断血流分散片中断血流皂苷A的含量测定

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【摘要】 目的 测定断血流分散片中断血流皂苷A的含量。方法 采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(75∶25)为流动相；流速1．0 ml/min,检测波长为250 nm。结果 在此色谱条件下，线形范围为4．48~44．8 μg/ml，r=0．999 8，样品中断血流皂苷A平均回收率为101．8%，RSD=1．29%。结论 本方法灵敏度、回收率、准确度高，可控制断血流分散片中的含量测定。

【关键词】断血流；分散片；皂苷A；HPLC

Determination of the Saponin A contain inDuanxueliu Disperserpiece

YANG Jin-ling.Department of pharmacy,the hospital of Chinese Medical Shangdong,276002 China

【Abstract】 Objective Toestabish a method for the quantitative of Saponin A in Duanxueliu Disperserpiece by HPLC.Methods Used HPLC with Discovery C18column(4．6 mm×250 mm，5 μm),methanol-H2O(75∶25)as mobile phase,the UV detection wavelength was 250 nm.Results Under the chromatograph conditions,a good linearity was obtained in the range of 4．48~44．8 μg/ml(r=0．9998)for Saponin A and the average method recoverywas 101．88% with RSD=1．29%.Conclusion This method was simple,rapid,accurate reliable and suitable for the quality control of Duanxueliu Disperserpiece.

【Key words】Duanxueliu;Disperserpiece;Saponin A;HPLC

断血流[1]为70年代从民间验方筛选,经临床验证后被国家药典录入的少数几个单味药之一,其疗效确切,安全性高,临床上断血流制剂广泛用于治疗各种出血、单纯性紫癜、原发性血小板减少性紫癜等症[2],口服固体制剂是其常用的药物剂型之一。在现行版药典中，断血流项下尚没有含量测定项，近年来对其原药材及制剂的质控研究也有报道[3-4]。为了使制剂安全有效，质量可控，本文以醉鱼草皂苷Ⅳb的含量为指标，采用高效液相色谱法，对断血流分散片的质量进行控制。

1 仪器与试剂

1．1 仪器 高效液相色谱仪(SPD-10Avp检测器，LC-10ATvp溶剂输送泵，岛津仪器有限公司)，配有ANASTAR色谱工作站；Discovery C18柱，4．6 mm×250 mm，5 μmTU-1901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)；KQ2200型超声波清洗器(功率250W，频率 59 kHz，昆山市超波仪器厂)；BS210S分析天平(d=0．1 mg，北京赛多利斯仪器有限公司)。

1．2 试药 断血流皂苷A对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：110782-200301。

甲醇为色谱纯，默克(MERCK)公司(德国)提供；水为超纯水；其他试剂为分析纯。

供试品：山东大陆医药研究院制剂中心提供，批号：060405、060406、060407。

2 色谱条件

十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇-水(75：25)为流动相；流速1．0 ml/min,柱温为35℃；检测波长为250 nm。理论塔板数按断血流皂苷A峰计应不低于2 000。进样量20 μl。

3 试验方法

3．1 对照品溶液的制备 取断血流皂苷A对照品适量，精密称定，加75%甲醇溶液配制浓度为0．020 mg/ml的对照品溶液。

3．2 供试品溶液的制备 取断血流分散片20片， 研细， 取2．0 g，精密称定，置50 ml容量瓶中，精密加入流动相30 ml，超声处理30 min，放冷，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2 ml，置10 ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3．3 线性关系考察 精密称取经五氧化二磷干燥过夜的断血流皂苷A对照品11．2 mg，置50 ml量瓶中，用流动相溶解，并稀释至刻度，摇匀。分别精密量取1．0、2．5、5．0、7．5、10．0 ml对照品溶液置50 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。分别精密量取上述溶液各20 μl，注入色谱仪，按照上述色谱条件进行试验，记录色谱图，计算主峰面积；溶剂无干扰。对数据进行线性回归，得回归方程：y=36 714x+6 826．8，R=0．999 8，可见断血流皂苷A在浓度4．48~44．8 μg/ml范围内线性关系良好。

3．4 稳定性考察 取供试液(批号：060405)，精密量取20 μl，分别于0、2、4、6、8 h进样，记录色谱图，计算峰面积，结果表明：供试品溶液在8 h内稳定，能满足测定要求。

3．5 精密度试验 精密量取线性浓度下22．4 μg/ml的对照品溶液，连续进样5次，每次各20 μl，记录色谱图，计算峰面积，测得断血流皂苷A的平均峰面积为804 513．2，RSD=0．48%。

3．6 重现性试验 平行取同批样品(批号：060405)5份，按供试品制备方法处理，并测定含量，结果断血流皂苷A含量为2．58 mg/g，RSD=0．92%。

3．7 加样回收试验 取已知含量的同批样品(批号：060405，含量：2．58 mg/g)约1．0 g，5份，精密称定，各加入断血流皂苷A对照品2．26 mg(配成0．226 mg/ml的对照品，精密加入10．0 ml)，按供试品的制备方法制备供试品，依次测定各份样品中断血流皂苷A的含量，计算加样回收率。结果平均回收率为101．8%，RSD=1．29%。结果见表1。

3．8 样品含量的测定 取各批号的断血流分散片按3．2项下方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行含量测定，结果见表2。

4 讨论

4．1 采用高效液相色谱法测定断血流分散片中断血流皂苷A的含量，灵敏度高，精密度、重现性、加样回收率均较好，方法准确、简单，专属性强，可有效控制制剂质量。

4．2 提取方法的选择 本实验曾采取多种方法处理样品，结果一本文拟定的方法最好，且操做简便易行，故选用该法。

4．3 检测波长的选择 文献报道断血流皂苷A在250±2 nm处有最大吸收，本实验取断血流皂苷A对照品加75%甲醇溶液配制浓度为0．020 mg/ml的对照品溶液，在200~400 nm波长处进行扫描。扫描结果显示对照品溶液在250 nm处有最大吸收，这与文献报道相一致，同法测定阴性样品在250 nm处无干扰，故实验采用250 nm作为检测波长。

参 考 文 献

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).化学工业出版社,2005:60.

［2］ 蒋凌云,刘圣.断血流研究进展.基层中药杂志,1999,13(3):48.

［3］ 徐国兵,方晓明,樊和平.高效液相色谱测定断血流颗粒中断血流皂苷的含量.中国药学杂志,2005,40(2):317.

［4］ 梁爱君,邓英贤,张传霞.HPLC法测定断血流中断血流皂苷A的含量.药学学报,2006,22(3):217-219.