3种消毒剂对烟草漂浮育苗中TMV的钝化效果

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摘要：为指导烟草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗中剪叶工具和旧苗盘消毒剂的使用，采用半叶法测定了3种消毒剂对烟草普通花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）病叶汁液和病苗干根、干叶中TMV的钝化效果，同时运用叶面喷雾法测定了消毒剂常用浓度下烟苗的药害发生率和症状。结果表明，兆冠50倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、50倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒；锦钰50倍稀释液处理5 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、50倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒；金百万20倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒、20倍稀释液可完全钝化病苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒。常用浓度下金百万基本不产生药害；锦钰和兆冠易产生药害，症状主要表现为退绿斑点、坏死和叶片畸形。

关键词：烟草（Nicotiana tabacum L.）；漂浮育苗；烟草普通花叶病毒（tmv）；消毒剂；药害

中图分类号：S572 文献标识码：A 文章编号：0439—8114（2012）19—4280—04

目前烟草（Nicotiana tabacum L.）漂浮育苗技术已在我国烟草生产中得到广泛应用，漂浮育苗的一个突出病害就是由烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）引起的烟草花叶病毒病[1]。在烟草漂浮育苗过程中，TMV污染的苗盘和剪叶工具是烟草普通花叶病毒的重要初侵染源[2]。生产上使用的育苗盘具有多孔特性，清洗和消毒较困难，常常黏附有烟苗残体，而TMV在病残体和环境中稳定性强，可在干残体中存活多年[3]；同时在烟草育苗期间需剪叶3～5次，且育苗集中度高，一旦有毒源存在，很容易传播，造成病毒大面积侵染。因此，筛选安全、有效的消毒剂对烟草漂浮育苗中病毒病的防控具有重要意义。

前人对育苗过程中的剪叶工具和池水消毒剂分别进行过筛选[4—6]，评价了蒸汽[7]、部分药剂对旧漂浮盘残留物中TMV的钝化效果[8]，但未对有效消毒剂同时进行病苗残留物（根、叶）和剪叶工具中的TMV钝化效果评价，而消毒剂如能同时用于苗盘和剪叶工具消毒，在实际生产上将更为经济和方便。结合生产实际，选用3种消毒剂模拟剪叶工具和旧育苗盘病苗残留物消毒，比较3种消毒剂钝化病叶汁液和病苗干根、叶中TMV的效果及在常用浓度下接触烟苗的药害症状，以期为烟草漂浮育苗消毒剂的选择和科学使用提供依据。

1 材料与方法

1.1 消毒剂

聚维酮碘水溶剂（金百万），北京东旺农药厂；10%的二氧化氯粉剂（兆冠），潍坊兆冠化工有限公司；中性消毒粉剂（锦钰），贵州遵义泉通化工有限公司。消毒剂现用现配。

1.2 供试烟草和病毒

供试烟草品种K326和Coker 176由贵州省烟草科学研究所提供。K326、Coker 176按常规育苗规程进行管理，K326于成苗期进行药害试验；Coker 176成苗后于室内防虫网盆栽，7～8片叶时用于接种，接种前打顶，去除其他叶片，保留生长整齐一致的3～4片叶；TMV毒源由贵州省烟草科学研究所保存。

1.3 TMV体外抑制效果测定

称取2 g典型TMV病叶，加去离子水和600目金刚砂研磨并稀释100倍，用灭菌纱布过滤后取上清做接种病液。将一定浓度的消毒剂稀释液与TMV病叶汁液等量混合，室温分别接触5、20 min后摩擦接种，接种前喷洒适量金刚砂于叶片表面。左半叶接种去离子水处理的TMV病叶汁液（对照），右半叶接种经消毒剂处理的TMV病叶汁液，每半片叶接种200 μL。接种后清水喷雾冲洗叶面，重复3次。接种5～7 d后统计枯斑数（6个半叶的平均值），计算抑制率。

抑制率=[1—（处理平均枯斑数/对照平均枯斑数）]×100%。

1.4 病苗干根和干叶的消毒剂浸泡处理

根据1.3的试验结果，选用病叶汁液病毒抑制率达100%的消毒剂浓度模拟旧育苗盘的消毒。将风干的TMV病苗的细侧根和叶细条置于小烧杯中，分别加入材料鲜重20倍体积的消毒液浸泡20 min，倒去消毒液，用塑料薄膜密封烧杯口，放置2 d后加入材料鲜重20倍体积的去离子水研磨，过滤取上清液人工接种；对照加入去离子水，其余同处理。

1.5 药害试验

采用160孔苗盘育苗，常规管理，在烟苗成苗期进行试验。消毒剂设200倍、400倍稀释液两个浓度，每一浓度消毒剂设两种处理，施药5 min后清水喷雾冲洗（W）和施药后不用清水冲洗（NW），每处理160株烟苗。采用手持喷雾器每盘喷施消毒液7～8 mL，叶面雾滴均匀无流失。以去离子水处理为对照，药后第7天调查显症株数和药害症状，调查时无明显侵染性病害症状的不正常现象均记录为药害症状。

药害率=（显症株数/总株数）×100%。

1.6 消毒液的腐蚀作用观察

把铁钉、铜丝和漂浮盘泡沫塑料放入玻璃器皿内，分别加入金百万、兆冠、锦钰100倍稀释液和自来水密封浸泡，1、3、5 d后观察腐蚀结果。

2 结果与分析

2.1 消毒剂对TMV的体外抑制效果

不同稀释倍数消毒剂与等量病叶汁液混合并放置一定时间后接种Coker 176，以测试消毒剂对TMV的钝化效果。由表1可知，在消毒剂50、100、400、800倍稀释液条件下，混合液接触5 min后接种，兆冠对TMV的抑制率分别为95.80%、68.88%、28.20%、4.31%，锦钰对TMV的抑制率分别为100.00%、76.10%、72.08%、53.04%；混合液接触20 min后接种，兆冠对TMV的抑制率分别为100.00%、84.82%、46.09%、45.11%，锦钰对TMV的抑制率分别为100.00%、81.01%、75.18%、59.09%；在20、100、400、800倍稀释液条件下，混合液接触5 min后接种，金百万对TMV的抑制率分别为93.83%、61.19%、28.67%、10.81%；混合液接触20 min后接种，金百万对TMV的抑制率分别为100.00%、73.67%、49.74%、43.39%。消毒剂对病毒的抑制率均随使用浓度的降低而下降。

2.2 消毒剂对病苗干根和干叶中TMV的抑制效果

根据2.1的试验结果，在稀释20～50倍的高浓度条件下，测试了3种消毒剂对带毒烟苗干根和干叶的钝化效果。结果表明，锦钰50倍稀释液、兆冠50倍稀释液和金百万20倍稀释液处理2 d后可完全灭活病苗干根和干叶中的病毒。

2.3 常用浓度下3种消毒剂对烟苗的药害情况

施药7 d后调查常用浓度下3种消毒剂对K326的药害情况，结果见表2。从表2可以看出，在200倍、400倍稀释液处理下（产品推荐使用浓度），施兆冠后不用清水冲洗药害率分别为95.7%和88.6%，药后用清水冲洗药害率分别为7.1%和2.9%；施锦钰后不用清水冲洗药害率分别为71.4%和42.9%，药后用清水冲洗药害率分别为2.9%和0；施金百万不用清水冲洗药害率分别为4.3%和0，药后用清水冲洗烟苗正常。锦钰主要引起烟苗出现退绿斑点，一般不产生畸形和坏死；兆冠可导致烟苗出现畸形和坏死，叶片多产生褐色斑点；金百万对烟苗基本不产生药害。表明烟苗对兆冠和锦钰两种消毒剂均较敏感，易产生药害，在相同药液浓度下锦钰药害程度轻于兆冠，在生产上两者均不宜用作烟苗直接消毒和育苗池水消毒。

2.4 消毒剂对铁钉、铜丝和漂浮盘泡沫塑料的腐蚀作用

消毒剂均使用100倍稀释液，与自来水相比，兆冠100倍稀释液对铁钉、铜丝具有较强的腐蚀作用，1 d后观察即可见明显的腐蚀现象，随时间的延长腐蚀加剧且严重，漂浮盘泡沫塑料无明显的腐蚀现象；锦钰100倍稀释液在浸泡1 d后观察无明显的腐蚀现象，3 d后观察可见铁钉、铜丝有腐蚀现象，随时间延长腐蚀加剧，对漂浮盘泡沫塑料无明显腐蚀作用；金百万对漂浮盘泡沫塑料无腐蚀作用，浸泡3 d后对铁钉和铜丝有一定的腐蚀作用，程度轻于锦钰和兆冠。表明消毒剂对金属类材料均有一定的腐蚀作用，应用时不宜用金属类器具长时间盛放药液，若使用喷雾器喷施，用药后应立即清洗喷雾器。

3 小结与讨论

在危害烟草的诸多种病毒中，就病毒的体外保毒期、稀释限点[2]、钝化温度和传播方式比较而言，TMV是最顽固、最容易通过剪叶等途径传播的病毒，通过测定消毒剂对TMV的抑制效果，对于指导生产中利用消毒剂防治其他常见烟草漂浮育苗的病毒是可行的[4，5]。酶联免疫法是病毒检测最为常用的方法，但病毒粒子灭活、钝化后仍具有抗原性，同时消毒剂可干扰检测，因此试验通过寄主枯斑的抑制率来评价消毒剂对TMV的抑制效果。

兆冠50倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒，50倍稀释液处理2 d可完全钝化烟苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒；锦钰50倍稀释液处理5 min可完全钝化病叶汁液中的病毒，50倍稀释液处理2 d可完全钝化风干的烟苗细侧根和叶片细条中的病毒；金百万20倍稀释液处理20 min可完全钝化病叶汁液中的病毒，20倍稀释液处理2 d可完全钝化烟苗风干的细侧根和叶片细条中的病毒。锦钰和兆冠消毒剂对烟苗均易产生药害、对金属类材料均有一定的腐蚀作用。从3种消毒剂对病毒的钝化效果来看，从大到小为锦钰、兆冠、金百万；就消毒剂对烟苗的药害程度和对金属类材料的腐蚀作用来看，金百万优于兆冠和锦钰。

试验使用的病毒浓度较高（2 g TMV病叶加去离子水和600目金刚砂研磨后稀释100倍），实际生产中剪叶工具、苗盘和人为操作的带毒浓度远低于试验浓度，因此试验确定的消毒剂使用浓度和使用时间在实际应用中是可靠的。根据试验结果，综合考虑消毒对象可能存在的病毒量、使用成本等因素，锦钰和兆冠对育苗盘、剪叶工具和育苗场地的消毒应不低于100、150和500倍稀释液的浓度；金百万对育苗盘、剪叶工具和育苗场地的消毒应不低于50、100和400倍稀释液的浓度。为保证彻底杀灭病毒，3种消毒剂对育苗盘、剪叶工具的接触时间应不低于20 min。锦钰和兆冠对烟苗可产生一定的药害现象，生产上均不宜用作烟苗直接消毒和育苗池水消毒，只可用于育苗盘、剪叶工具和育苗场地的消毒。试验中金百万对烟苗基本不产生药害，但未涉及施用金百万对烟苗生长和育苗池水的影响，因此是否能用于烟苗直接消毒及育苗池水消毒还有待研究。3种消毒剂对金属类材料均有一定的腐蚀作用，应用时不宜用金属类器具长时间盛放药液，若使用喷雾器喷施，用药后应立即清洗喷雾器。

在漂浮育苗过程中，使用消毒剂进行烟草病毒病的防治只是诸多手段之一，同时上述方法还需要田间试验进一步完善和验证。

参考文献：

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