东方百合小鳞茎发生的诱导

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摘要：为了研究东方百合快速繁殖方法，以麝香百合鳞片为试材，筛选出消毒灭菌效果相对较好的处理；并以MS培养基为基础培养基，附加不同种类和浓度的植物生长调节剂（6-BA，NAA）诱导小鳞茎及芽的发生。结果表明：酒精消毒40 s＋0.5%升汞灭菌7 min的处理消毒灭菌效果最好；在暗培养下，外植体通过小鳞茎直接发生；在光照培养下，外植体通过芽直接发生；6-BA对百合小鳞茎和芽直接分化的作用效果最为明显，NAA次之，基本培养基的影响最小。

关键词：东方百合；诱导；鳞茎

百合是世界十大切花品种之一，采用常规的小鳞茎分株方法繁殖，繁殖系数较低，且长时间繁育后容易感染病毒病，影响百合品质。组织培养快速繁殖技术能够迅速去除病毒并更新品种，具有较高的经济价值和开发潜力。同时，组培快繁不受气候、土地资源、环境变化等因素的影响，且生产周期短、产量高，能够在较短时间内进行规模化、标准化生产，现已得到广泛应用[1]。近年来，许多学者进行了有关百合组织培养繁殖的研究，所选的外植体有珠芽、幼茎段、叶片、鳞片等，主要利用丛芽诱导获得再生植株[2-3]。笔者以鳞茎为材料，研究试管小鳞茎直接发生的最佳条件，为大规模生产百合鳞球茎和脱毒苗做初步的探索。

1 材料和方法

1.1 试验材料

百合品种为麝香百合（Lilium longiflorum Thumb.），英文名Easter lily，由福建农业职业技术学院组培实验室提供。

1.2 试验方法

取清洗干净、处于休眠期的百合鳞片进行不同组合的消毒灭菌处理后，切成小碎片，接种于诱导培养基上，进行小鳞茎的诱导。

1.2.1 外植体消毒

设10个处理（含CK）[4-5]，取百合鳞茎片，先用75%酒精消毒，再用0.5%升汞灭菌，之后用无菌水冲洗干净，具体处理时间组合见表1。

1.2.2 培养条件

从10个外植体消毒处理中，筛选出消毒效果相对较好的处理（即酒精消毒40 s＋0.5%升汞灭菌7 min），对百合鳞茎片进行消毒。然后采用10个不同浓度的6-BA和NAA组合，分别对小鳞茎进行暗培养和光照培养（光照强度为1 500 lx）[6]，具体设计组合见表2。

2 结果与分析

2.1 不同消毒灭菌处理对小鳞茎污染率和死亡率的影响

如表3所示，清洗干净的百合鳞茎片在消毒灭菌后均能获得相对无菌的培养材料。其中处理6（酒精消毒40 s＋0.5%升汞灭菌7 min）与处理8（酒精消毒50 s＋0.5%升汞灭菌6 min）的污染率最小，分别为1.6%和1.7%。所有材料在处理后，死亡率均较小，为0～5.2%。直接用0.5%升汞灭菌的处理效果与组合灭菌相似，污染率只有3.8%。

2.2 不同浓度6-BA和NAA以及暗培养对小鳞茎发生率的影响

不同浓度植物生长调节物质及暗培养组合对鳞茎片的培养结果见表4。在没有光照的条件下，所有外植体都通过小鳞茎直接发生。处理Ⅷ（3/2 MS＋2 mg/L 6-BA＋0.2 mg/L NAA）小鳞茎发生率最高，为177.8%。通过极差分析得出 [7]，基本培养基的极差为32.2%，6-BA的极差为51.3%，NAA的极差为35.7%，说明6-BA浓度的变化对百合小鳞茎形成的影响最大，其次是NAA的浓度，基本培养基的影响最小。

2.3 不同浓度6-BA和NAA以及光照培养对小鳞茎发生率的影响

不同浓度植物生长调节物质及1 500 lx光照组合对鳞茎片的培养结果见表5。在光照条件下，所有的外植体都通过芽直接分化，没有小鳞茎的发生。处理Ⅰ（1/2 MS＋1 mg/L 6-BA＋0.1 mg/L NAA）芽直接分化率最高，为123.3%。通过极差分析得出，基本培养基的极差为11.2%，6-BA的极差为49.9%，NAA的极差为32.5%，说明6-BA浓度的变化对百合芽形成的影响最大，其次是NAA的浓度，基本培养基的影响最小。

3 小结与讨论

清洗干净后贮存的百合内层鳞茎片较容易获得无菌培养材料，只要经过简单的消毒或灭菌处理就可以。光照是影响百合外植体进行小鳞茎直接发生和芽直接分化的决定性因素。6-BA对百合小鳞茎和芽直接分化的作用效果最为明显，NAA次之，基本培养基的影响最小。

参考文献

[1] 王丽艳.百合的快速繁殖与多倍体新种质的培育[D].重庆:西南农业大学,2004.

[2] 陆春霞.百合组织培养与多倍体研究[D].南宁:广西大学,2004.

[3] 闫海霞.菊芋（Helianthus tuberosus Linn）的离体培养与十二倍体新种质选育[D].重庆:西南大学,2009.

[4] 段超.几种百合组织培养及多倍体育种技术的研究[D].北京:北京林业大学,2009.

[5] 付文奇.东方百合“帝伯”（Tiber）组织培养技术研究[D].杨凌:西北农林科技大学,2008.

[6] 张延龙,徐炎,李峰,等.秦岭野百合鳞片植株再生体系的建立[J].西北植物学报,2004(7): 1315-1318.

[7] 段祖安,王洪利,赵艳燕,等.卷丹百合组培快繁技术的研究[J]山东农业大学学报:自然科学版,2009(4): 495-497.