精乌(糖衣)片中何首乌的二苯乙烯苷含量测定
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【摘要】 用（RP-HPLC）法测定制何首乌中的二苯乙烯苷含量。结果表明该方法准确可靠，灵敏度高，可用于该产品含量控制。
【关键词】 精乌（糖衣）片； 二苯乙烯苷（2，3，5，4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡糖糖苷）；RP-HPLC
精乌（糖衣）片是由制何首乌、黄精（制）、女贞子（酒蒸）、墨旱莲四味药组成，具有补肝肾，益精血，壮筋骨等功效，临床用于失眠多梦，耳鸣健忘，头发脱落等症。为保证该制剂的质量，对该制剂中制何首乌的二苯乙烯苷成分进行了反相高效液相色谱法（RP-HPLC）测定研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪；大连依利特Phenomenex ODS色谱柱；SPD-10A紫外可见光检测器；威玛龙色谱工作站；ZF-2型三用紫外分光光度仪。
1.2 试药 二苯乙烯苷对照品（中检所， 110844-200505批）；大黄素对照品（中检所， 0756-200310批）精乌（糖衣）片（20110301 ; 20110303;20110305，由本公司提供）；乙腈为色谱纯；水为重蒸水；其它均为分析纯。
2 含量测定
2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18色谱柱（4.60mm×150mm，5μm）；流动相：乙腈：水=22：78；流速：1.0ml/min；柱温：室温；检测波长：320nm；进样量：10μl。
2.2 溶液的制备
2.2.1 供试品溶液的制备：取本品10片，去糖衣，研细，精密称取两份各约0.5g，置具塞锥形瓶中，加入稀乙醇50ml，称定重量。水浴回流30分钟，放至室温，称重，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液。
2.2.2 对照品溶液的制备：取五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的二苯乙烯苷对照品，精密称取10.05mg，于50ml棕色量瓶中，加稀乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得（浓度：0.201mg/ml）；精密量取3ml于10ml棕色容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，即得（浓度：0.0603mg/ml）。冰箱中保存备用。
2.3 线性关系考察 精密吸取二苯乙烯苷对照品贮备液分别稀释成浓度为20.1,40.2,60.3,80.4,100.5μg/ml的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，以峰面积积分值 (Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标绘制标准曲线，结果二苯乙烯在进样量0.201～1.005μg范围内峰面积积分值呈良好的线性关系.见表1。
表1 线性关系
Y=3677921.14X-106573.15，r=0.9997
2.4 精密度试验 取同一供试品溶液（20110303批），连续测定6次，结果平均含量2.8847mg/片，RSD%为1.13%。
2.5 稳定性试验 取同一批供试品溶液(20110301)，分别在0、2、4、8、12、24小时各测定一次， 6次测定的二苯乙烯苷含量平均值为2.8677mg/片，RSD为1.42%。表明稳定性良好。
2.6 重复性试验 取同一批号(20110303)，分别取5份，同法制备，依法测定，结果含量平均为5.7629mg/g，RSD为1.28%。
2.7 阴性干扰试验 取缺二苯乙烯苷的取阴样品，按供试品溶液制备项下的方法制备，测定。结果表明：在对应的二苯乙烯苷保留时间处无明显杂质峰干扰，即阴性无干扰。
2.8 回收率试验 采用加样回收法，取 (20110303批,含量5.7629mg/g)，去糖衣，研细，精密称取约0.25g，精密加入浓度为0.201mg/ml的二苯乙烯苷对照品溶液7ml。按“供试品溶液的制备”项下的方法制成供试品溶液，同法测定。
2.9 样品测定 按拟定的含量测定方法，测定 (20110301批,20110303批，20110305批)，每批平行两份，每份平行进样两针。
根据上述三批样品中二苯乙烯苷的平均含量，考虑到其药材何首乌来源的复杂性，以及制备工艺过程中的损失，暂定二苯乙烯苷的含量不得低于2.0 mg/片。
3 讨论
3.1 文献报道，可用紫外分光光度法、酶化学发光法、高效毛细管电泳法等测定二苯乙烯苷的含量。但在测定含何首乌的中药制剂中二苯乙烯苷的含量时，以高效液相色谱法较为常用。
3.2 流动相的选择：参照《中国药典》2010年版一部制何首乌含量测定项下的流动相，即乙腈-水（25：75），供试品色谱中二苯乙烯苷峰与其它峰未能达到基线分离，且基线较高。查阅相关文献，调动流动相比例为22：78时，供试品色谱中二苯乙烯苷峰与其它峰达到基线分离，且出峰时间合适，故确定流动相为乙腈-水（22：78）。
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