一起致病性嗜水气单胞菌食物中毒的实验诊断
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[摘要]目的：某一大酒店发生疑似食物中毒，通过样品采集和细菌培养确认中毒原因。方法：实验室对采集的样品进行细菌分离鉴定致病菌。结果：分别从熟鹅肝和患者肛拭中检出致病性嗜水气单胞菌。结论：根据菌株的同源性确认了这是一起由致病性嗜水气单胞菌污染所致的细菌性食物中毒。
[关键词]细菌性食物中毒；致病性嗜水气单胞菌；蛋白酶
2009年8月15日8:00时，江阴市CDC接报一起疑似食物中毒的病例，患者腹痛、腹泻等症状，先后到医院就诊。经流行病学调查、临床资料分析，排除化学性因素后经微生物检验，分别从熟鹅肝和患者肛拭中检出致病性嗜水气单胞菌。现将结果报告如下：
1.材料与方法：
1.1流行病学调查：本次事件发生于本市某一大酒店，有两批人员进食，中餐13桌130人，晚餐1桌11人，经调查14日中晚餐有明确的共同食物史。自7月14日14:00起相继有人出现腹痛、腹泻等症状而到医院就诊。在14名用餐人员中，19人先后发病，潜伏期最短的2.5小时，最长的24小时。
1.2样品采集：患者肛拭3份。操作工具涂擦物14份（包括砧板、操作台表面、熟食菜刀、熟食冰柜内壁等）。可疑食物27份。共计采样44份。
1.3检验项目：沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌、致病性弧菌、气单胞菌。
1.4检验依据：《食品卫生微生物学检验》GB/T4789-2003GB/T4789-2008、《致病性嗜水气单胞菌检验方法》GB/T16852-2002、《变形杆菌食物中毒诊断诊断标准及处理原则》(附录A)WS/T9-1996、《感染性腹泻诊断标准》WS271-2007、《全国临床检验操作规程》（第三版）。
1.5试剂来源：增菌、分离培养基及微量生化管均购于杭州天和微生物试剂有限公司。血平板购于上海科玛嘉。ID32E购于法国梅里埃。以上试剂均在有效期内使用。盐耐量试验管，葡萄糖产气试验管，脱脂奶平板均自备。
2.分离培养和结果：
2.1分离培养：44份样品到达实验室后采用直接平板分离和增菌培养二步检测。直接平板划种WS平板、SS平板、EMB平板、血平板、TCBS平板、4号琼脂平板、营养琼脂平板（28℃）；增菌培养及划种相应平板SC增菌液（WS平板）、7.5%NaCL肉汤增菌液（血平板）、肠道增菌肉汤（EMB平板）、APW（TCBS）、GN增菌液（6小时和24小时两次划种SS平板），碱性蛋白胨水（37℃划种TCBS、4号，28℃划种营养琼脂平板）。以上增菌液和分离平板不注明培养温度时间的均为36℃24小时。经分离培养后观察不同平板上菌落生长特征，接种双糖，根据双糖和平板上菌落生长情况排除沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、变形杆菌、致泻性大肠埃希菌。
2.2可疑菌落生长特征：两份样品（一为熟鹅肝，另一为患者肛拭）在TCBS平板上可疑菌落为较小的黄色菌落，营养琼脂平板上可疑菌落为灰白色、半透明、光滑湿润、凸起、圆整、直径约2~3mm。氧化酶试验（纸片法）均为阳性。
2.2形态与染色：对氧化酶试验阳性的菌株进行革兰氏染色镜检为革兰氏阴性无芽胞短小杆菌，菌体稍弯。悬滴标本可见运动活泼。
2.3双糖生长情况及初步生化反应：可疑菌落在1%NaCL克氏双糖铁上斜面产碱，底层产酸产气，继续初步生化试验。结果见表1。根据平板分离、形态与染色、双糖生长情况、表1生化反应，初定为气单胞菌。
2.4ATB-Expression细菌鉴定仪鉴定结果：API鉴定系统结果提示：“非常好鉴定结果”嗜水气单胞菌群%id=99.9，T=0.75。
2.5致病性嗜水气单胞菌的鉴定：
2.5.1嗜水气单胞菌的生化试验：从双糖管上挑取菌落进一步作生化鉴定和鉴别试验。结果见表2。根据表2生化反应结果判断为嗜水气单胞菌。
2.5.2嗜水气单胞菌致病性鉴定：脱脂奶平板试验，取普通斜面上的纯化菌落接种于1%脱脂奶蔗糖胰蛋白胨平板经28℃培养24小时后，菌落周围出现清晰、透明的溶蛋白圈。
2.6结果：综合上述试验，从熟鹅肝和患者肛拭中检出两株菌落形态、生化试验、脱脂奶平板试验均相同的致病性嗜水气单胞菌。
3.讨论：
3.1通过流行病学调查、临床症状、卫生学状况调查及实验室检验结果，从熟鹅肝和患者肛拭中同时检出了致病性嗜水气单胞菌，依据GB14938-94《食物中毒诊断及技术处理总则》，确认了这是一起食用了被致病性嗜水气单胞菌污染的菜肴所致的细菌性食物中毒。
3.2嗜水气单胞菌是气单胞菌属中较常见的代表种，广泛存在于自然界，为人类和动物感染的主要来源，病人和病畜也可成为传染源。该菌可以产生溶血素、肠毒素、蛋白酶等多种毒力因子，可引起人类急性胃肠道感染和食物中毒，产生急性胃肠炎症状，霍乱样腹泻、败血症和蜂窝组织炎等。目前，由嗜水气单胞菌引起的腹泻屡见报到，已被证实为腹泻病原菌[1]。
3.3致病性嗜水气单胞菌的检验方法，对于嗜水气单胞菌的分离鉴定及根据蛋白酶阳性区分致病性菌株与非致病性菌株，有助于致病性嗜水气单胞菌感染的确切诊断。在鉴定嗜水气单胞菌是否有致病性的脱脂奶蔗糖胰蛋白胨平板的配方比较简单，容易操作，因此脱脂奶平板试验是鉴定该菌的必做项目。
3.4气单胞菌属的细菌通常不产生赖氨酸脱羧酶，但与致病性有关的气单胞菌赖氨酸脱羧酶阳性率较高[2]，我实验室本次从熟鹅肝和患者肛拭中检出的嗜水气单胞菌赖氨酸试验均为阳性。
3.5在本次事件中感到遗憾的是因为患者就诊医院不同寻找难度高，找到时患者已用大量抗生素治疗，所以肛拭采样不多。在今后的工作中要引起重视，尽量多采集样品标本，保证检验结果的可靠性。此次食物中毒事件发生于夏季，在本地属于雨水多发季节加上气温偏高，有利于气单胞菌的大量生长繁殖，稍不防范就会引起食物中毒。
3.6目前，国外已将嗜水气单胞菌纳入腹泻病原菌的检测范围，是食品卫生检验的对象[3]。因此笔者认为有必要将已公认可以引起食源性疾病的致病性嗜水气单胞菌纳入食物中毒诊断标准中。
参考文献：
[1]王琳娜.嗜水气单胞菌感染导致群体性腹泻的病原学分析[J].中国卫生检验杂志.2007，5(17):922-923
[2]李刚山.嗜水气单胞菌分离株的鉴定与菌株肠毒素及致病性研究[J].中国热带医学.2008，8(3):374-375
[3]杨守明.嗜水气单胞菌及其对人的致病性[J].疾病控制杂志.2006，10（5）：511～514.
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