高效液相色谱法测定D-泛酸钠有关物质

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[摘要]目的：建立高效液相色谱法测定d-泛酸钠的有关物质。方法：采用色谱柱C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-0.2%磷酸溶液（10∶90）为流动相，流速1 ml/min，进样量10 μl，检测波长214 nm。结果：D-泛酸钠主峰与有关物质峰达到有效分离。结论：高效液相色谱法准确、灵敏，重现性好，可用于D-泛酸钠有关物质的检查。

[关键词]泛酸钠；有关物质；HPLC

[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2007）10（a）-092-02

泛酸钠（Sodium Pantothenate）是泛酸的钠盐。泛酸是B族维生素的一种，为多种代谢环节中包括碳水化合物、蛋白质、脂肪及上皮功能维持正常所必需的辅酶A的组成部分，临床主要用于泛酸缺乏(如吸收不良综合征、热带口炎性腹泻、乳糜泄、局限性肠炎或泛酸拮抗药物应用)的预防和治疗，维生素B族物质缺乏时的辅助治疗以及一些其他疾病的辅助治疗（如链霉素中毒、术后肠梗阻、类风湿等）。游离泛酸极不稳定，常以钠盐或钙盐的形式存在。近年，对泛酸钠的研究日趋增多，已见有泛酸钠的制备、结构确证和药理方面的报道[1~5]，但在质量控制方面尚未见有关物质检查的研究报道。本文采用自身对照，建立了HPLC法检测D-泛酸钠的有关物质，方法准确、简便、重现性好，可作为控制D-泛酸钠产品质量的方法。

1 仪器与试药

Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；HH-2数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）。

泛酸钠（浙江杭康海洋生物药业有限公司，批号040602，040606，040610）；

盐酸（分析纯，杭州试剂总厂）；氢氧化钠（分析纯，青岛海智通科技有限公司）；过氧化氢（分析纯，河北健宁医药化工厂）；磷酸（分析纯，天津市益民化学试剂厂）；甲醇（色谱纯，天津四友生物医学技术有限公司）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.2%磷酸溶液（10∶90）；流速1 ml/min；进样量10 μl；检测波长214 nm。理论板数按泛酸钠峰计算应不低于2 000。

2.2 溶液的制备

精密称定泛酸钠样品适量，加流动相制成每1 ml含5 mg的溶液作为供试品溶液；取1 ml置100 ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度得对照溶液。

2.3 检测波长的选择

泛酸钠在流动相中的紫外吸收光谱无最大吸收峰，只有末端吸收，且在214 nm处有拐点，峰型变得平缓且在214 nm时，溶剂对液相色谱紫外检测影响较小，固定波长检测器具有最大波长为214 nm的光源。所以，选用214 nm作为有关物质检查的测定波长。泛酸钠紫外吸收光谱见图1。

2.4 专属性试验

取经过酸破坏（1 mol/L盐酸溶液，水浴加热2 h）、碱破坏（1 mol/L NaOH溶液，水浴加热2 h）和氧化破坏（1 ml浓过氧化氢，加热）的破坏性试验样品进行检测，测定杂质峰与主成分峰的分离度。由图2~3可知，泛酸钠的杂质峰均出现在主成分峰之前，能够与主成分峰有效分离。

2.5 检测限的确定

取泛酸钠对照品适量，加甲醇-0.2%磷酸（10∶90）溶解并稀释成每1 ml含2.5 μg的泛酸钠溶液，摇匀。取此溶液10 μl注入色谱仪，峰高以三倍噪音计算（信噪比3∶1），测得检测限为25 ng。

2.6 限量确定和检查结果

根据泛酸钠在影响因素试验和加速试验中有关物质含量结果（表1~2），本品对高温和光稳定，高湿条件下有关物质含量有所增加，单一杂质含量有关物质为0.344%，有关物质总和为0.358％，考虑到实际生产，将限度稍放宽，单一有关物质含量不得过0.5％，杂质总和不得过1％。测定三批样品单一有关物质和有关物质总和见表2。

3 讨论

国内应用于药品生产的泛酸钠主要为日本进口，执行标准为《日本食品添加剂公定书》标准[6]，该标准并没有对泛酸钠的有关物质进行检测和控制。国内采用离子交换生产的泛酸钠有关物质主要是酰胺键水解或羟基被氧化的自身降解产物，适用于高效液相色谱法进行有关物质含量测定。将流动相的比例改变为甲醇-0.2%磷酸溶液（8∶92）和甲醇-0.2%磷酸溶液（12∶88）时，泛酸钠主峰与杂质峰完全分离；改变色谱柱为Phenomenex C18柱，泛酸钠主峰与杂质峰完全分离。当色谱流动相发生小的变化和色谱柱生产厂商不同时，泛酸钠主峰与杂质峰均实现完全分离，说明研究制定的色谱条件具有较好的耐用性。

本实验条件简单，操作方便，主峰与杂质峰能达到有效分离，对有关物质含量测定准确，可广泛推广应用于泛酸钠的质量控制，提高泛酸钠产品质量和安全性。

[参考文献]

[1]GROFF JL,GROPPER SS,HUNT SM.Advanced Nutrition and Human Metabolism[M].NewYork:West Publishing Company,1995.324-365.

[2]RICHEN DB,MAGDEN EB.Process for manufacturing sodium pantothenate[P].US:4258210,1979.

[3]BENDER DA.Nutritional Biochemistry of the Vitamins[M].NewYork:Cambridge University Press, 1992. 154-187.

[4]ZIEGLER EE,FILER LJ.Present Knowledge in Nutrition[M].Washington:DC IL SI Press,1996.

[5]门永彪,郑学忠,刘河.右旋泛酸钠的波普数据和结构分析[J].河北师范大学学报(自然科学版),2006,30 (5):570-572.

[6]吕绍杰.日本食品添加剂公定书[M].北京:化学工业部标准化研究所，1986.

（收稿日期：2007-07-02）

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