HPLC法测定接骨七厘片中阿魏酸的含量

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【摘要】目的 建立接骨七厘片中阿魏酸的含量测定方法方法 应用hplc法，采用shimpack vp-ODS色谱柱（4.6mm×150mm）；流动相为乙腈-0.085%磷酸（17：83）流速为1.0ml・min-1；检测波长：316nm。结果 峰面积对进样量的回归方程为Y=1634758X+251.71，r=0.9999(n=5),阿魏酸的进样量在0.096~0.48μg范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.59%( n=5),RSD=1.05%。结论 该方法简便可行，准确可靠。

【关键词】接骨七厘片 阿魏酸 HPLC法 含量测定

中图分类号：R286 文献标识码：B 文章编号：1005-0515（2011）10-355-02

Determination of Ferulic acid in Jiegu Qili tablets by HPLC

【Abstract】Objective To established the determination method for ferulic acid in Jiegu Qili tablets.Methods HPLC was used with Shimpack vp-ODS column; mobile phrase: acetonitrile-0.085％phosphoric acid (17:83); flow rate : 1.0 mL・min-1. detection wavelength at 316nm. Results The regression equation of peak area and concentration was Y=1634758X+251.71,with r=0.9999(n=5). The linear range was 0.096~0.48μg, the average recovery was 98.59%(n=5) RSD=1.05% . Conclusion The method is sensitive and convenient.

【Key words】Jiegu Qili tablets Ferulic acid HPLC determination

接骨七厘片是由当归、乳香（炒）、没药（炒）、土鳖虫、大黄（酒炒）、龙血竭、骨碎补（烫）、自然铜（锻）、硼砂9味中药组成，具有活血化瘀，接骨止痛的功能，用于跌打损伤，续筋接骨，血瘀疼痛。其质量标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第三册，该标准只收载了鉴别和检查项目，未收载含量测定项目，为了控制其质量，通过研究，并参考有关文献，用HPLC法测定该制剂中阿魏酸的含量，方法简便可行，准确可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津LC-10ATvp液相色谱仪，SPD-10Avp紫外可见检测器，CS-light色谱工作站。

1.2 试药 阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号：0773―9910，甲醇（色谱纯），水为重蒸纯化水，其他试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 shimpack vp-ODS色谱柱（4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.085%磷酸(17：83)；检测波长：316nm；流速：1.0mL・min-1 。

2.2 供试溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品5.0mg,置25ml棕色瓶中，加70%甲醇使溶解并稀释至刻度，要匀，精密量取3ml，置50ml棕色瓶中，加70%甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL含阿魏酸12μg）。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20片除去包衣，精密称定，研细，混匀，精密称取粉末1.6g ，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用70% 甲醇补 足减失的重量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 缺味阴性供试品溶液的制备 取除当归以外的处方中药材，按标准制法制备不含当归的缺味阴性供试品，参照供试品溶液制备方法制备缺味阴性供试品溶液。

2.3 系统适应性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液、缺味阴性供试品溶液各10μL注入色谱仪，记录色谱图，结果供试品与对照品溶液在同一保留时间内出现吸收峰，阿魏酸峰的保留时间约为10min，阴性对照溶液在此时无吸收峰（见图1）。即本试验条件下阿魏酸与其他组分分离完全，其他组分对测定无干扰。

A．阿魏酸对照品

B．供试品

C．阴性对照品图

1阿魏酸HPLC色谱图

2.4 线性关系考察 分别精密量取对照品溶液（24μg /ml）1.0，2.0，3.0，4.0,5.0mL置于5.0mL容量瓶中，用70%甲醇稀释至刻度。分别取20μL进样，测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标，进样量X（μg）为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程Y=1634758X+251.71，r=0.9999(n=5)。结果表明阿魏酸在0.096~0.48μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 依上法对同一对照品溶液（12μg.ml-1）连续进样6次，测定结果RSD=0.78%。说明仪器的精密度较好。

2.6重现性试验 取同一批号样品5份，按“2.2.2”项供试品溶液制备及样品的测定项下方法操作，测定值RSD=0.57%，说明方法的重现性较好。

2.7稳定性试验 将对照品溶液进样测定后，再每间隔2h测定一次，峰面积值RSD=0.91%（n=5）。说明样品稳定性好。

2.8 回收率试验 精密称取已知含量(0.09841mg/g)的样品（批号：050903）细粉5份，分别加入阿魏酸对照品溶液（0.mg.ml-1）5mL，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，分别进样，计算加样回收率，结果见表1。

表1 阿魏酸回收率试验结果

2.9 样品含量测定 分别取对照品溶液与供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标峰面积法计算样品溶液中阿魏酸的浓度。结果3批样品（批号分别为050903,051001,051202）中阿魏酸含量分别为0.0364,0.0383,0.0405mg/片, RSD分别为0.47%，0.69%，0.87%。

3 讨论

3.1 当归是本处方的主药，其主要有效成分之一为阿魏酸，故选择阿魏酸作为含量测定的指标成分，既有较强的科学性，又有实际工作中的可操作性和经济性。

3.2 阿魏酸遇光易分解，随着时间的延长，

色谱中杂质峰明显增高，整个实验应注意避光操作。

参考文献

[1]王兰，杨芳.高效液相色谱法测定川芎茶调丸中阿魏酸含量[J].现代中医药杂志，2004（1）：60-62.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005年版一部：89.