疏肝和胃丸对应激大鼠胃黏膜组织血清EGF和TGFα含量的影响

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摘要：目的：观察疏肝和胃丸对应激大鼠胃黏膜组织及血清egf和tgfα含量影响。探讨该方对胃黏膜的保护作用机制。方法：采用冷水一束缚应激性胃黏膜损伤大鼠模型，在预先给予疏肝和胃丸混悬液给动物灌胃7d后，观察胃黏膜组织及血清EGF和TGFα含量的变化。结果：疏肝和胃丸能显著提高大鼠胃黏膜及血清EGF、TGFα含量。结论：疏肝和胃丸对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜保护作用机制可能与激发体内合成和释放内源性EGF、TGFα，促进胃黏膜的新生修复有关。

关键词：疏肝和胃丸；应激性胃黏膜损伤；EGF；TGFα

中图分类号：R285.5

文献标识码：A 　文章编号：1673-7717(2007)12-2611-03

1.材料和方法

1.1动物

Wistar大鼠180～220g，40只，清洁级，雄性，由湖南中医药大学实验动物中心提供。

1.2药物和主要试剂

疏肝和胃丸干浸膏粉，每克含生药11.57g，由湖南中医药大学第一附属医院药剂科提供。雷尼替丁胶囊，0.15g/粒，杭州民生药业有限公司。批号：20030327。EGF放免分析试剂盒、TGFα放免分析试剂盒均由北京华英放射免疫技术研究所提供。批号为040309。

1.3动物造模方法 　参照文献介绍的造模方法，采用水浸束缚应激(WRS)制作应激性溃疡模型。各组动物于造模前禁食不禁水24h，将大鼠束缚于固定器竖立浸入20℃(±1℃)的恒温水箱中，水面齐大鼠剑突水平，持续10h后取出动物。

1.4给药方法

造模前疏肝组每只动物经体表面积换算后将疏肝和胃丸按1.08g/(kg・d)溶于2mL生理盐水中灌胃(相当正常人体剂量的2倍)，每日1次，连续7天。雷尼组每只动物经体表面积换算后将雷尼替丁按0.0015g/(kg・d)溶于2mL生理盐水中灌胃(相当正常人体剂量的1倍)，每日1次。连续7天。正常组、模型组2mL生理盐水灌胃，每日1次，连续7天。

1.5检测样品的制备方法

1.5.1血清样品的制备　断头取血约2mL于4500r/min离心15min，分离出血清，取上清(血清)约１mL，装入1.5mL的EP管中，置-20℃冻存。

1.5.2胃黏膜组织检测样品的制备　刮取胃黏膜组织，称重，取适宜大小的组织(200±50)mg，置于微型匀浆器中，加入无水乙醇0.4mL于微型匀浆器中，轻研磨后，再加入0.9％的生理盐水0.8mL匀浆，将匀浆液倒入5mL玻璃离心管中，于4℃离心(3000r/min)15min，取上清液于EP管中(分3个管装)，置-20℃冻存，待测。

1.6样品检测方法

1.6.1EGF的放免检测方法　按EGF放免试剂盒使用说明书进行加样操作，程序如表1所示。

充分混匀，室温放置20min，离心(4℃，3500r/min)20min，测定沉淀cpm值。由自动γ计数仪预先编制程序。直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。EGF测定值由自动γ-计数仪直接读出。分别进行血清和胃黏膜组织EGF含量的测定。

1.6.2TGFα的放免检测方法　按TGFα放免试剂盒使用说明书进行加样操作，程序如表2所示。

充分混匀，室温放置20min，离心(4℃，3500r/min)20min，测定沉淀物的每分钟放射活性计数值(cpm)。由自动γ计数仪预先编制程序。直接给出有关参数，标准曲线及样品浓度。TGFα测定值由自动γ-计数仪直接读出。分别进行血清和胃黏膜组织TGFα含量的测定。

2.结果与分析

2.1胃黏膜组织和血清EGF含量的比较

结果显示模型组较正常组胃黏膜组织和血清EGF含量明显减少(P

表明：疏肝和胃丸对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜组织和血清EGF含量有明显升高作用。且作用优于雷尼替丁。

2.2胃黏膜组织和血清TGFα含量的比较 结果显示，模型组较正常组胃黏膜组织和血清TGFα含量明显减少(P

表明：疏肝和胃丸对应激性胃黏膜损伤大鼠胃黏膜组织和血清TGFα含量有明显升高作用。且作用优于雷尼替丁。

3.讨论

胃肠道黏膜上皮是机体增生最快的组织之一，正常生理状态时上皮细胞的增生和脱落维持动态平衡。EGF相关肤家族是一组具有相似生物学活性的多肽，主要生物学作用是促进细胞的增殖和分化，其通过与EGFR相互作用而发挥生物学活性。EGF相关肽家族包括EGF、TGFα、肝素结合样生长因子(HB-EGF)等。该家族成员通过与EGFR结合并刺激其发生自身磷酸化，发挥它们的生物效应。近年发现EGF可增加黏膜DNA、RNA和蛋白质含量，刺激组织生长和修复，因此被认为是胃黏膜急性损伤愈合过程中的一种抗黏膜急性损伤和促进黏膜急性损伤修复的分子调节因子。

TGFα是EGF家族中另一参与胃黏膜损伤后修复的主要调节肽，主要由黏膜细胞本身合成分泌的一种细胞生长因子。TGFα产生于整个胃肠道，具有对多种细胞的促有丝分裂作用，参与调节黏膜上皮的更新和黏膜损伤的修复，是维持黏膜完整性的重要介质。

疏肝和胃丸是一在临床上使用多年的经验方，对急慢性胃黏膜损伤性疾病有较好疗效，通过前一阶段的实验研究也已证明该方对应激性胃黏膜损伤大鼠具有显著的保护作用。本实验观察到疏肝+模型组与模型组比较能提高胃黏膜及血清EGF、TGFα含量，说明疏肝和胃丸可激发体内合成和释放内源性EGF、TGFα，促进胃黏膜的新生修复，调节胃黏膜的完整性，从而对大鼠胃黏膜损伤起到了一定的胃黏膜保护和修复作用。