酶联免疫吸附试验与胶体金免疫层析试验在乙型肝炎表面抗原检测中的应用比较
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摘要：目的：探讨酶联免疫吸附试验与胶体金免疫层析试验在乙型肝炎表面抗原检测中的应用。方法：将我中心门诊体检及检测HBsAg患者300例，分别采用ELISA法及胶体金免疫层析试验检测HBsAg，比较两种检测方法的灵敏度、特异性。结果：ELISA与胶体金免疫层析法检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。ELISA法检测灵敏度显著高于胶体金免疫层析试验，差异有统计学意义（P
关键词：酶联免疫吸附试验；胶体金免疫层析试验；乙型肝炎；表面抗原
我国乙型肝炎发病率高，为严重危害人民身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒感染的诊断标志物之一，HBsAg对于乙肝的预防及治疗意义重大[1]。目前常用的实验室检测方法为ELISA及胶体金免疫层析试验。ELISA法操作复杂，对相应仪器，检测时间等条件要求较高。胶体金免疫层析操作方便，快速，结果易于观察[2]。本研究对我中心2011年12月～2012年12月门诊体检及检测HBsAg患者300例，分别采用ELISA法及胶体金免疫层析试验检测，报道如下：
1资料与方法
1.1一般资料 静脉采集我中心2011年12月～2012年12月门诊体检者及门诊患者血液标本2ml，其中男180例，女120例；年龄23～55岁，平均年龄（38.6±5.0）岁。以3000r/min离心10分钟后，分离血清待检，共计300份。HBsAg ELISA检测试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司，HBsAg胶体金试纸条购自北京蓝十字药业有限公司。仪器有：酶标分析仪，恒温箱，水浴箱，微孔振荡器，微量移液器，洗板机或洗瓶。
1.2检测方法
1.2.1ELISA法 采用双抗夹心ELISA法检测。检测前，充分混匀所有试剂并平衡至室温，注意避免泡沫的产生。根据待测品数量设计好ELISA孔数，包括待测样品，标准品，空白孔，用稀释液稀释好待检样品，使浓度分别为40、20、10、5.0、2.5、1.25、0IU/L。先加入稀释好的标准品50?l于反应孔内，然后加入待检样品50?l于反应孔内，立即加入50?l的生物素标记抗体，盖上膜板，混匀置于37℃水浴箱温育1小时。用洗板机洗板5次后，每孔加入80?l亲和链霉素-HRP，混匀置于37℃水浴箱温育30分钟。洗板机洗板5次后，每孔加入显色剂A、B各50?l，混匀置于37℃水浴箱避光温育10分钟。然后取出酶标板，每孔加入50?l终止液混匀后于酶标分析仪450nm波长处测定各孔OD值。
1.2.2胶体金免疫层析试验 取静脉血置于室温30分钟～1小时至血清自然析出，然后将胶体金试纸条放入血清内10S取出，15分钟后观察结果。
1.3结果判定 ELISA结果判定：测定孔OD值/阴性对照孔OD值（S/N）大于2.1判定为阳性。胶体金免疫层析试验结果判定：金标试纸条于检测线及对照线位置处各出现一条紫红色线条即判定为阳性，只在对照线位置出现1条紫红色线条为阴性，未出现任何线条为金标试纸条失效。
1.4统计学分析 采用SPSS18.0统计软件进行数据处理，计数资料采用卡方检验，计量资料采用t检验，以P
2结果
2.1两种检测方法检测结果比较 ELISA与胶体金免疫层析法检测结果差异无统计学意义（P>0.05）。具体结果见表1。
3讨论
ELISA法为目前国内最常用的检测HBsAg的方法之一，灵敏度高，特异性强，重复性好，可进行定量及半定量测定[3]。但该试验方法受反应时间、反应温度、洗涤彻底性等因素影响，操作步骤较多，不适于急诊及现场筛查。胶体金免疫层析试验，具有操作简单，便于保存，无需特殊设备等有点，可应用于临床对HBsAg的初筛，尤其适用于急诊及现场筛查。但由于胶体金需较高浓度的标记物，故在检测灵敏度上有一定限制，在HBsAg浓度较低时易出现假阴性结果[4]。
ELISA法需在液相中通过扩散作用，使抗原于固相表面的抗体结合，同时标记抗体也需通过扩散作用最终形成抗体-抗原-标记抗体复合物，经过洗涤及显色方可测定结果。检测时间显著长于胶体金试纸条方法，随意缩短反应时间会显著降低阳性检出率。此外，溶血标本中的血红蛋白因具有类似过氧化物酶的活性，在温育过程中可吸附于固相表面而难以洗脱，导致催化底物显色产生假阳性结果。溶血标本同样也可使试纸条背景呈红色而影响试验结果的观察。
本组检测结果显示，两种检测方法检测结果一致性较好，ELISA法检测灵敏度高于胶体金免疫层析试验。尽管胶体金对仪器设备要求较低，操作也较便捷，但为避免假阴性结果的产生，临床推荐使用ELISA法进行HBsAg的检测。胶体金试验可用于急诊的现场初筛，灵敏度有待进一步提高.