肿节风注射液体外抗肿瘤作用的实验研究

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇肿节风注射液体外抗肿瘤作用的实验研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

摘要:目的:测定肿节风注射液(ZJF)体外对人肺癌A-549､结肠癌HCT-29､胃癌BGC-823的活性｡方法:用细胞生长曲线法､MTT试验､形态学观察研究了肿节风注射液（ZJF）的体外抗肿瘤作用｡结果:肿节风注射液(ZJF)对A-549､HCT-29､BGC-823三种人系肿瘤细胞均有较强的体外细胞毒作用,且呈浓度依赖性｡结论:肿节风注射液(ZJF)具有体外抗肿瘤作用｡

关键词:肿节风注射液(ZJF) 体外抗肿瘤

肿节风注射液(ZJF)为肿节风干燥全草经水提醇沉后加注射用水制得,具有清热解毒,消肿散结的作用｡临床上除用于抗菌消炎外,还可单独或联合其它药物治疗消化道癌､胰腺癌､肝癌等各种肿瘤疾病｡姜桂林[1]､黄嶷波[2]分别报道了肿节风注射液配合化疗治疗老年中晚期非小细胞肺癌和鼻咽癌,都证明它是一种有效的抗癌药物,在常规应用化疗的同时有辅助协同作用｡孙文娟[3][4]研究了ZJF体内､体外对小鼠前胃癌FC､小鼠肝癌Hep-A-22的作用,结果均有明显的抗肿瘤作用,并可增加荷瘤鼠免疫器官指数及外周血白细胞数｡但是目前还未见ZJF体外对人肿瘤细胞作用的报道,本实验首次研究了ZJF对人肿瘤细胞的体外抗肿瘤作用,结果表明ZJF对人肺癌A-549､结肠癌HCT-29､胃癌BGC-823均有较强的体外细胞毒作用｡现报道如下｡

1 实验材料

1.1 药物与试剂 肿节风注射液(福建古田药业有限公司,批号:050616);DMEM/F12(Gibco公司产品，批号:1234485);MTT（全名四氮甲唑蓝,Sigma公司产品）;胰酶(Gibco公司产品);新生小牛血清(杭州四季青生物材料公司产品);RPMI1640（美国Gibco公司产品）;DMSO（全名二甲基亚砜,Sigma公司产品）｡

1.2 细胞系及培养条件 人肺癌A-549､结肠癌HCT-29､胃癌BGC-823三种肿瘤细胞,均由中国医学科学院药物研究所提供｡A549与BGC-823放置于10%小牛血清､100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI1640培养基中,置37℃､含5%CO2饱和湿度的培养箱中培养｡HCT-29放置于含10%小牛血清､100μg/ml青霉素和100μg/ml链霉素的DMEM/F12中,置37℃､含5%CO2饱和湿度的培养箱中培养｡

1.3 仪器 CO2孵箱（型号:MC0175,日本三洋公司）､全自动酶标仪（Labsystems Dragon 中文酶标仪,芬兰公司）､OLYMPUS双目光学显微镜（型号：BX51,日本OLYMPUS公司）｡

2 方法

2.1 HCT-29细胞生长曲线的测定[5] 在24孔细胞培养板上加入对数生长期HCT-29细胞混悬液（细胞密度为5×104个/ml）每孔1.0mL,培养1d后加入25mg/ml的ZJF,每孔1.0mL,均设3个复孔｡于加药同时及加药后不同时间,用0.25%的胰酶液消化,收集细胞,于细胞计数板上计数,以每毫升细胞数(104个/ml)为纵坐标､给药时间(天)为横坐标画出细胞生长曲线｡

2.2 MTT显色法测定ZJF对三种肿瘤细胞的抑制作用 在96孔细胞培养板上加一定密度(1×105个/ml)的细胞混悬液,每孔100μl,培养待细胞贴壁后加入不同浓度的药物,每孔100μl,均设三个复孔,另设对照孔｡在37℃､5%CO2饱和湿度的培养箱中培养72小时后取出,加入0.5mg/ml的MTT每孔180μl｡继续培养4h后,倾去各孔内液体,再加入DMSO每孔150μl,充分溶解后,以酶标仪在双波长495nm､470nm处测各孔吸光度（OD值）｡以OD值间接反应存活细胞数量,并将所获肿瘤细胞生长抑制率定义为药物对肿瘤细胞的体外抑瘤率｡重复两次,对数据进行统计学处理｡

生长抑制率=(1-给药对照孔OD值／无药对照孔OD值)×100%[6]

2.3 形态学观察ZJF对三种肿瘤细胞的影响将肿瘤细胞1.0ml接种于24孔板里,给药组同时加入50mg/ml的ZJF1.0ml,培养3天后取出24孔板直接在光镜下观察并拍照｡

3 结果

3.1 ZJF对HCT-29细胞生长的影响 用浓度为25mg/ml的肿节风注射液处理HCT-29肿瘤细胞4天后,可见HCT-29细胞的生长受到抑制,且呈浓度和时间依赖性｡结果见图1｡

3.2 MTT显色法测定ZJF对以上三种肿瘤细胞的影响 用MTT显色法观察了ZJF对体外培养的肺癌A-549､结肠癌HCT-29､胃癌BGC-823三种人瘤细胞的影响,结果三种肿瘤细胞在3.125､6.25､12.5､25和50μg/ml浓度下,ZJF对人肺癌细胞A-549､人结肠癌HCT-29､人胃癌BGC-823三种瘤细胞生长抑制率随药物浓度的升高而升高,IC50分别为15.18μg/ml､60.00μg/ml､27.6μg/ml,表明ZJF对肺癌A-549､结肠癌HCT-29､胃癌BGC-823三种人肿瘤细胞有较强的细胞毒作用,其中对人肺癌A-549的作用最强｡结果见图2｡

3.3 ZJF对A549､HCT-29､BGC-823细胞形态的影响:在光学显微镜下观察,正常组细胞体积较大,核大而明显,核仁清楚,核浆比例大｡给药处理后72小时后的四种细胞,发现细胞形态有明显的变化,可见细胞密度降低,细胞体积缩小,细胞收缩变圆,胞核变小,核仁减少或消失,核浆比例降低,与周围失去联系｡见图3｡

4 讨论

本实验是首次对肿节风注射液抗肿瘤作用的体外实验报道,从结果可以看出,肿节风注射液对人肺癌细胞A-549､结肠癌HCT-29和胃癌BGC-823三种人瘤细胞都有明显的抑制作用,这对肿节风注射液的临床运用提供了更可靠的理论根据｡目前认为,肿节风注射液的抗肿瘤作用主要与增强免疫有关,但由于制剂工艺､质量控制以及其它方面的一些原因,导致肿节风注射液在临床上也引起了一些不良反应｡尽管如此,我们认为它的抗肿瘤作用还是非常有开发价值的｡本次实验的结果也再一次验证了其良好的抗肿瘤作用,为进一步开发和改进打下了基础｡

参考文献

1､姜桂林.肿节风注射液配合化疗治疗老年中晚期非小细胞肺癌的临床观察[J]. 山西医药杂志,2005:34(4):318～319

2､黄嶷波,张育荣.肿节风注射液配合放疗佐治鼻咽癌[J].中国临床医生,2005:33(6):63

3､孙文娟,李晶,兰凤英等.肿节风注射液抗小鼠肝癌Hep-A-22 的作用及毒性[J].中成药,2003:25(4):313～315

4､孙文娟,李晶,兰凤英等.肿节风注射液抗小鼠前胃癌FC的作用及毒性[J].中药新药与临床药理,2003:14(3):168～171

5､鄂怔.组织培养和分子细胞学技术.北京：北京出版社,1995：87

6､鱼达,余海,腾理送等.MTT显色法在肿瘤细胞生物学研究中的应用[J].实用肿瘤杂志,1992:7(3):167～170

(收稿日期:2007.11.22)