陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性

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摘要：目的研究陈皮中黄酮类化合物的抗氧化性。方法用茜素紫作显色剂，分光光度法测定黄酮类化合物对Co2+ + H2O2 体系所产生的羟基自由基的消除作用。利用连苯三酚自氧化法测定陈皮中黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的消除作用。结果陈皮中黄酮类化合物对羟基自由基和超氧阴离子自由基有消除作用。结论陈皮中黄酮类化合物具有良好的抗氧化活性。

关键词：陈皮；黄酮类化合物； 超氧阴离子自由基； 羟基自由基

中图分类号：TS214.12文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)11-0022-03

Antioxidant Activity Detection of Flavonoids from Dried Orange Peel

ZHANG Rui-ju1, XING Gui-li 1, SUN Hai-bo2

(1.Shandong Institute of Commerce and Technology, Jinan 250103, China; 2.State Key Laboratory of Microbial Technology of Shandong University, Jinan 250100, China)

Abstract：Objective To study the antioxidant activity of flavonoids from dried orange peel. Methods The scavenging effect of flavonoids on hydroxyl free radical from the system of“Co2+ + H2O2”was detected by the spectrophotometric method with alizarin violet as colour-developing agent. The scavenging effect of flavonoids on superoxide anion free radical was detected by pyrogallol autoxidation method.Results The flavonoids from dried orange peel had a scavenging function to remove hydroxyl free radical and superoxide anion radical. Conclusion The flavonoids from dried orange peel have a good antioxidant activity.

Key words：dried orange peel; flavonoids; superoxide anion free radical; hydroxyl free radical

陈皮又名橘皮，为芸香科植物橘（Citrus reti-culata Bianco）及其栽培变种的成熟果皮，是我国传统的中草药之一，具有行气健脾，和胃止呕，燥湿化痰的功效。我国是橘类生产大国，但用于加工的柑橘还不到产量的10%[1]，并且，每年有占柑橘加工量一半的皮渣废弃不用。这不仅给企业造成了经济损失，增加了生产成本，而且给环境造成了负面影响。充分利用来源广泛、价格低廉的废弃橘皮资源，研究橘皮中黄酮类化合物的抗氧化活性，对提高橘皮的综合利用价值很有意义。

自由基对人体的损伤是致人体衰老的重要原因之一[2，3]。其损害作用主要体现在对生命大分子的损害。超氧阴离子自由基存在寿命长，可以从其生成位置扩散到较远处，达到靶位置，具有较大的危害性；羟基自由基是已知的最强氧化剂，它和几乎所有的细胞成分发生反应，对机体危害极大，与衰老、肿瘤、辐射损伤和细胞吞噬有关。陈皮含有丰富的黄酮类化合物，有较强的生理活性[4]。

本实验利用连苯三酚自氧化法测定陈皮中黄酮类组分对超氧阴离子自由基的消除作用[5，6]。以H2O2 作氧化剂， Co2+ 可与H2O2 作用通过类似Fenton 反应产生羟基自由基，茜素紫与其发生反应，其吸光度A560 nm 发生变化，从而间接测定黄酮类组分对羟基自由基的消除作用。

1仪器及试剂

UV2000 型紫外可见分光光度计（尤尼柯上海仪器有限公司），赛多利斯 BS/BT系列电子天平（北京赛多利斯仪器有限公司）；1.0 mmol/L CoSO4 溶液；pH 8.9 和pH 8.2 HCl-Tris 缓冲溶液；1.0 mmol/L茜素紫乙醇溶液；0.1 % H2O2 溶液；无水乙醇（AR）；3.0 mmol/L连苯三酚溶液。

2实验方法

2.1样品制备

陈皮自然风干，粉碎过40～60目筛。精密称取100 g陈皮粉末，75 %乙醇（加醇量为原料的8倍）浸提24 h，超声（功率100 W，频率40 kHz）处理20 min，10 000 r/min离心10 min，取上清液，收集沉淀再次浸提，重复3次，合并浸提液，浓缩成（50 mL）膏状，得样品液。取样品液1 mL定容至50 mL，得实验用黄酮类组分溶液。

2.2黄酮类化合物对羟基自由基的消除作用

实验采用茜素紫作显色剂的分光光度法，Co2+ +H2O2通过反应产生羟基自由基，茜素紫与其发生反应其吸光度A560 nm 减小。加入黄酮类化合物后，吸光度减小速度变慢，利用吸光度的变化间接测定黄酮类化合物对羟基自由基的消除作用。

2.2.1羟基自由基的A羟基的测定于10 mL 容量瓶中加入HCl-Tris（pH 8.9）3.0 mL + CoSO4溶液1.0 mL + 茜素紫1.0 mL + H2O2溶液1.0 mL，二次水稀释至刻度,摇匀。室温放置20 min，测得A羟基。

2.2.2黄酮类化合物对羟基自由基的消除及A加酮的测定于10 mL 容量瓶中加HCl-Tris（pH 8.9）3.0 mL + CoSO4溶液1.0 mL + 茜素紫1.0 mL +黄酮类组分溶液0.2 mL+ H2O2溶液1.0 mL，二次水稀释至刻度，摇匀。室温放置20 min，测得A加酮。

2.2.3参比溶液A参比的测定于10 mL 容量瓶中加入HCl-Tris（pH 8.9）3.0 mL + CoSO4溶液1.0 mL +茜素紫1.0 mL +黄酮类组分溶液0.2 mL，二次水稀释至刻度，摇匀。室温放置20 min，测得A参比。

2.3黄酮类化合物对超氧阴离子自由基的消除作用

实验采用连苯三酚自氧化法。在碱性条件下，连苯三酚发生自氧化，生成红碚同时生成超氧阴离子自由基（O2- .），通过320 nm 下的光吸收变化速率计算黄酮类化合物的消除作用。

2.3.1连苯三酚自氧化速率的测定 于10 mL 容量瓶中加入HCl-Tris（pH 8.2）3 mL + 连苯三酚溶液0.3 mL， 二次水稀释至刻度，摇匀。每隔30 s 测吸光度A0。

2.3.2 加入黄酮类化合物后连苯三酚自氧化速率的测定 于10 mL 容量瓶中加入HCl-Tris（pH 8.2）3.0 mL + 黄酮类组分溶液0.03 mL + 连苯三酚溶液0.3 mL，二次水稀释至刻度，摇匀。每隔30 s 测吸光度A1。

3结果

3.1自氧化法测试波长的选择

连苯三酚在pH 8.2的HCl-Tris 缓冲溶液发生自氧化反应，扫描后，发现在325 nm处表现为较大的吸收峰，且灵敏度比其它波段高，从而选择325 nm作为测试波长。

3.2黄酮类组分对羟基自由基的消除作用

按实验方法2.2.1测得A羟基为0.042，按实验方法2.2.2，2.2.3测得结果见表1，按公式（1）计算消除率。

由表1可见，黄酮类组分有消除羟基自由基的作用。

3.3黄酮类组分对超氧阴离子自由基的消除作用

按实验方法2.3.2，加入黄酮类化合物0.2 mL，测得结果见表2，黄酮类组分对超氧阴离子自由基的消除率（S）可由公式（2）计算。

公式（2）中k0 为连苯三酚自氧化速率, 即图1中曲线1 的斜率0.067；k1 为加入黄酮类组分时连苯三酚自氧化速率, 即曲线2 的斜率0.054。黄酮类组分的消除率 S = (0.067－0.054) / 0.067 ×100 % = 19.40 %。

结果表明，陈皮中黄酮类组分有消除超氧阴离子自由基的作用。

综上所述，陈皮含有的黄酮类化合物具有良好的抗氧活性，对陈皮进行深加工处理，从中提取黄酮类组分，将其作为天然的抗衰老保健品、食品抗氧化剂和具有辅助疗效的药物添加剂使用。

参考文献

[1]左锦静，陈复生，姚永志. 陈皮中黄酮类化合物的最佳提取工艺[J].食品研究与开发，2005，26（3）：61-64.

[2]Susana T, Christophe S, Carla A，et al . Structure-property studies on the antioxidant activity of flavonoids present in diet[J] .Free Radical Biol Med, 2005, 39（8）：1099-1108.

[3]Almaraz-Abarca N, da Graca Campos M, la-Reyes JA, et al.Antioxidant activity of polyphenolic extract of monofloral honeybee-collected pollen from mesquite (Prosopis juliflora, Leguminosae)[J]. J Food Compos Anal, 2007, 20(2)：119-124.

[4]罗建华，黄锁义. 益母草总黄酮的提取及其对羟自由基的清除作用[J]. 右江民族医学院学报，2006，（5）：710-712.

[5]回瑞华，侯冬岩，刘晓媛，等. 山楂果中黄酮化合物的光谱分析及抗氧化性能测定[J].食品科学，2006，27（1）：199-202.

[6]杨转琴，王磊，范娜，等. 柚皮黄酮化合物含量及抗氧活性的研究[J]. 食品科学，2006，27（4）：102-105.

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