淀粉酶测定方法难以标准化原因探讨

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【摘要】 淀粉酶测定在许多疾病中起着至关重要的作用，尤其在急腹症的诊断、鉴别诊断中。但其测定方法很多，难以标准化，也给临床资料的交换带来困难。通过分析比较，国内外应用的淀粉酶测定方法、试剂和仪器情况，认为染料释放法中的另一类以染料和可溶性限定底物结合的方法，其底物分子结构明确，稳定性显著提高，其为动力学法，随着生化分析仪的普及，此方法已成为淀粉酶测定的主流。但我国地域广阔，人口众多，经济发展很不平衡，有不少贫困地区，所以很难在短时间内普及动力学法。干化学法、湿化学法、比色法并存的现象还需持续一段时间。

【关键词】 淀粉酶；标准化；动力学法

α-淀粉酶(ΑMS，EC3.2.2.1)的升高见于急性胰腺炎，流行性腮腺炎等疾病，急性胰腺炎时，血和尿中的a-淀粉酶(AMS)活性显著增高。其测定方法很多，尚难以标准化，由于测定原理和底物性质的不同，淀粉酶的测定方法已超过200种以上[1]。各实验室间α-淀粉酶测定值离散度较大，对室间和室内质评的开展极为不利，也给临床资料的交换和临床诊断带来困难，现分析如下。

1 α-淀粉酶测定的价值

-淀粉酶来源于多种器官：胰淀粉酶由胰腺产生并释放到肠道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由肾脏清除并经尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。-淀粉酶是将淀粉降解为麦芽糖的水解酶类。急性胰腺炎发作患者在腹痛开始后的几小时内，血液淀粉酶活力升高，约12 h后达到峰值；并至少在5 d后活力回复至参考范围内。由于多种非胰腺疾病如腮腺炎、肾功能不全等也会引起 检测血清、尿液中 -淀粉酶的升高。其升高程度低于急性胰腺炎发作时。急性胰腺炎是一种急腹症，必须及时做出正确的诊断和鉴别诊断。1929年Elman等发现血清淀粉酶升高对诊断急性胰腺炎有价值，使诊断有了可靠的客观指标，淀粉酶的测定使成为急性胰腺炎最常用的比较准确的诊断方法，尿淀粉酶测定因标本易采集，而被作为急性胰腺炎首选的检查项目[2]。一般而言，尿淀粉酶活力较正常高出2倍以上才有意义，年龄性别对酶活力无影响，胸、腹水测定淀粉酶也常被临床上作为诊断依据。血液和尿液中的淀粉酶活性，并不一定成平行关系。一般认为血液中淀粉酶活性反应正确、敏感，但在急性胰腺炎时，血液淀粉酶上升为一过性，易造成误诊、漏诊、而相对尿液淀粉酶出现高值往往时间较长。血液和尿液同时测定对急性胰腺炎的诊断和鉴别诊断具重要的价值。

2 方法学比较

由于测定原理和底物性质的不同，淀粉酶的测定方法已超过200种以上。这些方法可归纳为二类：天然淀粉底物方法和(分子组成)确定底物方法。以天然淀粉为底物的测定方法，如淀粉分解法、糖化法和色素淀粉法等。由于天然淀粉分子结构的不确定，故不同植物来源的淀粉和不同批号的淀粉，其分子结构和化学性质不尽相同，因此难以达到方法学标准化，测定误差大。目前除碘・淀粉法外，这类方法已被淘汰。使用(分子组成)确定的淀粉酶底物和辅助酶与指示酶组成的淀粉酶测定系统，可以改进酶反应的化学计量关系，能更好地控制和保持酶水解条件的一致性。这些底物有小分子寡聚糖(含3～7个葡萄糖单位)和对・硝基苯酚・糖苷等。其中，麦芽戊糖和麦芽四糖是极好的淀粉酶底物，试剂稳定，水解产物确定，化学计量关系明确。目前市售试剂盒就有好几种，以寡聚糖为底物的淀粉酶测定系统[1]。常用的碘-淀粉比色法，方法虽简单，但重复性不好，酶反应线性差，测定范围窄，高单位时往往误差较大[3]，常困扰着临床的诊断与鉴别诊断，国内外专家在这方面做了大量的探讨[4-6]。碘量法中的碘比色法因底物难以标准化，反应不成零级反应等缺点而被认为不是理想方法，但因其简单、快速、灵敏和价廉而在国内应用较广。糖化法因受内源性GLU的干扰，荧光法需特殊仪器，染料稀释法中的染料淀粉需离心分离等缺点，均被认为不是理想方法。染料释放法中的另一类以染料与可溶性限定底物结合的方法，近年来得到不断的发展主要表现为人工合成的底物分子结构明确，稳定性显著提高[7]，这类方法变成了推荐方法，其方法为动力法，随着生化分析仪的普及，此方法得以实施，已成为目前α-淀粉酶测定方法的主流。由于多学科新技术在干化学领域相互渗透，结合干化学分析有了长足的发展，干化学法在临床生化检验中得以应用推广。该法具有简便、快速、试剂保存时间长、干扰因素少等优点，而成为急诊生化检验的又一新方法。干化学是指将液体检测样品直接加样到干燥试剂片上，以被测样品的水分作为溶剂所引起的特定的化学反应，从而进行化学分析的方法，是以酶法为基础的一类分析方法。就淀粉酶干片而言，其方法也来源于染料稀释法。它是由上至下分为上层载片、涂片层、试剂层、支持物和下层载片五层，粘合成一个簿片，试剂层中的活性试剂是染色的支链淀粉和一种媒染剂，其他成分包括颜料，粘合剂和表面活性剂。将标本加在载片上，图片层均匀扩散，此层含有染色淀粉，染色淀粉与标本中的淀粉酶作用，水解成小分子的染色糖类，该糖类扩散至下面的试剂层形成很强的颜色复合物，在固定保温期后，测定来自有色层的反射光量，从而得出淀粉酶的浓度[8]。干化学法由于大家的认知程度，仪器价格，试剂价格等诸多因素还不能推广。

3 结论与展望

我国地域广阔、人口众多、经济发展还很不平衡，有不少贫穷地区，所以很难在短时间内普及动力法淀粉酶测定。干化学法，湿化学法，比色法并存的现象还需持续一段时间。干化学发与湿化学法许多专家学者的探讨具有很好的相关性[9]。随着干化学技术与配套仪器的日益成熟，干化学分析必将得到越来越广泛的推广应用，在急诊生化检侧中发挥其应有的作用。

参 考 文 献

[1] 叶应妩.全国临床检验操作规程.东南大学出版社，2006，423.

[2] 钟守先.胰腺外科.湖南科学技术出版社，1997：265-297.

[3] 冯仁丰.实用医学检验学.科学技术出版社1996；439.

[4] 朱玉胜.α-淀粉酶底物研究进展.上海医学检验杂志，1996：11(4)253-254.

[5] 杨昌国，用亚乙基封闭的G6-PNP作底物偶联多功能的α-葡萄糖苷酶测定淀粉酶.临床检验杂志，1997；15(1)：5-8.

[6] 史立宁.淀粉酶不同测定方法间血清标本与人源提纯酶测定结果互换性的研究.临床检验杂志，2000；18(2)：655-68.

[7] 叶应妩.临床检验学.天津科学技术出版社，1997：286.

[8] 潘杨.干化学法测定尿淀粉酶的可行性探讨.苏州大学学报(医学版) 2003；23(4) 411.

[9] 陈涛.干化学法和湿化学法对尿淀粉酶检测的比较.广州医药 2004，1(35)：65-68.