血塞通滴丸的含量测定研究

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【摘要】 目的 建立血塞通滴丸的鉴别、含量测定方法。方法 采用TLC法鉴别血塞通滴丸中的人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷 R1；采用HPLC法测定本品三七皂苷R1的含量。结果 TLC鉴别方法简便、准确；三七皂苷R1在0．51～4．08 μg呈良好的线性关系, 人参皂苷Rb1在3．75～30．00 μg呈良好的线性关系。相对标准偏差（RSD）小于1%。重现性试验其相对标准偏差（RSD）小于1%。三七皂苷R1的平均回收率为100．5%，相对标准偏差（RSD）为1．74%；人参皂苷Rg1的平均回收率为99．00%，相对标准偏差（RSD）为1．63%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98．78%，相对标准偏差（RSD）为1．97%。结论 所建的TLC鉴别方法准确、特异性强、无干扰；HPLC含量测定方法简单、分离度高，完全能够控制本品质量。

【关键词】 血塞通滴丸；鉴别；含量测定；TLC；HPLC

血塞通滴丸原剂型为血栓通胶囊，收载于《部颁标准》[1]，原料为三七总皂苷，具有活血祛瘀，通脉活络的作用。用于脑络瘀阻引起的中风偏瘫，心脉瘀阻引起的胸痹心痛；脑梗死，冠心病心绞痛见上述证候者。

1 仪器和试药

仪器：Waters2695高效液相色谱仪。色谱柱：迪马-C18（200 mm×4．6 mm ,5 μm）。电子天平：Sartovius (万分之一天平)；METTLER TOLEDO（十万分之一天平）。化学试剂为分析纯；乙腈为色谱纯；TLC板硅胶G：青岛海洋化工厂出品。人参皂苷Rb1、Rg1和三七皂苷 R1标准品由中国药品生物制品检定所供给。

2 方法与结果

2．1 TLC鉴别方法的比较和选择 试验通过比较《部颁标准》收载的原剂型血栓通胶囊质量标准中的鉴别方法和《中国药典》[2]（2005年版）中三七的鉴别方法。发现原剂型收载的方法分离度小，难以分离完全，借鉴《中国药典》（2005年版）中三七的鉴别方法，各组分得到很好分离，从而确定了滴丸中三七皂苷的TLC鉴别。

取血栓通滴丸0．10 g，加甲醇10 ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1对照品，加甲醇溶解，制成每1 ml各含2．5 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版• 一部 附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各2 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，日光下显相同颜色的斑点；置紫外光灯（365 nm）下检视，显相同颜色的荧光斑点。结果见图1。

2．2 含量测定方法的研究

2．2．1 血栓通滴丸含量测定条件试验[3-5]在参考文献的方法的基础上，对本品的HPLC 洗脱溶剂进行了摸索，比较了甲醇、不同浓度的乙腈以及不同浓度梯度、不同时间梯度的洗脱效果，最后确定为：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下列梯度洗脱。见表1。

色谱条件与系统适应性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下列梯度洗脱。流速为1．0 ml/min，检测波长203 nm，柱温：40℃，理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算，应不低于4 000；人参皂苷Rg1峰和三七皂苷R1峰的分离度应大于2．0。重复进样，其相对标准偏差（RSD）应小于2．0%。

对照品溶液的制备分别取60℃减压干燥2 h的对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1适量，精密称定，加20%乙腈制成每1 ml含三七皂苷对照品0．2 mg，人参皂苷Rg1对照品1．5 mg，人参皂苷Rb1对照品1．5 mg的混合溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品20丸，研细，称取粉末适量(约150 mg)，精密称定，置于10 ml量瓶中，加20%乙腈溶解，并稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

分别精密吸取供试品溶液10 μl与对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，依法测定，记录其峰面积，以外标峰面积法进行计算，即得。

2．2．2 线性考查 准确吸取对照品溶液2．5、5．0、10．0、15．0、20．0 μl注入HPLC仪中，按上述液相条件，依法测定（照中国药典2005年版附录VID测定），记录其峰面积，并计算。实验结果见下表2。

经计算：三七皂苷R1的线性相关系数r=0．999987

回归方程为 y=336953．4x-11615．5

人参皂苷Rg1的线性相关系数r=0．9993

回归方程为 y=299183．8x+126907．6

人参皂苷Rb1的线性相关系数r=0．9999

回归方程为 y=249001x-11772

实验结果表明,三七皂苷R1在0．51～4．08 μg呈良好的线性关系, 人参皂苷Rg1在3． 75～30．0 μg呈良好的线性关系, 人参皂苷Rb1在3．75～30．00 μg呈良好的线性关系。

理论塔板数按人参皂苷Rg1峰计算为52 597，分离度符合要求，空白辅料无干扰。

2．2．3 精密度试验 取供试品溶液，连续进样6次，测定结果见表3。

结果表明:本方法精密度良好，重复进样6针，其相对标准偏差（RSD）小于2%。

2．2．4 重现性试验 分别取同一批号样品粉末各6份，精密称定，按供试品溶液项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行分析, 结果见表4。

结果表明:本方法重现性试验的相对标准偏差（RSD）小于2%。

2．2．5 回收率试验 精密称取已知含量的样品粉末75 mg各6份，分别置于10 ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液4、5、6 ml各3份，加20%乙腈稀释至刻度，摇匀，用0．45 μm滤膜滤过，精密吸取续滤液10 μl注入HPLC仪中，按上述色谱条件进行分析，并计算回收率（n=9）。实验结果见下表5-1、5-2、5-3。

试验结果表明：三七皂苷R1的平均回收率为100．5%，相对标准偏差（RSD）为1．74%；人参皂苷Rg1的平均回收率为99．00%，相对标准偏差（RSD）为1．63%；人参皂苷Rb1的平均回收率为98．78%，相对标准偏差（RSD）为1．97%。

2．2．6 样品溶液放置稳定性试验 取样品溶液一定量，分别于0、4、8、12 h进行测定，记录其峰面积，并计算，结果见表6。

2．2．7 样品测定结果 采用上述方法，检测3批样品，结果见表7。

3 讨论

3．1 血塞通胶囊的鉴别试验中只有人参皂苷Rg1的鉴别，而滴丸中同时对人参皂苷Rg1、Rb1及三七皂苷R1予以鉴别，更能全面控制本品质量。

3．2 鉴于当时的条件，血塞通胶囊中的含量测定方法是以三七总皂甙对照品为标准品的紫外分光光度法，而滴丸剂采用以人参皂苷Rg1为对照品的HPLC法测定，更加简便、准确、实用。

参考文献

［1］ 血栓通胶囊质量标准.中华人民共和国中成药部颁标准．第17册，P108.

［2］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典.化学工业出版社，2005.

［3］ 李性天，周密妹,耿立坚，等．高效液相色谱法梯度洗脱测定三七中三七皂甙R1含量．中国医院药学杂志，2000，20（12）：728-730．

［4］ 周凯，郝美玲，王志君，等．参芪胶囊中三七皂甙Rl的含量测定．中成药，1997，19（2）：19-20．

［5］ 朱洁，温敏，张洪彬．HPLC-ELSD测定三七胶囊中人参皂苷Rg1和Rb1．中成药,2004，26（1）：33-35．