MicroPET及MPO对大鼠ALI时肺内炎症反应评估效果的研究

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DOI：10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2014.04.011

基金项目：教育部博士学科点基金（20110101120125）；浙江省自然科学基金（LY12H15005）

作者单位：310009 杭州，浙江大学医学院附属第二医院急诊中心 急诊医学研究所

通信作者：江观玉，Email：

噬中性粒细胞造成的炎症反应是急性肺损伤（acute lung injury， ALI）突出的特点，失控的炎症反应是导致ALI、急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome， ARDS）甚至多器官功能衰竭综合征至关重要的原因[1-2]。中性粒细胞在肺内的过度聚集、活化后产生的大量炎症介质，以及肺泡上皮和肺泡内皮表面的过度损伤、肺血管通透性的增加，是ALI/ARDS的显著特点[3-6]。基于此，定量活化的中性粒细胞已成为评价ALI干预效果的重要研究手段。正电子发射计算机断层扫描（positron emissioncomputed tomography，PET）是从分子水映组织中的生化改变和代谢现象。在ALI时，大量的中性粒细胞被激活后摄取大量的葡萄糖，因为18F-FDG与葡萄糖具有相同的代谢途径，被活化的中性粒细胞摄取后，也能在PET上很好的显像。本研究通过应用micropet，定量ALI时活化的中性粒细胞，并与mpo进行对比研究，来评价ALI时肺内的炎症反应。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）购自美国Sigma 公司；18F-FDG为浙江大学医学PET中心合成； 戊巴比妥那购自中国医药集团上海化学试剂有限公司。

1.2 试验动物

Sprague-Dawley雄性大鼠，6周龄，30只，体质量180～210 g，清洁级，购自浙江大学医学院试验动物中心。

1.3 分组及处理

30只SD雄性大鼠，随机（随机数字法）分为3组，分别为LPS组（n=10）：LPS 5 mg/kg腹腔注射（intraperitoneally， IP）及16 h后生理盐水0.5 mL/kg气道内滴入（intratracheally， IT）；HCL组（n=10）：生理盐水1 mL/kg IP及16 h后HCL（pH=1.2，0.5 mL/kg）IT；LPS-HCL组（n=10）：LPS 5 mg/kg IP及16 h后HCL（pH=1.2，0.5 mL/kg）IT。在盐酸或生理盐水IT前，所有大鼠用戊巴比妥钠40 mg/kg腹腔注射麻醉，解剖大鼠股动脉，用静脉留置针（Y型，规格：24GA×0.75IN）行股动脉插管，接有创监测仪，对大鼠生命体征进行连续监测。4 h后行18F-FDG microPET胸部扫描，然后处死动物，取肺组织行组织病理学检查和MPO测定。

1.4 microPET扫描

生理盐水或盐酸气道滴入240 min后，对大鼠胸部进行microPET扫描。microPET扫描仪器型号为microPET R4，是美国CTI Concorde Microsystems产品系列，内有一电脑控制的动物床，扫描视野为 10.8 cm× 7.8 cm，空间分辨率

1.5 HE染色

大鼠戊巴比妥钠过量麻醉处死后，取出左肺，行HE染色。在光镜下观察病理改变，根据Lu等[7]制定的病理评分标准进行评分（没有中性粒细胞浸润为0分，轻微浸润为1分，中等量为2分，大量为3分）。此评分是由两位经验丰富的病理科医生完成，这些学者对实验的结果及分组并不知情。

1.6 MPO测定

MPO测试盒购自南京建成生物公司，所用酶标仪为美国DYNEX公司产品。严格按照试剂盒操作说明进行操作，计算出各组MPO值。

1.7 统计学方法

采用SPSS 17.0 软件分析。计量资料以均数±标准差（x±s）表示，两组间各个时间点数据之间的比较采用独立样本t检验。两变量之间相关性分析采用双变量相关分析（Bivariate）。以P

2 结果

2.1 microPET

取ROI在右肺和右上肢肌肉之间的比值进行比较，LPS-HCL组中此比值为 9.12±1.08，显著高于LPS组3.97±0.47（P

2.2 肺组织中性粒细胞计数评分

组织病理学检查发现在LPS组、HCL组和LPS-HCL组中都有不同程度的肺损伤，在三组中都可见到中性粒细胞浸润和出血，肺组织中性粒细胞计数评分在LPS-HCL组（2.80±0.42）显著高于HCL组（1.70±0.82，P

2.3 MPO

MPO值在LPS-HCL组中为 （3.53±0.31）U/g，显著高于LPS组（1.76±0.26）U/g（P