益生菌对实验性结肠炎的作用

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【摘要】 目的 探讨益生菌对实验性结肠炎大鼠肠道黏膜炎症的影响。方法 建立2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）实验性结肠炎大鼠模型，30只Wistar大鼠随机分为正常组（NC组）、模型组（UC组）和益生菌组（PC组）；PC组大鼠采用双歧三联活菌悬液（2.2 ×109CFU/只）灌胃治疗，1次/d，共4w，观察肠黏膜炎症并评分及检测粪便中细菌情况。结果： PC组大鼠结肠炎症评分较UC组明显改善（P

【关键词】 益生菌； 双歧三联活菌； 黏膜炎症； TNBS； Wistasr大鼠

【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）08-0140-02

炎症性肠病（inflammatory bowel disease IBD）发病机制中肠道菌丛起着重要作用。当肠道菌群的平衡出现紊乱，可给易感宿主提供了抗原成分，如内毒素等，启动粘膜慢性炎症。本文以半抗原法建立结肠炎模型，给予双歧三联活菌治疗，检测大鼠肠道菌群数量及肠道黏膜炎症情况，探讨益生菌对结肠炎的治疗作用。

1.材料与方法

1.1.结肠炎模型的建立：雄性Wistar大鼠30 只，180～220 g，编号后随机分为正常组（NC组）和模型组（UC组），益生菌组（选用双歧三联活菌，双歧杆菌、乳酸杆菌和粪球菌按6：3：2的比例组成，商品名：培菲康）（PC组）。造模前大鼠在清洁级动物房饲养1周，按照文献[1]方法采用TNBS100mg/kg灌肠诱导大鼠结肠炎模型。造模第2天，PC组每只大鼠每天2ml益生菌和生理盐水溶液灌胃 （约2.2 ×109CFU/只），NC组和UC组2ml生理盐水灌胃，共4周。4周后处死所有存活大鼠，采集相关标本备检。

1.2.光镜观察及炎症评分：在距2cm、6cm、10cm 处取3段长约1cm的大鼠结肠组织，制备石蜡切片，行苏木精-伊红（HE）染色，以盲法观察，光镜下观察肠黏膜损伤情况，参照文献方法给予评分[2]。

1.3.肠道菌群分析：处死大鼠时，迅速取盲肠内新鲜粪便0.1g置于含半胱氨酸的Ringer稀释液9ml内稀释，搅拌混匀，并制成浓度为10-2、10-4、10-6、10-8g/ml四种混悬液，各取100ul分别在相应的培养基上36±1℃培养18-48h不等。观察菌落形态、计数。在上述涂抹有四种浓度混悬液的培养基中计数菌落.计算公式： 菌落数×稀释倍数例[CFU =菌落数×10n ×10 （ n为相应的稀释度， 10为换算常数）]， 结果以相应的对数值表示。

1.4.数据统计方法 各组数据以 X±s表示， 应用统计软件SPSS11.0进行方差分析、t 检验，以P

2.结 果

2.1.结肠黏膜损伤情况及炎症评分：光镜下，UC组黏膜结构损伤明显，表现为广泛黏膜糜烂，隐窝炎及脓肿，腺管排列紊乱，固有层充血水肿明显，大量炎性细胞浸润，部分标本见大片组织坏死，炎症评分明显高于NC（4.35±0.883）组和PC组（7.94±0.846）， PC组的炎症评分虽较UC组（10.25±1.363）降低，但仍高于NC组（P

2.2.肠道菌群检测： 第4周时，UC组大鼠肠道细菌中肠杆菌和真菌数量明显升高，乳酸杆菌和双歧杆菌数量明显下降； PC组大鼠肠杆菌计数虽明显高于NC组，但乳酸杆菌和双歧杆菌接近NC组。三组中未见葡萄球菌和产气荚摸杆菌，见表2。

讨 论

越来越多的证据显示肠道菌群在人类IBD发病机制中起关键作用。研究表明溃疡性结肠炎（UC）发作期与健康人粪便菌群相比，肠杆菌和肠链球菌增加，肠链球菌增尤为显著，而酵母菌变化不显著，乳酸杆菌、真杆菌、类杆菌和消化链球菌都则明显减少，双歧杆菌检出率更低[3，4]， Madsen等[5]报道在IL-10基因敲除鼠，有自发性结肠炎的特点，出生时肠内细菌的定植即有改变，2周内肠内乳酸杆菌出现明显减少，2-4周最明显，其减少程度与肠黏膜损伤成正比。本研究中大鼠的菌群出现明显紊乱，补充双歧杆菌和乳酸杆菌后这种失平衡的状态得到改善，肠杆菌和真菌减少，益生菌增加，大鼠肠道炎症减轻，提示肠道菌群的改变是IBD致病的重要因素之一。肠道益生菌减少致其他细菌的优势生长，产生大量毒素，细菌移位，促使炎症细胞在肠黏膜聚集，合成和分泌大量的促炎细胞因子如TNF-α、IL-6等更加重局部的免疫反应，造成肠黏膜的损伤。本实验给予大鼠双歧三联活菌制剂后，由于肠道乳酸杆菌和双歧杆菌数量的增加，菌群平衡失调的改善，炎症程度减轻。由此可见，肠道菌群中乳酸杆菌和双歧杆菌量的增加，除了减轻肠道菌群的紊乱外，还有助于改善肠道局部免疫应答。这与双歧杆菌、乳酸杆菌等益生菌制剂可有效增强机体免疫功能， 防治某些胃肠道感染性疾病结果一致[6]。

参考文献

[1].lopis M；Antolin M；Guarner F；et al. Mucosal colonization with Lactobacillus casei mitigates barrier injury induced by exposure to trinitronbenzene sulphonic acid.Gut，2005，54：955-959

[2]cCarthy J，O’Mahony L， O’Callaghan L，et al. Double blind，placebo controlled trial of two probiotic strains in interleukin 10 knockout mice and mechanistic link with cytokine balance. Gut，2003，52：975-980

[3]Caplan MS，Miller-Catehpole R，Kaup S，et al. Bifidobacterial supplementation reduces the incidence of necrotizing enterocolitis in a neonatal rats model. Gastroenterology，1999，117：577-583

[4]Kamade N，Inoue N， Hisamatsu T， et al. Nonpathogenic Escherichia coli strain Nissle 1917 prevents murine acute and chronic colitis. Inflamm Bowel Dis. 2005；11：455-463

[5]Madsen KL， Doyle JS， Jewell LD，et al. Lactobacillus species prevents colitis in interlerleukin 10 gene-dificient mice. Gastroenterol， 1999，116：1246-1248

[6]Hooper LV， Gordon JI. Commensal host-bacterial relationship in the gut. Science，2001，292：1115-1118