：乙腈-水；柱温：25℃；梯度洗脱条件：流动相梯度洗脱采用水（A）：乙腈（B）梯度洗脱（VA%/VB%）；0min（95：5）5min（90：10）30min（70：30）60min（55：45）135min（5：95）；二极管阵列检测条件：8波长监控，带宽2nm；蒸发光散射条件：漂移管温度：85℃；气体流速：1.7L/min；增益值：1；进样量：10ul

2.4.2指纹图谱

由于254nm涵盖了基本所有的峰，故选254nm为比较波长

图2 254nm指纹图谱比较图（上为花下为茎）

图3 蒸发光散射指纹图谱比较图（上为花下为茎）

可以看出：其成分在中极性部位相似度较高，小极性部位次之，大极性部位相似度较小，这与薄层比较相吻合。I区花中的大极性成分含量较高，出现了吸收值较大的峰群，而茎中此类物质含量较低。II区的峰群中可以看出，花在Tr=35min附近有2-3个大吸收峰，而茎中所对应的峰吸收度较小。III区小极性部位花和茎的物质相似，含量也接近。而蒸发光散射图谱中，我们发现茎中Tr=20min左右出现了一个大峰，而花中含量甚微甚至没有。

3结论以及讨论

由以上比较研究可知，花和茎的化学成分有较大的差异，同时也存在着很多共有成分。下一步研究将着手与共有成分与差异成分进行进一步研究。花中含有花色素，而茎中含有叶绿素，花中黄酮类成分较多，而茎中生物碱类成分较多，但生物碱类成分花中亦然含有，只是含量较低。通过系统预试法、薄层色谱法、以及高效液相指纹图谱法对花和茎的化学成分进行比较研究，能够较为全面的反映物质基础的差异，可以作为中药比较研究的思路之一。

参考文献：

[1]State Pharmacopeia Committee of China（国家药典委员会）.Research Guide of Chromatographic Fingerprints Experiment of TCM（Protocol）（中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行））[M].2002.

[2]中药注射剂色谱指纹图谱实验研究技术指南（试行）； 国家药典委员会2002年4月27日

[3]《中药色谱指纹图谱》；谢培山；人民卫生出版社