油茶提取物杀灭淋球菌的实验研究

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摘要：目的：研究油茶果皮和油茶籽体外对淋球菌的杀灭作用，评价它们的抗性病作用。方法：按照2002年版卫生部颁发的消毒技术规范“消毒剂杀微生物实验”中的方法和操作程序进行试验，观察药物的抗性病作用。结果：油茶果皮60%丙酮提取物为50mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，不能杀灭淋球菌。油茶果皮30%醇洗脱物为50mg/mL时，可杀灭部分淋球菌。油茶果皮60%醇洗脱物为6.25mg/mL时，即可杀灭淋球菌。而油茶籽60%丙酮提取物在50mg/mL时，即可杀灭淋球菌。油茶籽85%醇洗脱物为50mg/mL时，亦可杀灭部分淋球菌。这一结果为将油茶进一步开发成抗淋病药物提供实验依据。

关键词：油茶；抗性病作用；淋球菌

中图分类号：C45 文献标志码：A ？摇文章编号：1674-9324（2013）48-0104-02

引发泌尿生殖系统的病原体是“淋病奈瑟氏菌”，俗称淋球菌。因为淋球菌对柱状上皮和移行上皮有较强的亲和力所以极易侵犯隐匿在女性泌尿生殖道中并引起感染；同时它拥有极强的抗药性，在我国它对青霉素的耐药率已经上升至60%以上。因此应继续广泛开发新型药物，为人类造福。目前，我们发现，在此研究领域中最有可能有此功效的属油茶籽。为将油茶进一步开发成抗淋病药物提供依据，我们下面会对油茶果皮和油茶籽体外杀灭淋球菌的作用进行一系列实验与观察。

一、实验部分

1.淋球菌标准菌株G，由WHO提供。2005年11月采自广西壮族自治区燕洞乡的油茶果皮和籽经大连大学中医中药系高松教授鉴定为Camellia oleifera Abel.，批号为20051101。

2.实验方法。第一步，供试样品制备。①油茶果皮60%丙酮提取物：称取油茶果皮1000g，60%丙酮-水回流提取3次，1h/次，合并提取液，回收溶剂至干，备用。②油茶果皮30%醇洗脱物：将油茶果皮60%丙酮提取物用蒸馏水混悬经大孔吸附树脂富集，然后用30%乙醇洗脱，将洗脱液回收溶剂至干，备用。③油茶果皮60%醇洗脱物：将油茶果皮60%丙酮提取物用蒸馏水混悬经D101型大孔吸附树脂富集，然后用60%乙醇洗脱，将洗脱液回收溶剂至干，备用。④油茶籽60%丙酮提取物：将榨除脂肪油的油茶籽再用石油醚脱脂三次，用60%丙酮-水回流提取剩余物3次，1h/次，合并提取液，回收至干，备用。⑤油茶籽85%醇洗脱物：将油茶籽60%丙酮提取物用蒸馏水混悬经大孔吸附树脂富集，然后用85%乙醇洗脱，将洗脱液回收溶剂至干，备用，即为油茶皂素（含量在95%以上）。第二步，实验。①检测依据：按照2002年版卫生部颁发的消毒技术规范“消毒剂杀微生物实验”中的方法和操作程序进行试验。②实验温度：20℃～25℃。③淋球菌悬液浓度：108cfu/ml。④样品的配制：根据不同的溶剂进行配制，其中油茶果皮60%丙酮提取物和油茶果皮30%醇洗脱物用无菌蒸馏水配置，油茶果皮60%醇洗脱物用甲醇配置，油茶籽60%丙酮提取物和油茶籽85%醇洗脱物均用90%甲醇和10%水的混合液配置。⑤甲醇的配制：用0.03mol/L磷酸缓冲液作倍比稀释。⑥作用时间：5分钟。⑦残留样品的去除：采用稀释法。

二、实验结果

1.甲醇对淋球菌的杀灭作用（见表1）。

2.残留消毒剂稀释法去除的鉴定试验（见表2）。

3.油茶提取物对淋球菌的杀灭作用（见表3）。

三、实验结论

1.将甲醇作1∶8稀释时，与淋球菌作用5分钟，不能杀灭淋球菌。

2.油茶果皮60%丙酮提取物浓度为50mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，不能杀灭淋球菌。

3.油茶果皮30%醇洗脱物浓度为50mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，可杀灭部分淋球菌。

4.油茶果皮60%醇洗脱物浓度为6.25mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，即可杀灭淋球菌。

5.油茶籽60%丙酮提取物浓度为50mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，即可杀灭淋球菌。

6.油茶籽85%醇洗脱物浓度为50mg/mL时，与淋球菌作用5分钟，可杀灭部分淋球菌。

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基金项目：本课题为大连市科技计划项目（编号：2007A13GX037）