扣带回脑区与癫痫大鼠学习记忆损害相关性分析

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【摘要】 目的 探讨扣带回脑区与癫痫大鼠学习记忆损害的相关性。方法 以海仁酸癫痫大鼠模型为研究对象即模型组，另设立模型对照组及空白对照组，运用Morris水迷宫对各组大鼠的学习记忆能力进行评价，运用免疫组织化学染色观察各组大鼠扣带回脑区CJun免疫活性。结果 模型组大鼠学习记忆能力明显降低，其扣带回脑区CJun免疫阳性细胞数目明显减少(P

【关键词】 扣带回；癫痫大鼠； CJun;学习记忆

The analysis of correlation between cingulate gyrus and the impaired learning memory of iepilepsy rat SONG Shilei,WANG Li,ZHAO Yong,et al.Department of Emergency Nearological,The Poeple’s Hospital of Weifang city,Weifang 261041,China

【Abstract】 Objective To investigate the correlation between the cingulate gyrus and the impaired learning memory of epilepsy rat. Methods Take the rat epilepsy models made by injecting kainic acid as the modle group, at the same time make model control group and blank control group. We observed the changes of animal models learning memory by Morris Water Maze. We observed the changes of animal models immunoreactivity of CJun in the cingulate gyrus by immunohistochemistry. Results The epilepsy models appeared obviously decreased learning memory.The immunoreactivity of CJun in the cingulate gyrus of epilepsy models was decreased obviously(P

【Key words】 Cingulate gyrus； Epilepsy rat；CJun；Learning memory

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作者单位：261041 山东省潍坊市人民医院急诊神经内科(宋石磊 赵勇)；潍坊市坊子区人民医院内二科(王莉)；大连医科大学生理教研室(张万琴) 癫痫是常见的中枢神经系统疾病之一。目前对于癫痫的研究主要还是采用动物模型，其中海仁酸(KA)所致的癫痫模型已广泛用于癫痫发作的研究，被认为是经典的癫痫动物模型［1］。长期以来对于癫痫所致学习记忆障碍的研究主要集中在海马脑区，并且肯定了海马脑区与癫痫学习记忆障碍的相关性，但是对于扣带会在这方面的研究甚少。本研究通过对难治性癫痫大鼠脑内扣带回脑区CJun免疫反应性变化的观察，初步探讨扣带回与难治性癫痫空间学习记忆障碍的相关性。

1 材料与方法

1.1 制备及分组 KA诱发癫痫急性发作及癫痫持续状态取20只大鼠，一次颈部皮下注射惊厥剂量(10 mg/kg, 2 ml/kg)的KA 诱发SD 大鼠出现癫痫急性发作及癫痫持续状态。癫痫的严重程度按Racine［2］描述的标准进行1~5级分级，在本实验中有12只大鼠有4级以上发作并呈持续状态，其中有5只死亡，7只存活大鼠被采用为癫痫模型即模型组。剩余未达到四级以上发作的10只大鼠有4只死亡，6只存活大鼠作为模型对照组，另取同批SD大鼠(n＝6)颈部皮下注射等容积(2.0 ml/kg)的生理盐水即为空白对照组。

1.2 Morris水迷宫行为学测定 SD大鼠在分组完成后30 d采用Morris水迷宫通过隐藏平台获得实验及空间搜索实验对大鼠的学习记忆能力进行测定。

1.3 灌流固定

1.3.1 4%水合氯醛400 mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，开胸暴露心脏。

1.3.2 16 g注射针头刺入左室尖部，止血钳固定，剪开左心耳，先后以0.9%氯化钠注射液200 ml和4%多聚甲醛400 ml先快速后缓慢进行灌注，至肝脏、四肢及头尾变硬。

1.3.3 断头取脑，于4℃4%多聚甲醛中后固定。

1.4 脑片制备及免疫组织化学实验 将固定好的鼠脑放入含30%蔗糖的磷酸缓冲液中4℃过夜，振动切片机切取50 μm厚的冠状脑片，PBS漂洗10 min×2，与1%BSA孵育30 min；加入第一抗体(CjunAb, 1∶ 500)4℃孵育过夜，PBS漂洗10 min×2；加入生物素化羊抗兔 (1∶ 400) 室温振荡孵育1 h，PBS漂洗10 min 2；与卵白素生物素复合物A:B:PBS(1∶ 1∶ 400)室温振荡孵育2 h，二氨基联苯胺(DAB)法显色；适时用0.01 m PBS终止反应；明胶裱片，风干；梯度酒精脱水：70%、80%、90%、95%、100%、100%酒精各脱水5 min；二甲苯透明，中性树胶封片、晾干。

1.5 图像分析 采用HPIAS系列彩色病理图文分析系统对CJun免疫阳性细胞进行定量计数，采用OlympusBX51型显微摄像系统对目标脑区进行摄像。分析方法:选取扣带回为目标脑区，分别在扣带回5个不同层面分别选取4个宽度 和高度分别为213、289 μm的计数区，在显微镜下进行观察，计数CJun阳性细胞数目，取其平均值。并分别摄片。

1.6 统计学方法 实验采用SPSS 11.5软件进行统计处理。免疫组化数据采用均数±标准差，各组脑片之间的免疫活性差异采用单因素方差分析；不同处理组间的两两比较采用单因素方差分析SNK法；检验标准为P

2 实验结果