大肠癌肿瘤药敏分析论文

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【摘要】目的：通过测定47例大肠癌患者对5-氟脲嘧啶(5-Fu)、奥沙利铂(L-OHP)、卡铂(CBP)、顺铂(DDP)、丝裂霉素(MMC)5种化疗药物的体外敏感性试验，探讨肿瘤药敏试验对大肠癌患者个体化化疗的应用价值。方法：采用组织块培养-终点染色-计算机图像分析法（TECIA）。结果：对肿瘤组织的平均抑制率由高到低依次为5-Fu>L-OHP>MMC>CBP>DDP,联合用药的抑制率为L-OHP+5-Fu>MMC+DDP+5-Fu>MMC+5-Fu>DDP+5-Fu。结论：大肠癌是对化疗药物敏感性较差的肿瘤，且存在着明显的异质性。体外肿瘤药敏试验在指导大肠癌的临床用药及个体化化疗方面具有重要的指导意义。

【关键词】大肠癌体外肿瘤药敏试验TECIA法个体化化疗

资料与方法

47例大肠癌新鲜标本均取自本院手术标本，其中男32例，女15例。所有标本都经病理诊断为大肠腺癌。所有病例均为首次治疗，术前未化疗。标本于无菌条件下快速送到实验室。

药品与试剂：选用目前常用的五种大肠癌化疗药物:5-氟脲嘧啶；丝裂霉素；奥沙利铂；卡铂；顺铂。MTT，配制浓度为5mg/ml,过滤灭菌，避光冷藏。培养液RPMT-1640含20%小牛血清，-20℃冻存。100级净化工作台，二氧化碳培养箱，计算机图像分析仪由江苏先声药业有限公司提供。

标本处理：无菌切取肿瘤组织1cm3大小，用D-hanks反复冲洗3次,加200U/ml的青、链霉素适量浸泡10分钟。剪除脂肪、纤维及坏死组织，选取边缘生长好、无坏死的癌组织块，在层流超净工作台上，细切成0.5～1mm3大小的组织块。将组织块堆放到有1640培养液的24孔板中，每组设4孔，37℃CO2孵箱培养24小时,以图像分析仪测定每孔组织块面积A，每孔加入相应的化疗药10μl,继续培养4天后，加入MTT染料再培养4小时。再次测定组织块的染色面积（BA），并按下式算出化疗药物的抑制率（IR）。IR%={1-［(BA处理/A处理)/(BA对照/A对照)］}×100%。评价指标和标准：评价指标为化疗药物的抑制率（IR）：IR>50为高度敏感，30

结果

标本可评价率：本组共收集54例标本，7例由于细菌污染而放弃。整体标本可评价率为87.04%（47/54）。47例大肠癌体外药敏试验显示不同化疗药物的敏感率、抑制率范围和平均抑制率见表1。表1大肠癌对不同药物的敏感率、抑制率范围和平均抑制率（略）

讨论

由于恶性肿瘤存在着较强的异质性，造成肿瘤对各种化疗药物的敏感性有着明显的个体差异，忽视个体差异仅凭经验用药，存在着盲目性，使得总体疗效不佳。建立可靠的体外肿瘤药敏检测方法，可以帮助临床医师了解不同患者对不同化疗药物的敏感和耐受情况，设计合理治疗方案，避免无效药物所致的不良反应，从而实现个体化化疗。目前的抗肿瘤药物的药敏试验可分为体内和体外检测法。体内肿瘤药敏试验有裸鼠模型法和肿瘤肾包膜下移植法，但因实验条件复杂、价格贵、实验周期长等限制，未能在临床推广应用；体外肿瘤药敏试验常用的有三磷酸腺苷生物发光法（ATP-CSA）、四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）、四氮唑衍生物比色法（XTT法）、组织块培养-终点染色-计算机图像分析法（TECIA）、胶原凝胶小滴植入法（CD-DST）。本组所采用的组织块培养－终点染色－计算机图像分析法（TECIA）操作步骤少、简便易行、需标本量小、成功率高；本法能够保持实体瘤的组织结构，有利于细胞存活，同时能够模拟体内实体瘤细胞的环境，提高了药敏的准确性，是一种较实用的微量化体外药敏试验方法，具有很好的临床应用前景，能为临床制定个体化化疗方案提供参考依据。

本组结果提示，不同个体的大肠癌患者对同一化疗药物的敏感性存在着明显的个体差异，这可能与恶性肿瘤存在着先天性或获得性的耐药性及多重耐药性有关。所以大肠癌的化疗应该通过药敏试验确定不同患者对每一种化疗药物的敏感性，从而为大肠癌患者建立“量体裁衣（tailor）”式的个体化化疗。

【参考文献】

1曾庆华,吕新生,汤辉焕.MTT测定恶性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性.中国普通外科杂志,2000,9(6):553.

2程春来.L-OHP联合5-Fu、CF治疗结直肠癌术后转移30例.中国交通医学杂志,2006,20(1):42.