白木香叶总黄酮含量的跟踪研究
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【摘要】 本文对白木香叶在不同季节进行采摘， 对其叶子进行总黄酮的提纯和总黄酮含量的测定进行跟踪研究， 探讨白木香叶总黄酮含量最高的季节， 得出最优的采摘时间， 为6～9月份的中旬， 这段时间的总黄酮含量相对最高。通过进一步跟踪调查研究， 以最大限度的实现白木香叶的经济价值， 为广泛的开展该植物的种植技术提供必要的理论和现实实践价值。
【关键词】 白木香叶；测量总黄酮；跟踪对比；统计
DOI：10.14163/ki.11-5547/r.2017.15.114
Follow-up study of total flavonoid content in leaves of Aquilaria sinensis ZHANG Zhou-ying， CHEN Jian-hua， HUANG Qun， et al. Department of Pharmacy， Guangdong Province Maoming City People’s Hospital， Maoming 525000， China
【Abstract】 This paper is a follow-up study for total flavonoids purification and content measurement of leaves of Aquilaria sinensis when they are collected in different seasons. It is concluded that the best collecting time for leaves of Aquilaria sinensis is from June to middle of September， and the total flavonoids content is relatively high in this period. Further tracking survey research should be made to maximize the economic value of leaves of Aquilaria sinensis， so as to provide the necessary theoretical and practical value for extensive development of the plant cultivation technology.
【Key words】 Leaves of Aquilaria sinensis； Measure of total flavonoid； Tracking comparison； Statistics
沉香是白木香含树脂类代表木材， 属瑞香科植物。从其产地来看， 是广东本土药材。从中医辨证施治治疗思想来看， 该植物具有“温中补气、疏胃调肝、镇痛平喘”之功效[1]。白木香叶为白木香的非药用部位， 但其具有白木香功效的一些相同特点[2]， 本课题对其中所含的总黄酮含量进行了测定， 以期为白木香叶得出最优的采摘时间提供参考。本研究基于上述研究方略， 对实现白木香叶资源的综合利用， 具体报告如下。
1 材料来源
1. 1 仪器与试剂
1. 2 仪器 电子天平， SP-1900/SP-1920双光束紫外可见分光光度计， 超声波清洗机-AS20500BDT
1. 3 药品与试剂 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所， 批号：100081-200406）， 甲醇及乙醇均为色谱纯， 水为重蒸水。
2 方法c结果
2. 1 对照品溶液的制备 应用精准化芦丁对照品， 严格称量技术， 配置成0.251 mg/ml的60%乙醇合剂。
2. 2 供试品溶液的制备 精密称定供式样品0.5 g配比甲醇溶液50 ml后， 在超声环境下处理1 h。精密称定处理后的缺失重量， 同样补足等量甲醇溶液后， 进行摇匀过滤， 获得制备溶液。
2. 3 最大吸收波长的选择 在50 ml容量瓶中， 应用容量瓶吸取4 ml对照品溶液、3.0 ml 0.1 mol/L的AlCl3溶液， 5.0 ml 1.0 mol/L的KAc溶液， 以60 %乙醇稀释本品并摇匀， 置于刻度后止。处理过的本品， 静置40 min后， 应用超声波清洗机-AS20500BDT进行自动扫描， 扫描波长多在200～800 nm， 测定结果显示， 419 nm是测定的最大波长吸收值。见图1， 图2。
2. 4 标准曲线的制备 选取五种对照品溶液， 分别为0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ， 在50 ml容量瓶中分别精密吸取0、1、2、3、4、5 ml芦丁溶液， 同上述最大吸收波长等量的AlCl3溶液和KAc溶液的60%乙醇稀释混合溶液。以0试剂瓶中的空白溶液和上述最大吸收波长为界， 用SP-1900/SP-1920双光束紫外可见分光光度计测定各浓度吸光度。应用现象回归法方程公式计算回归方程， 见图3。
2. 5 精密度试验 应用SP-1900/SP-1920双光束紫外可见分光光度计在日前的实验研究阶段， 其精密度是其他测定仪器不能比拟的。曲线下重复测定6次， 显示测定均值RSD为0.28%。
2. 6 重复性实验 供试样品粉末， 等量6份， 按分光光度计的样品测定方法， 测定总黄酮含量0.2007%， 显示测定均值RSD为0.80 %， 为黄酮重现性效果理想。
2. 7 稳定性实验 样品溶液5 h内稳定试验中， 取供试品同样0.5 g粉末， 显色放置后， 每隔0.5 h测定一次， 连续30次样品测定方法测定。
2. 8 加样回收率实验 循证重复性试验中的研究数据， 供试样品共9份， 每份的重量0.25 g（精准称量）， 依照供试品溶液的制备策略， 应用200～800 nm扫描范围内最大吸收波长419 nm的曲线操作策略， 最后再分别加入混合溶液， 最后计算供试样品总黄酮含量。样品的平均回收率为98.40 %， RSD为1.07 %。上述测定白木香叶药材总黄酮含量的回收率较高， 取得了较好的回收效果。见表1。
2. 9 样品中总黄酮的含量测定 取不同采收期的药材样品， 照“供试品溶液的制备”项下方法进行制备， 按标准曲线操作方法， LAlCl3溶液和LKAc溶液的60%乙醇稀释混合溶液， 起依测定吸光度， 计算出样品中总黄酮的含量。见表2。
2. 10 白木香叶总黄酮含量不同月份的跟踪对比 在沉香的前期研究基础下， 本项目对白木香叶进行定期的采摘收集。并对每期叶子进行提取黄酮的数据收集。见表3。
2.11 通过高级统计学得出采摘白木香叶的最优时间 项目小组在组长带领下， 对沉香和沉香叶进行了大量的文献资料收集研究。通过走访药农， 上山考察， 查阅药典药籍， 收集各种有关白木香叶的文献资料， 进行大量的实验室试验。得出采摘白木香叶的最优时间为6～9月份的中旬。这段时间的总黄酮含量相对最高。见图4。
3 讨论
本研究用总黄酮含量的数据证明白木香叶是有巨大的科研价值和经济价值的。为白木香叶的产品（如袋泡茶）的进一步研发提供关键的指导数据。为白木香叶在制剂药品开发应用方面[如降血脂， 抑制血栓， 降压， 雌性激素样作用（异黄酮）， 抗病毒， 抑菌， 消炎， 保肝等]提供了实用的参考数据。
从白木香叶的药用价值来看， 以多糖、氨基酸、黄酮及其苷类、酚类为代表的生物活性产物[3， 4]对抑制炎性因子， 提升机体抗炎性因子水平[5-7]、解热疼痛[8]、在治疗便秘、肥胖、出血脑缺血、高血糖等方面具有良好的医用价值[9]、此外研究报告还证实其具有止咳平咳的特殊功效[10]近年间在抗肿瘤等方面的治疗中， 也获得了治疗的突破性进展， 其应用前景广阔。本项目只得出白木香叶总黄酮的最佳采摘时间为6～9月份的中旬， 其他有效成分尚需进一步跟踪研究。
参考文献
[1] 中华人民共和国药典委员会， 中华人民共和国药典（一部）.北京：化学工业出版社， 2005：12.
[2] 林焕泽， 吴秀荣， 陈建华， 等.白木香叶代泡茶的质量标准研究.中国医药导报， 2013， 10（29）：105-107.
[3] 张雪梅， 李力承， 邓李安.云南产白木香叶化学成分初探.中外健康文摘， 2009， 6（24）：266-267.
[4] 王红刚. HPLC法测定沉香叶中芫花素含量研究.中医药导报， 2008， 14（3）：69-70.
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[6] 林焕泽， 李红念， 梅全喜.沉香叶与沉香药材抗炎作用的对比研究.中华中医药学刊， 2013， 31（3）：548-549.
[7] Zhou M， Wang H， Suolangjiba， et al. Antinociceptive and anti-inflammatory activities of Aquilaria sinensis （Lour.） Gilg. Leaves extract. Journal of Ethnopharmacology， 2008， 117（2）：345-350.
[8] 李红念， 梅全喜， 林焕泽， 等.沉香叶与沉香药材镇痛作用的对比研究.时珍国医国药， 2012， 23（8）：1958-1959.
[9] 梅全喜， 李红念， 林焕泽.沉香叶与沉香药材降血糖作用的比较研究.时珍国医国药， 2013， 24（7）：1606-1607.
[10] 吴秀荣， 李红念， 梅全喜.沉香~与沉香药材平喘作用的对比研究.今日药学， 2013， 23（6）：346-347.
[收稿日期：2017-04-20]