膻中穴埋线对哮喘豚鼠气道炎症的影响

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摘要 目的：观察膻中穴埋线对哮喘豚鼠气道变应性炎症的影响。方法：将40只豚鼠随机分为膻中埋线组、后三里埋线组、臀部非穴区埋线组、哮喘模型组和空白组，以卵蛋白致敏激发制备哮喘动物模型，各组豚鼠分别在致敏后给予相应治疗措施。抗原攻击，激发哮喘发作，记录动物引喘潜伏期，对支气管－肺泡灌洗液进行嗜酸性粒细胞计数，测定肺组织中白细胞介素－5（IL－5）含量。结果：膻中埋线能明显延长豚鼠卵蛋白过敏性哮喘的引喘潜伏期，抑制肺组织中嗜酸性粒细胞浸润，降低哮喘豚鼠肺组织中IL－5的含量。结论：膻中埋线对豚鼠卵蛋白过敏性哮喘气道变应性炎症具有抑制作用。

关键词 豚鼠 支气管哮喘 膻中埋线疗法 嗜酸性粒细胞 白细胞介素－5 实验研究

膻中埋线用于临床防治支气管哮喘已有数十年历史，并且取得了比较满意的临床疗效。埋线后不但可以减轻患者急性发作期症状，而且发作的频率也可明显降低。有关该疗法的文献报道多集中于临床疗效的观察，而对膻中埋线通过怎样的机制达到预防和治疗的双重功效却很少结合现代医学理论给予更加客观、具体的说明。本项课题基于现代医学对哮喘发病机制和防治原则的认识，观察膻中埋线后，哮喘模型肺组织中与哮喘发作密切相关的炎性细胞、炎症介质含量的变化，意在揭示膻中埋线防治支气管哮喘的机理。

1 实验材料

1．1 动物：荷兰种白色豚鼠，雌雄各半，普通级，体重180～240g，浙江中医药大学实验动物中心提供（动物合格证号：220010004），并由该中心负责饲养。

1．2 主要试剂：卵蛋白：由美国Sigma公司提供，批号：0304；豚鼠白细胞介素－5酶联免疫试剂盒：大连泛邦生物工程公司生产。

1．3 主要仪器：402型超声雾化器：上海四菱医疗器械厂生产；318MC型酶标仪：上海三科仪器有限公司生产；TL―4．5R冷冻离心机：上海利兴机械技术服务公司生产；XSZ―107型显微镜：重庆光学仪器厂生产。

2 实验方法

2．1 分组与造模［1］：将40只豚鼠随机分为5组，即膻中埋线组（膻中组）、后三里埋线组（后三里组）、臀部非穴区埋线组（非穴区组）、哮喘模型组（模型组）和空白组，每组各8只，雌雄各半。造模组：即膻中组、后三里组、非穴区组和模型组。将2%卵蛋白生理盐水溶液在动物两后腿肌肉丰厚处各注射0．5ml,同时腹腔注射1ml致敏。致敏后第15天，将豚鼠放入自制体描箱内，以402型超声雾化器恒压喷入1%的卵蛋白30秒，将动物放置在其中至出现明显的腹肌收缩、点头呼吸时从中取出（以360秒为观察的最长时限）。致敏后第18天，以同样方法再次激发哮喘发作。空白组：以等量的生理盐水代替卵蛋白抗原液，用同样方法对动物进行致敏和激发。

2．2 埋线治疗：治疗组包括膻中组、后三里组、非穴区组。方法：致敏后第8天，剪取长约0．5cm的00号羊肠线穿入7号注射器针头内，并去针尖后消毒，规格为0．30×50mm的针灸针从注射器针头后部抵住羊肠线，将针头平刺或斜刺入各组相应部位约0．5cm（膻中组采用捏起皮肤平刺的方法，后三里组和非穴区组采取斜刺），然后缓慢退出注射器针头，再拔出针灸针。取穴参照“豚鼠针灸穴位图谱”［2］。非治疗组包括模型组和空白组，不给予任何治疗。

2．3 观察指标：有如下数项。

2．3．1 引喘潜伏期测定：记录从喷雾开始到出现明显的腹肌收缩等症状的时间，即动物的引喘潜伏期（以360秒为最长观察时限，若超过360秒动物仍未出现明显的用力呼吸征象，引喘潜伏期按360秒记）。

2．3．2 支气管―肺泡灌洗液（BALF）细胞总数和嗜酸性粒细胞计数［3］：各组动物均在引喘潜伏期测定结束后，以2%戊巴比妥钠麻醉，处死，将Hank’s液缓慢注入左支延长

气管―肺泡腔内，缓缓回抽，反复注抽3次（回收率可达75%以上）。收集灌洗液1．5ml放入一次性离心管中，1500转/分，4℃下离心10分钟，弃上清液，细胞沉淀用1mlHank’s液重悬，检测BALF中嗜酸性粒细胞计数。

2．3．3 白细胞介素－5（IL－5）含量测定：灌洗结束后，剪取右侧肺（未灌洗侧）上叶，以生理盐水冲净表面血液，滤纸吸干，剪取一定量的肺组织，准确称量，按照每100mg肺组织加1ml生理盐水，进行冰浴中匀浆，然后4000转/分，4℃下离心20分钟，取上清液，贮于-20°C冰箱待测。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肺组织中IL－5含量，按照试剂盒说明进行操作，根据吸光度（OD）值计算出标本中IL－5含量。

2．4 统计学处理：选用SPSS11．5统计软件进行数据统计。计量资料用均数±标准差（x±s）表示；组内及组间均数比较均采用t检验，取P

3 结果

3．1 对豚鼠卵蛋白过敏性哮喘的抑制作用：详见表1。膻中组的引喘潜伏期较模型组和非穴区组均明显延长（P均

3．2 对过敏性哮喘豚鼠气道炎症的抑制作用：有如下数项。

3．2．1 对BALF中嗜酸性粒细胞计数的影响：详见表2。膻中组较模型组显著减少（P0．05）。表明膻中和后三里埋线均可有效地减少嗜酸性粒细胞在肺组织的聚集，对炎症细胞的浸润起到很好的抑制作用。

3．2．2 对肺组织中白细胞介素－5（IL－5）含量的影响：膻中和后三里埋线均可降低哮喘豚鼠肺组织中IL－5的含量，膻中组、后三里组与模型组比较均有非常显著性差异（P均0．05）；膻中组与后三里组比较无显著性差异（P>0．05）。提示：膻中和后三里埋线都能抑制肺组织中IL－5的合成。结果详见表3。

4 讨论

支气管哮喘是慢性气道炎症性疾病，嗜酸性粒细胞是引起气道变应性炎症的关键细胞。本实验表明：膻中和后三里埋线可以显著降低支气管―肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞数量，提示膻中穴和后三里穴埋线能有效地抑制哮喘豚鼠气道炎症。研究资料表明，白细胞介素－5是产生特异性嗜酸性粒细胞增多症主要的细胞因子。给小鼠和豚鼠静脉注射重组IL－5可引起骨髓和血液中嗜酸性细胞增多症［4］。本实验结果也显示膻中和后三里埋线都可降低肺组织中IL－5的含量，与模型组比较有非常显著性差异。提示，膻中埋线和后三里埋线疗法可能主要是通过降低肺组织中IL－5的水平，抑制肺组织中嗜酸性粒细胞浸润，发挥抗豚鼠卵蛋白过敏性哮喘气道变应性炎症的功效，从而对过敏性哮喘起到很好的防治作用。

5 参考文献

［1］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.第3版.北京：人民卫生出版社，2002：1417－1418.

［2］李忠仁.实验针灸学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：325－326.

［3］李影林.中华医学检验全书［M］.北京：人民卫生出版社，1996：199－204.

［4］谢强敏，方理本，张洪泉.药理学前沿［M］.北京：科学出版社，2003：117－118.

收稿日期 2007－03－23

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