1例粘多糖病ⅣA型儿童GALNS基因突变分析

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇1例粘多糖病ⅣA型儿童GALNS基因突变分析范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

[摘要] 目的 研究1例粘多糖病ⅣA型（mucopolysaccharidosis ⅣA，Morquio A，MPS ⅣA）患者的临床特点及N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶（GALNS）基因的突变。 方法 研究对象为1例散发粘多糖病ⅣA型患儿及50例正常儿童。分别取其外周血5 mL，提取DNA，应用聚合酶链式反应（PCR）扩增galns基因的全部14个外显子，应用正反引物对PCR产物进行基因序列直接测序。 结果 该患儿未发现GALNS基因致病突变。但是检测出2个GALNS基因多态性1431A>G、1569+36A>G。 结论 GALNS基因突变不是本研究中1例散发MPS ⅣA患儿的主要致病原因。

[关键词] 粘多糖病ⅣA型；GALNS基因；突变；分析

[中图分类号] R681.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2013）05（c）-0009-03

粘多糖病（mucopolysaccharidoses，MPS），是由于溶酶体内特定水解酶遗传性缺乏而导致糖胺聚糖（glycosaminoglycan，GAG）降解代谢障碍，代谢底物堆积，从而引起的一组具有相似表型的遗传代谢病。具体而言，是由体内降解糖胺聚糖的酶缺失或功能缺陷，导致未经完全降解的糖胺聚糖积聚在机体的不同组织，从而产生骨骼畸形、智能障碍等一系列临床症状和体征[1]。目前根据缺陷的酶及受累的代谢底物不同，将粘多糖病分为8型：MPS Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ，每型又分若干亚型。除MPSⅡ型（即Humer综合征）为X连锁隐性遗传外，其余均为常染色体隐性遗传[2]。其中MPS Ⅳ型又称Morquio综合征，于1929年由乌拉圭儿科医生Morquio和英国放射学家的Brailsford分别报道，包括MPS ⅣA（OMIM 253000）和MPS ⅣB（OMIM256540）两个亚型，分别由N-乙酰半乳糖胺-6-硫酸酯酶（GALNS）和β-D-半乳糖糖苷酶（β-gal）缺乏所致[3]。本组疾病因全身结缔组织均可有过多的粘多糖沉积，故可出现全身各系统的症状，主要表现为身材矮小、面容较丑陋，如表情淡漠、头大、眼裂小、眼距宽、鼻梁低平、鼻孔大、唇厚、前额及双颧突起、毛发多而发际低、颈短、下颌明显、不同程度的智力减退等。有的类型可出现角膜混浊、关节进行性畸形、胸廓畸形、脊柱后凸或侧凸、膝外翻、爪形手、早期出现肝、脾大、耳聋、心脏增大等[4]。根据所缺乏酶的不同，临床表现亦有所差异。本研究对1例散发MPS ⅣA患儿的临床特点及基因研究，结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

患儿，男，6岁，发现畸胸3年，身材矮小1年余。2012年7月3日入院，患儿系第1胎第1产，足月剖宫产出，头先露，出生体重2900 g，身长不详；无窒息史，生后母乳喂养。3个月时会翻身，9个月会走，说话，智力正常。3岁时家长发现前胸隆起明显，给予口服钙剂至今。近一年家长发现患儿生长发育落后于同龄儿，不伴智力低下、异常步态等。患儿父母非近亲婚配，其家族中未发现类似情况。查体：卧位身高101.1 cm，坐高89 cm，体重16.5 kg，身高和体重在同年龄同性别的第3百分位以下。智力正常，眼距宽，塌鼻梁，下颌前突，颈短，鸡胸，助缘外翻，脊柱右侧弯，心、肺、腹（-），四肢未见明显畸形。血Ca：2.43 mmol/L（正常：2.1～2.8 mmol/L），血P：1.62 mmol/L （正常：0.96～1.62 mmol/L），ALP：202 U/L（正常：40～110 U/L）。TSH：4.16 μIU/L（正常：0.17～4.20 μIU/L），FT3：7.77 pmol/L （正常：3.10～6.8 pmol/L），FT4：16.51 pmol/L （正常：10～23 pmol/L）。PTH：26.31 pg/mL （正常：15～65 pmol/L），肝肾功能正常。尿酸性黏多糖定性试验（甲苯胺蓝）阳性。X线检查：第10肋以下肋骨明显变宽，呈飘带样改变。椎间隙正常，椎体变扁，骨密度减低。两侧髂骨翼外展，髂骨体缩短，髋臼不规则，股骨干增粗，干骺端变细，骨质普遍稀疏。参加本研究的50名正常对照儿童群，均来自太原地区及周边地区。

1.2 研究方法

1.2.1 基因组DNA提取 经研究对象同意并签署知情同意书后，各取患儿及对照人群（包括患儿父母）外周血5 mL，用TIANGEN公司生产的血液基因组DNA提取试剂盒提取外周血基因组DNA。

1.2.2 引物设计 由http：///获得GALNS基因的14个外显子序列（NT-010542）及cDNA序列（NM-000512），参考文献[5]及使用primer 3软件设计覆盖GALNS基因14个外显子的14对引物，并委托北京诺赛基因组研究中心有限公司合成。

1.2.3 PCR扩增 对GALNS基因的所有外显子及其邻近内含子进行PCR扩增，反应体系为25 μL，包括25 mM MgCl2 1.5 μL、10×Taq buffer 2.5 μL、2.5 mM dNTP 2 μL、Taq DNA聚合酶1.25 U、5 pmol/μL正反引物各2 μL、基因组DNA 1 μL。反应条件：预变性94℃ 5min，变性94℃ 1 min，退火58～66℃ 30 s（退火温度由具体引物而定），延伸72℃ 1 min，共35个循环，延伸72℃ 10 min。取PCR产物3 μL，1.5%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，在GIS凝胶图像处理系统中观察其是否存在及其片段大小。

1.2.4 PCR产物直接测序 以PCR引物作为测序引物，委托北京诺赛基因组研究中心有限公司对PCR产物进行测序反应。反应结束后，对延伸产物进行DNA序列分析。对测序异常的片段重新进行PCR扩增，正向、反向测序3次，验证结果的可靠性。测序结果应用DNAStar软件包中的SeqmanTM软件及edit Seq软件与正常GALNS基因组序列进行对比，并用http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/snp数据库验证。