改良光化学法动物血栓模型的建立

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摘要：目的：改良光化学法动物血栓模型的建立。方法：小鼠尾部静脉注射孟加拉红溶液，冷光源照射，在生物机能实验系统和微循环观测系统下观察小鼠耳廓静脉血管的血流速度变化及血管血流停止的时间变化。结果：随着冷光源照射时间的增长，小鼠耳廓血管血流速度明显减慢，到一定时间血管血流完全停止。结论：540nm冷光源照射已经注射孟加拉红的小鼠耳廓血管，能够造成小鼠耳廓血管的血流停止，可以建立以光化学反应为基础的动物血栓模型。

关键词：血栓；动物模型；冷光源；血流速度

中图分类号：R-33 文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2008)04-0814-02

血栓性疾病的发病率逐年增高,如何进行有效的诊断、预防和治疗,已为国内外普遍重视。在血栓性疾病的研究过程中,已经建立了许多动物血栓模型。因此建立与临床病理生理机制相似的血栓模型对于抗栓药物的研究是十分必要的[1]。在以往的国内外的相关报道中，光化学法动物血栓模型的建立各不相同，因此，根据笔者实验室自身的实验条件等各种因素，所建立的以光化学反应为基础的动物血栓模型所做的各项工作做如下报道。

1材料

1.1动物昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，由辽宁中医药大学动物实验室提供（合格证号：SCX（辽）2004-0018）。

1.2药品孟加拉红（四氯四碘荧光素钠，RB）由北京化工厂提供，批号：870627。阿司匹林（乙酰水杨酸）由Alfa Aesar提供，批号：A12488。

1.3仪器生物机能实验系统（BL-420S），微循环观测系统（AC85V-265V）， 冷光源（LGY-150）。

2方法与结果

2．1方法昆明种小鼠30只，随机分为3组：生理盐水组（Ⅰ）、阿司匹林组（Ⅱ）、孟加拉红组（Ⅲ）。Ⅰ组尾部静脉注射生理盐水0.2mL/20g，Ⅱ组尾部静脉注射孟加拉红溶液15mg/kg，Ⅲ组腹腔注射阿司匹林溶液10mg/kg 30min后，尾部静脉注射孟加拉红溶液15mg/kg，然后用0.3％戊巴比妥钠麻醉60mg/kg，将小鼠耳部平铺于生物机能实验系统和微循环观测系统的显微镜下观察并记录小鼠耳廓目标血管的血流状态，用波长为540nm的冷光源照射小鼠耳廓目标血管，观察并记录血流状态，以不同时间点血流速度及血流完全停止的时间作为评价血栓形成的指标。

2．2结果见表1、表2，图1，图2。

由表1可见，将小鼠腹腔注射10mg/kg的阿司匹林30min后，再用15mg/kg的孟加拉红溶液给昆明种小鼠尾部静脉注射，用冷光源照射后，孟加拉红组的小鼠耳廓血管的血流速度明显比阿司匹林组减慢的快，根据统计学原理，生理盐水组与孟加拉红组的比较P

由表2可见，阿司匹林组对光化学血栓模型的血流停止时间具有延缓作用。根据统计学原理，与孟加拉红组的比较P

3讨论

血栓动物模型的建立方法有很多，可分为物理损伤法和化学损伤法。物理损伤法包括机械损伤法、股动脉异物法、电流损伤法和结扎法；化学损伤法包括胰蛋白酶血栓形成法、过氧化氢血栓形成法、角叉菜胶血栓形成法、三氯化铁血栓形成法和光化学法。机械损伤法是依据血栓形成基本原理,在动物体内形成血栓,方法简便、易行,成功率100%,术后24h 即开始有血栓形成,也可用于制备静脉血栓模型，主要适用于动态观察血栓形成过程中血栓形态及血栓变化规律的研究、评价药物溶栓作用的实验研究及与形成和溶解血栓有关的其他实验研究[2]。股动脉异物法可靠易行,重复性好,血栓由血小板、白细胞及纤维蛋白构成。目前多用于血栓放射免疫显像方面的研究[3]。电流损伤法模型操作简单,但受动物年龄、环境温度等的影响较大,标准差较大,因而应用时有一定局限性[4]。结扎法一般在结扎后2h血栓形成率约为60%～80%,此时处死动物主要观察血栓形成百分率。6h后血栓形成率为100%,此时应观察血栓质量。此方法多用于判定溶栓药物的体内抗血栓作用[5-6]。胰蛋白酶血栓形成法所形成的血栓富含血小板和纤维蛋白,类似于临床上动脉血栓的形成。方法可靠,重复性好。用于抗血栓药物的筛选和研究[7-8]。过氧化氢血栓形成法所形成的血栓以白色血栓为主,符合动脉血栓的特征,可以用来探索防止血栓形成的方法[9]。角叉菜胶血栓形成法可为研究体内血栓形成全过程提供一个简便、直观的动物模型[10]。三氯化铁血栓形成法不足之处是动物的颧弓被去除,影响动物进食,不利于作长期观察等,此法还有待改进[11-12]。而光化学法是当今制造动物血栓模型比较前沿、先进的一种方法。光化学法和其他造模方法相比具有模型成功率100%，模型制作简单、快速、重复性好、短时间内即可制作较多的供各种研究目的使用的模型；模型动物存活时间长、动物死亡率低；避免了对动物血管和组织的机械性损伤；模型可造成血小板聚集及血管内皮细胞损伤，为抗血小板聚集药和抗血栓药物及预防血栓药物的研究提供可能性。因此，光化学法是实验过程中比较好的一种血栓造模方法。由于该模型的形成过程与人类脑血栓形成发病机制、血栓形成过程、损害程度较为相近,加之光照或光敏剂对血管本身无机械性的损害,与临床上的血栓性疾病的病理、生理上的发病机制极为相似，因而可广泛用于脑血管病的基础与临床研究,以及康复医学的实验研究[13-14]。但是，由于大部分的文献所报导的光化学法动物血栓模型的建立所需要的仪器设备基本上都是国外进口的，价格上比较昂贵，操作上比较严格，基于笔者实验室在科研经费上的不足以及实验条件的差距，选择可以建立以光化学反应为基础，操作简单、快速、方便、可靠、易行、价格低廉的动物血栓模型的方法是十分迫切的，也是有十分重要意义的，为临床和科研上关于血栓性疾病的研究提供重要的理论依据。

参考文献

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