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血液分析仪及其临床应用

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血液分析仪(hematology analyzer,HA)是目前临床血液一般检查最常用的检测仪器,以往使用手工操作显微镜计数方法,由于操作过程的随机误差,实验器材的系统误差和检测方法的固有误差,使显微镜法细胞计数实验结果的精确性,准确性受到很大影响,尤其在大批量标本检查时,难于及时发出报告。随着基础医学的发展,高科学技术的应用,特别是计算机技术的引用,血液分析仪的研制水平不断提高,检测原理不断完善,测量参数逐渐增多,检测速度快,精确度高,操作简便是血液分析仪的优势,各种型号血液分析仪的问世,不断为临床提供更有用的实验指标,对疾病的诊断与治疗有着重要的临床意义。

目前,各类血液分析仪主要能完成两大功能:①细胞计数功能;②细胞分类功能。血液分析仪检测原理大致分为两类,即电阻抗法和光散射法。

电阻抗法血液分析仪检测

电阻抗法血细胞计数原理和仪器组成:瞬间引起了电压变化而出现一个脉冲信号。脉冲信号变化的程度取决于非导电性细胞体积的大小,细胞体积越大产生的脉冲振幅越高,测量脉冲的大小即可测出体积大小,记录脉冲的数量就可测定细胞的数量,这些脉冲信号经过放大,阈值调节,甄别,整形,计数及自动控制保护系统,最终可打印出数据报告。

白细胞计数和分类计数:根据电阻抗的原理,不同体积的白细胞通过小孔时产生的脉冲大小有明显差异,依据这些脉冲的大小,可对白细胞进行分群。仪器对大小不同的脉冲进行选择,区分出不同类型的细胞并分别进行计数。

电阻抗法红细胞检测

红细胞计数和血细胞比容测定,目前,大多数血液分析仪都是用电阻抗法进行红细胞计数和血细胞比容测定,其检测原理同白细胞计数相似。当红细胞通过计数小孔时,产生相应大小的脉冲,脉冲的高低代表每个红细胞的体积,脉冲的多少即为红细胞的数目,脉冲高度叠加经换算得出血细胞比容。稀释血液中含有白细胞,当血液进入红细胞检测通道时红细胞检测的各项参数中均含有白细胞因素。近年来,有些血液分析仪使用非氰化溶血剂(如SDS)其实验结果的精确性,准确性可以达到含氰化物溶血剂的同样水平,使用这样的溶血剂既能保证实验质量又可避免试剂对实验人员的毒性和对环境的污染。而且直接反映红细胞大小不等的程度,对贫血诊断具有重要意义。

网织红细胞计数

网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞,由于其胞浆尚残存,嗜碱性物质在活体染色时可被染成蓝色细颗粒点网状结构,由于普通显微镜检查法受血涂片制备和主观因素影响,计数的精确性较差,20世纪90年代起,网织细胞分析仪相继问世,现已有多种检测原理相似的网织红细胞红细胞分析仪,血液分析仪网织红细胞检测原理有些血液分析仪,除了进行全血细胞计数以外,还可进行网织红细胞有关参数的检测,例如:用新亚甲蓝染色使红细胞RNA着色或用荧光染料对RNA进行染色,再加一种使红细胞内Hb溢出的试剂,使其成为“影细胞”以减低测试中的干扰。

血液分析仪器在计数细胞数量的同时,还提供细胞体积分布图形,横坐标为细胞体积大小,纵坐标为不同体积细胞的相对频率,这些用以表示细胞群体分布情况的曲线图形,称作细胞直方图。细胞直方图不仅给临床提供直观的检验结果,也为检验人员监控仪器工作状态及检测结果提供了直观图形。在分析血细胞直方图时,应注意的是,由于不同类型仪器设置的参数和应用的试剂不同,不同类型仪器直方图的图形也有差异,即使是同一份标本,其细胞直方图也有差异。而影响直方图变化的因素:①仪器的因素:凡影响细胞脉冲大小的因素,都可以使直方图发生变化,除血细胞本身体积大小外,其他如仪器的阈值,孔电压和脉冲的增益等都与脉冲大小有关系。②试剂因素:不同试剂在细胞计数过程中的作用不同,如稀释液的作用是在稀释血液的同时,也在一定时间内能保证细胞原有的体积不变,同时为细胞计数提供一个导电环境,溶血剂主要作用是测定血红蛋白和白细胞时,溶解红细胞,释放出血红蛋白,并且与之结合成稳定的血红蛋白衍生物,对白细胞可使用期费用其胞质渗出,胞体收缩,便于白细胞计数和分类。因此,试剂的性能的好坏,可直接影响细胞直方图的变化,如稀释液的导电率、渗透压、离子强度、溶血剂的种类、浓度、用量和溶血时间,都会干扰使细胞直方图发生改变。③操作人员技能因素:先进仪器的应用,必须有一套全面质量管理措施,也必须有高素质的技术人员,因此,应注重对技术人员的素质培养,操作人员上岗前要仔细阅读随机手册,如对仪器的原理操作规程,使用注意事项,异常报警含义,实验误差的因素及维护应有充分地了解,注意全程质量控制,根据质控图的变化及时对仪器进行调试,测试后依据临床诊断,直方图变化及各项参数,确认无误方能发出报告。

在临床试验上:①MCV和RDW可用于缺铁性贫血的早期诊断。②红细胞血红蛋白分布宽度是反映红细胞内HB含量异质性的参数,用单个红细胞HB含量的标准差表示。正常24~34g/L。遗传性球形红细胞增多症时RDW,HDW明显增高,属于小细胞不均一性高色素时贫血,HDW对镰形细胞贫血,β-轻型珠蛋白生成障碍性贫血也有一定的诊断意义。不同贫血红细胞体积的变化,使红细胞体积分布图形发生变化,例如:小细胞性贫血,RDW正常红细胞主峰左移,分布在55~100fl顶峰在75fl处,基底较窄,为典型小细胞均一图形,提示为小细胞低色素,见于轻型珠蛋白生成障碍性贫血。血涂片细胞体积变小,大小一致。由于红细胞与血小板的检测在同一通道,小红细胞和细胞碎片,血小板自身的聚集对血小板计数及平均血小板块构造学体积的影响很大,血小板直方图能反映这些变化,可根据图形的变化,了解血小板的准确性,白细胞直方图的变化,可评价血液中白细胞群体的变化,但这种变化的细胞图并无特异性,某一类白细胞的增多或减低均可使直方图产生相似的变化,也可以看出,引起虽然血液学变化的病因不同,细胞形态变化不一,但有的白细胞直方图变化相似,因此,异常白细胞直方图只能提示白细胞分群之间比例变化或可能出现异常细胞,故要求用显微镜复查血涂片。各类型的血液分析仪尚不具备识别红细胞、白细胞,和血小板形态的能力,因此,血液分析仪至今只能用作健康人血液一般检验的筛检之用,其结果可为是否需要进一步镜检提供筛检信息,故尚不能完全代替显微镜对各类血细胞的识别和分类检查。