口腔扁平苔藓患者细胞免疫功能的研究

开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇口腔扁平苔藓患者细胞免疫功能的研究范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！

[摘要]目的：探讨口腔扁平苔藓（OLP）患者外周血细胞免疫功能状态。方法：采用流式细胞仪检测外周血T 细胞亚群和NK细胞百分比，ELISA法检测血清中细胞因子水平变化。结果：OLP 组外周血中除CD8+细胞外，余CD3+、CD4+和CD56+细胞（NK细胞）的比例均明显低于对照组（P

[关键词]口腔扁平苔藓；细胞免疫

[中图分类号]R781 [文献标识码]B[文章编号]1673-7210（2007）07（c）-116-02

口腔扁平苔藓（oral lichen planus，OLP）是一种常见的慢性口腔黏膜炎症性疾病，具有癌变潜能。其病因和发病机制目前仍不明确，损害可同时或分别发生在皮肤和黏膜，患病率为2%[1]，临床上病程迁延、各种治疗方法效果不佳。OLP的组织病理学表现为基底上皮细胞变性和破坏，基底膜增厚或断裂，并且有淋巴细胞浸润。有研究报道，OLP的发病与病毒感染、焦虑和疲劳、内分泌紊乱及机体免疫功能状态有关[2]，患者的免疫机能存在不同程度的异常。本实验观察30例OLP患者外周血T 细胞亚群和NK 细胞百分比、红细胞C3b 受体花环（RBC-C3bRR）和免疫复合物花环（RBC-ICR）百分率及血清中细胞因子的分泌水平等几种细胞免疫功能指标的变化，旨在探讨OLP 患者发病的免疫机理，为临床治疗提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料

以2004年11月~2006年4月共30例在我科临床诊断和病理确诊的OLP 患者为研究对象，形成实验组。纳入标准：病损无糜烂，无局部刺激因素，无其它口腔黏膜病，无皮肤损害，无系统性疾病；近2月内未接受过全身性免疫治疗，近2 周内未接受抗生素及局部免疫治疗。实验组中男12例，女18例，年龄26～57岁，平均年龄35岁，病程在3～5年以上。同期采集30 例正常体检者静脉血作为对照组，男12 例，女18例，年龄20～60岁，平均年龄38岁。

1.2 试剂和仪器

免疫荧光抗体：CD4-FITC/CD8- PE/CD3-Cy5，CD56-FITC，阴性对照（羊抗鼠） IgG1-FITC/IgG1-PE/CD45-PE-Cy5，FACS溶血素（BD公司）；人IL-10、IL-12 ELISA kit （Endogen公司），酶标检测仪（Bio-Red 450），流式细胞仪（FACS calibur，BD公司），EDS数据处理系统（PE公司）。

1.3 方法

1.3.1 T细胞亚群检测取肝素抗凝血100 μl， 加入相应的荧光标记抗体20 μl，混合，放置4°C、避光处30 min，加入溶血素2 ml 混匀，10 min 后离心，PBS洗涤2次，弃上清，加入300 μl PBS将细胞悬浮，上机检测。

1.3.2 细胞因子的检测采用双夹心ELISA法，按人IL-10、IL-12检测试剂盒说明书，在酶标仪上读取不同浓度的标准品相应的吸光度值（A450值），绘制标准曲线，并进行直线相关回归分析。取待测血清100 μl，按试剂盒说明分别检测IL-10、IL-12的水平，将测得的不同待测标本的A450值代入相应的直线回归方程中，即将得到相应的细胞因子的含量。

1.3.3RBC-C3bRR和RBC-ICR的检测按试剂盒说明书操作，油镜观察，一个红细胞上结合两个以上酵母菌者为一个阳性花环细胞，计数200个红细胞，计算出RBC-C3bRR和RBC-ICR的百分率（%）。

1.4 统计分析

数据以x±s表示，用t检验分析组间的显著性。

2 结果

2.1 外周血T细胞亚群和NK细胞检测结果

OLP患者外周血中CD3+、CD4+、CD4+/CD8+和CD56+细胞分别为（52.19±5.57）%、（25.57±5.07）%、1.02±0.51和（3.69±1.31）%，均明显低于对照组（63.01±8.19）%、（36.19±5.07）%、1.46±0.90和（5.79±1.29）%，两组之间的差别均具有非常显著性差异(P0.05)，表1。

2.2 血清中细胞因子检测结果

OLP 组血清中IL-12产生水平低于对照组，两组之间的差异具有显著性意义(P

2.3 OLP患者的RBC-C3bRR和RBC-ICR检测结果

OLP患者的RBC-C3bRR明显低于对照组，RBC-ICR明显高于对照组，经统计学检验两组之间的差异具有显著性意义（P

3 讨论

口腔扁平苔癣的发病原因和发病机理尚不十分清楚，但大多认为OLP 与免疫功能障碍有关。有学者指出，在疾病的发生发展过程中存在由T细胞介导的免疫应答。T细胞对特异抗原的识别主要是通过T细胞受体发挥作用[3]。口腔扁平苔癣损害组织中T细胞受体TCR Vβ链基因存在优势取用。采用特异性单克隆抗体的免疫组织化学方法，观察到正常人外周血T细胞TCR Vβ的表达水平为0%～7%，而OLP患者损害区T细胞TCR的表达水平为18%～40%，明显高于外周血T细胞[4]。Kawamura等采用PCR半定量分析，并将损害T细胞于外周血细胞的结果进行比较，结果显示，损害T细胞的优势Vβ在各个病例中各不相同，但Vβ2、Vβ6在超过一半的病人中是占优势的[5]，表明OLP损害T细胞通常优势表达Vβ2、Vβ6。Kawamura等的研究还指出，在OLP发病机制中超抗原和普通抗原都起作用，但要确定OLP 的致病性抗原是很困难的，因为内部和外部的抗原太多。到目前为止，已有一些外源性抗原和内源性抗原引起注意，如金黄色葡萄球菌和链球菌毒素等；在自身抗原方面，热休克蛋白[6]、与人同源的鼠Mls抗原等都与口腔上皮细胞有关，被认为是OLP 的致病性抗原[5]。

细胞因子及其平衡在机体免疫应答过程中起重要作用，IL-10和IL-12是调节细胞因子网络平衡的重要因子，IL-10是由Th2细胞亚群分泌，能促进体液免疫，抑制细胞免疫[7]；IL-12由是巨噬细胞和DC等非T细胞分泌，促进CD4+T 细胞分化成Th1细胞，后者释放IL-2、IFN-γ等，促进细胞免疫[8]。NK细胞是抗病毒感染免疫的重要效应细胞。NK细胞杀伤靶细胞不受MHCI类分子限制，能够杀伤受病毒感染后MHCI类分子表达异常、逃逸CTL攻击的靶细胞。本研究发现OLP患者外周血中总的T淋巴细胞比例及TH比例、NK细胞百分比、血清中IL-12的水平均明显低于正常体检对照组（P

红细胞免疫功能是通过红细胞表面的CR1和CR3，将致病菌、病毒及免疫复合物携带至肝、脾加以消毁；通过CD58，CD59，CR1，CR3与淋巴细胞、吞噬细胞上的CD2，CR1，CR2，CR3相互作用，参与免疫调控；通过释放NK细胞激活因子增加NK细胞活性。本研究证实OLP患者的RBC-C3bRR明显低于对照组，RBC-ICR明显高于对照组，两组之间的差别均具有非常显著性的意义（P

由于CD4+的T辅助细胞和NK细胞的数量减少，T细胞分泌的细胞因子的功能和红细胞免疫功能降低所造成的细胞免疫功能低下是OLP发病的主要免疫机制。在临床治疗中， 应采用调节机体免疫功能的方法，将更有利于减少OLP复发。

[参考文献]

[1]Axell T. A plevalence study of oral mucosal lesions in anSwedish population [J].Odontologisk Revy,1976，27(36) :66-68.

[2]Sugerman PB. Disease mechanisms in oral lichen planus:a possible role for autoimmunity[J]. Australas J Dermatol，1993，34 (2):63-65.

[3]姚辉. OLP 损害T 细胞受体β链可变区基因取用的研究[J].临床口腔医学志，2005，21(10):629-630.

[4]Simark-Mattsson C，Bergenholtz G，Jontell M，et al.T cell receptor V gene usage in oral lichen planus;increased frequency of T cell receptors expressiong Vα2 and Vβ3[J].Clin Exp Immmunol,1994，98(3):503-507.

[5]Kawamura E，Nakamura S，Sasaki M，et al.Accumulation of oligoclonal T cell in the infiltrating lymphocytes in oral lichen planus[J].J Oral Pathol Med,2003，32 (5) :282-289.

[6]Chaiyarit P，Kafrawy AH，Miles DA，et al.Oral lichen planus : an immunohistochemical study of heat shock proteins(HSPs) and cytokeratins (CKs) and a unifying hypothesis pathogenesis[J].J Oral PatholMed,1999，28(5):10-16.

[7]Huang M，Sharma S，Mao JT，et al. Non-small lung cancer-derived soluble mediators and prostaglandin E2 enhance peripheral blood lymphocyte IL-10 transcription and protein production[J].J Immunol，1996，157(12):5512-5520.

[8]Larnont AG,Adorini L.IL-12:a key cytokine in immune regulation[J].Immunol Today，1996，17(5):214-217.

（收稿日期：2007-06-12）

“本文中所涉及到的图表、注解、公式等内容请以PDF格式阅读原文”