副干酪乳杆菌N1115的耐酸耐胆盐特性研究
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摘 要：本研究对从内蒙古传统发酵乳制品中获得的副干酪乳杆菌n1115（Lactobacillus paracasei N1115）和从市场发酵乳中分离的18株乳酸菌进行了耐酸性（pH2.0）和耐胆盐（pH8.0）特性的研究，结果显示，酪乳杆菌N1115与商业菌株相比，在耐酸耐胆盐特性方面具有明显的优势，具有良好的益生菌开发潜质。
关键词：乳酸菌耐酸耐胆盐
前言
目前，某些乳酸菌（益生菌）的肠道菌群调节作用被广泛研究[1]，它们在人体肠道内可有效地抑制有害菌的生长，减少由于肠内腐败引起的毒素对整个机体的毒害，对有效抵抗肠道感染、抗腹泻、调节胃肠道功能，减轻腹胀、腹泻、便秘等具有重要作用。然而，并不是所有的乳酸菌都有这些功能，只有活着到达肠道的乳酸菌才能发挥这些益生特性。人体胃肠道中的胃酸、胆汁等物质，构成了一道天然的屏障，大多数微生物在通过消化道时会被胃酸及肠道消化液杀死。
内蒙古是我国的传统牧区，酸奶和奶酪是当地牧民的主要食物来源。传统的奶制品加工方法经过数百年的优化，筛选，较好地保存了当地自然环境中的有益乳酸菌，是天然的乳酸菌贮存库[2]。本实验将从内蒙古农户家中分离的菌株N1115进行了API50鉴定，并将其与其他商业菌株进行比较。结果显示，本实验室自行筛选出的副干酪乳杆菌N1115菌株具有良好的耐酸和耐胆盐特性，其耐酸和耐胆盐的能力远远高于其他的商业菌株。
1 材料
自有菌株：本实验室研发人员自行筛选得到，源自内蒙古四子王旗等地牧民家庭采集的按照传统工艺条件生产的酸奶及奶酪制品；
商业菌株：本实验室研发人员自行筛选得到，源自目前市售的酸奶样品；
培养基：MRS(固体，液体)实验室自制；
试剂：pH2.0磷酸缓冲液（约pH2.0）；3‰猪胆盐溶液（约pH8.0）。
1）pH2.0溶液的配制
甲液：取磷酸16.60毫升，加水至1000毫升，摇匀；
乙液：取NaHPO471.63克，加水至1000毫升；
取上述甲液72.50毫升，与乙液27.50毫升混合，摇匀即得。
2）pH8.0溶液的配制
3‰猪胆盐溶液；
主要仪器：生化培养箱SPX-250BS-Ⅱ，上海新苗医疗器械制造有限公司；
超净工作台SW-CJ-2FD，上海新苗医疗器械制造有限公司。
2 实验方法及流程
2.1 试验方法
1）菌株鉴定
应用API50进行菌种鉴定。
2）菌株增菌：挑取一接种环的菌株，接入到液体MRS培养液中。37℃，48h培养。
3）将增菌后的菌株用无菌移液器吸取1mL加入到耐酸培养液中，37℃，2h后取出，立即做梯度稀释（稀释液为8.5‰的无菌生理盐水）。选取合适的稀释度，吸取1mL稀释液，MRS混平板培养，37℃，48h培养后，计数，记录结果。
4）将增菌后的菌株用无菌移液器吸取1毫升加入到耐胆盐培养液中，37℃，6h后取出，立即做梯度稀释（稀释液为8.5‰的无菌生理盐水）。选取合适的稀释度，吸取1mL稀释液，MRS混平板培养，37℃，48h培养后，计数，记录结果。
5）在做2）、3）试验的同时，用增菌液1）做梯度稀释（稀释液为8.5‰的无菌生理盐水）。选取合适的稀释度，吸取1mL稀释液，MRS混平板培养，37℃，48h培养后，计数，记录结果。
2.2 试验流程
3 结果
3.1 菌株的API50鉴定结果
本研究对从内蒙古天然发酵乳制品中分离的菌株N1115进行了API50鉴定，结果与初步鉴定结果一致，为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei），具体鉴定结果如表1所示。
3.2 耐酸耐胆盐试验
对副干酪乳杆菌N1115（Lactobacillus paracasei N1115）和商业菌株进行耐酸耐胆盐实验，不同的菌株对酸和胆盐的耐受性存在很大的差异。有些菌株只能耐受酸液，不能耐受胆盐，如C101，C701，C702，W102等，其中C101，经酸液处理后的存活比例为32.19‰，但是经胆盐处理后的存活率却小于0.01‰；有些菌株只能耐受胆盐，不能耐受酸液，如C204，W106，W115，W120等，其中C204经胆盐溶液处理后的存活率为26.95‰，但是经酸液处理后的存活率却小于0.01‰；有些菌株既能耐受酸液又能耐受胆盐，如N1115，是所筛选菌株中具有较高耐酸和耐胆盐水平的菌株，尤其在酸液处理后的存活率能达到22.92‰，在胆盐溶液处理后的存活率也能达到0.83‰。（如表2所示）。
4 讨论
本研究中的菌株N1115是从内蒙古四子王旗等地农户家中采集的酸奶样品中分离的菌株，该菌株初步鉴定为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei），本研究中经API50对其进行了进一步验证。副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）广泛存在于传统的发酵乳制品和人体胃肠道中[3]，目前的研究发现，副干酪乳杆菌可增强宿主对微生物病原体的非特异性抵抗力，加快肠道内病原体的清除；能够治疗肠道菌群紊乱和肠道通透性增强，从而防止食物过敏和急性腹泻；使抗低密度氧化脂抗体和CD4T-淋巴细胞增加，粒细胞的噬菌作用明显增强，对宿主进行免疫调节，防止肿瘤的产生等作用[4,5,6]。
本研究中其它菌株菌从市场发酵乳中分离获得，商业菌株取自市售商品。经过试验，副干酪乳杆菌N1115
在耐酸、耐胆盐特性方面远好于商业菌株，具有良好的耐受能力。实验结果提示Lactobacillus paracasei N1115具有耐受人体内的消化环境的潜质，生长特性符合益生菌发酵食品的要求，具有作为益生菌的良好潜质，可以应用于酸奶，酸奶饮料及豆类，谷物等乳酸发酵制品中。其作为益生菌调节人体肠道菌群平衡、增强免疫功能、预防疾病等方面有着广阔的发展前景。
参考文献
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[2]孙天松,刘红霞,倪慧娟等.传统发酵酸驼乳中乳酸菌的分离及鉴定[J].中国乳品工业,2006,34(9):4-7.
[3]庄海霁,雷虹,张铁丹等.副干酪乳杆菌的应用研究进展[J].生物技术通讯,2006,17(6):989-991.
[4]JAHREIS G,
VOGELSANG H,KIESSLING G,et al.Influence of probiotic sausage (Lactobacillus paracasei on blood lipids and immunological parameters of healthy volunteers [J].Food Research International,2002,35(2-3):133-138.
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