高效液相色谱法测定阿戈美拉汀片有关物质

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摘 要：目的：建立高效液相色谱法测定阿戈美拉汀片的有关物质的方法。方法：采用Welchrom-C18（5μm，4.6*250mm）色谱柱，以0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液（用稀磷酸调节pH值至3.0）-甲醇-乙腈（50：30：20）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为229nm，柱温为30℃。结果：在该色谱条件下，阿戈美拉汀与各中间体、杂质分离良好，辅料对有关物质检测无干扰。结论：该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。

关键词：阿戈美拉汀片 有关物质 高效液相色谱法

阿戈美拉汀片（Agomelatine Tablets）是法国施维雅药厂（Les Laboratoires Servier Industrie）研制的新一代抗抑郁药，既是首个褪黑素受体激动剂，也是5-羟色胺2C（S-HTx）受体拮抗剂。该药有抗抑郁、抗焦虑、调整睡眠节律及调节生物钟的作用，可在不影响白天活动的情况下改善夜间睡眠状况，其不良反应少， 也未见撤药反应。目前各国药典中尚未收载该品种的有关物质检查方法，国内文献亦尚未报道。为有效控制产品质量，本文采用高效液相色谱（HPLC）法[1]，参考有关文献[2，3]对阿戈美拉汀片中有关物质进行了检测，结果该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于该制剂中有关物质的检测。

一、仪器与试药

1.仪器

岛津SPD-20AT高效液相色谱仪

2.样品

阿戈美拉汀对照品（山东方明药业集团股份有限公司，批号：120301J，含量：99.7%）；阿戈美拉汀片（山东方明药业集团股份有限公司，批号：20120501、20120502、20120503，规格：25mg）；杂质A对照品（2-（7-甲氧基-1-萘基）乙胺盐酸盐，山东方明药业集团股份有限公司，批号：120303，含量：99.5%）；杂质B对照品（（7-甲氧基-1-萘基）乙腈，山东方明药业集团股份有限公司，批号：120304，含量：99.8%）。甲醇、乙腈为色谱纯；磷酸氢二钠为分析纯，水为纯化水。

二、方法与结果

1.色谱条件

色谱柱为Welchrom-C18柱（5μm，4.6*250mm），流动相为0.01mol/L的磷酸氢二钠溶液（用稀磷酸调节pH值至3.0）-甲醇-乙腈（50：30：20），流速为1.0ml/min，检测波长为229nm，柱温为30℃；进样量：20μl。

2.溶液的配制

2.1供试品溶液 取本品的细粉适量（约相当于含阿戈美拉汀10mg），精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

2.2对照溶液 精密量取供试品溶液1ml，置200ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。

2.3杂质对照品溶液 取阿戈美拉汀杂质A对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含杂质A 0.15μg的溶液，作为杂质A对照品溶液。取阿戈美拉汀杂质B对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中约含杂质B0.15μg的溶液，作为杂质B对照品溶液。

3.方法学考察

3.1测定波长的选择

取阿戈美拉汀对照品、杂质A、杂质B、空白辅料适量，用流动相溶解并稀释至约25μg/ml，参照紫外-可见分光光度法于200～400nm波长间扫描，结果显示阿戈美拉汀、杂质A、杂质B在229nm处吸收强度基本相当吸收系数比为1：1，辅料基本无吸收不干扰有关物质测定，故选择229nm为有关物质检测波长较为适宜。

3.2专属性考察

破坏性试验：取样品适量，经酸、碱、氧化、高温、光照破坏后，按“2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，本品在光照、碱性条件下较为稳定，在酸、氧化、高温强制降解条件下容易降解，主要降解产物为相对保留时间为0.6的峰，对该杂质归属为杂质A；降解过程如下：

试验结果表明，主峰与相邻杂质的分离度良好，本色谱条件对降解产物专属性良好。

辅料溶液干扰试验：取空白辅料，加流动相溶解并稀释制成约相当于含阿戈美拉汀0.1mg/ml的溶液，滤过，取续滤液20μL进样，记录色谱图，结果空白辅料不干扰有关物质测定。

3.3 精密度试验

照“2.2”项下方法配制对照溶液，取20μl，连续进样6次，RSD为1.1%。另照“2.3”项下方法配制杂质A、B对照品溶液，取20μl，连续进样6次，结果杂质A的RSD为0.74%，杂质B的RSD为0.70%，表明本方法精密度良好。

3.4 稳定性试验

照“2.1”项下方法制备供试品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果，供试品溶液在室温条件下放置8小时内，杂质检查结果的RSD均小于20.0%，表明供试品溶液在室温条件下放置8小时内稳定性良好。

照“2.3”项下方法配制杂质A、B对照品溶液，室温下在0、2、4、6、8小时分别测定。结果杂质A的RSD为0.34%，杂质B的RSD为0.12%。表明本方法杂质A、B稳定性良好。

3.5定量限

分别取杂质A、B对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20？l进样，使其主峰高约为噪音峰高的10倍，此时杂质A进样浓度为0.037μg/ml，杂质B进样浓度为0.035μg/ml，故杂质A定量限为0.74ng，杂质B定量限为0.7ng。定量限结果显示，有关物质测定方法供试品浓度是合适的，杂质A、B可以准确检出。

3.6检测限

取阿戈美拉汀对照品适量，用流动相溶解稀释至适当浓度，20？l进样，使其主峰高约为噪音峰高的3倍，此时阿戈美拉汀的进样浓度为0.024μg/ml，阿戈美拉汀的检测限为0.48ng。

精密量取杂质A、B定量限项下的溶液3ml，置10ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为检测限溶液。取20？l，注入液相色谱仪，记录色谱图。此时信噪比约为3：1，所以本色谱条件下杂质A的检测限为0.222ng，杂质B的检测限为0.21ng。

3.7回收率试验

在空白辅料中分别加入适量的杂质A、杂质B，按照“2.1”项下方法制备供试品溶液，在相当于杂质限度20%、100%、150%的浓度水平下，分别考察杂质A、B的回收率。每个浓度配制3份。结果杂质A平均回收率为98.8%，RSD为1.45%（n=9），杂质B平均回收率为97.9%，RSD为1.67%（n=9）。

三、讨论

本实验对HPLC法测定阿戈美拉汀片有关物质的方法学进行了研究，结果表明阿戈美拉汀在0.08～1.4μg/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.9993，n=6）。杂质A在0.031～0.2325μg/ml内线性关系良好（r=0.9994），回收率为98.8%，RSD为1.45%（n=9），杂质B在0.033～0.2475μg/ml内线性关系良好（r=0.9997），回收率为97.9%，RSD为1.67%（n=9），精密度、稳定性都较好，故该法用于测定阿戈美拉汀片的有关物质，专属性强、简便，重复性好，结果准确可靠。

参考文献

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：765-768.

[2] 王毓菁，张根元，王德才，陶伟博，戈文兰.HPLC测定片剂中阿戈美拉汀的含量[J].中国现代应用药学，2012，29（7）：652-655.

[3] 赵海桥，苏贵勇，付建，刘存领.HPLC法测定甲磺酸伊马替尼片的有关物质[J].中国化工贸易，2013，5（7）：279-280.

作者简介：付建，男，山东方明药业集团股份有限公司，助理工程师。