广东紫珠"药学成分的提取与结构鉴定

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(信阳职业技术学院附属医院河南信阳464000)【摘要】目的 对广东紫珠的化学成分提取并进行了结构鉴定。 方法 利用化学方法及波谱分析技术，进行提取、分离和鉴定。 结果和结论 提取分离出了5个化合物，经鉴定化合物分别为木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、正己醛、肉桂酸苄酯、苯丙烯酸、白桦脂酸。 【关键词】广东紫珠，抗炎，提取，分离，结构鉴定【中图分类号】R 473【文献标识码】A【文章编号】1004-5511（2012）04-0664-01 广东紫珠(Callicarpakwangtungebsis Chun.)为马鞭草科紫珠属植物的干燥全草，广东紫珠别名万年青，老鸦饭，金刀菜等，常生于山坡林或灌木丛中，广泛分布于湖北、江西、湖南、浙江等省，资源丰富。广东紫珠具有止血、止痛之功效，主治偏头风痛、吐血、跌打肿痛、外伤出血等，在民间主要用于止血疗伤，外伤出血等，其化学成分研究国内外鲜见报道。1.仪器、试剂与材料1.1 仪器:核磁共振仪DPX－400（TMS为内标），上海医药工业研究院分析测试中心，R-201型旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司生产），SHZ－D(Ⅲ)型循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂生产），KQ-250DE超声波提取器（江苏昆山超声仪器有限公司），UV365、254紫外显色仪，CombiFlashRRf中低压柱层析（环球（香港）科技有限公司）。1.2 试剂与材料:所用试剂均为分析纯及化学纯，研究所用药材为生长在江西省的广东紫珠全草。2.方法2.1提取:将风干的广东紫珠8kg粉碎，采用70％乙醇冷浸提取，减压浓缩至干浸膏，10％乙醇超声溶解，取上清液上AB-8大孔树脂，80％乙醇洗脱物432g。将洗脱物浓缩至无醇味，混旋在少量水中，分别用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取，分别得石油醚浸膏约19g，乙酸乙酯浸膏87g，正丁醇浸膏147g，水部位198g。2.2 分离:取乙酸乙酯萃取物浸膏30g进行硅胶柱色谱（Ф6cm*L21cm）分离。填充硅胶（200-300目），样品以石油醚、乙酸乙酯、甲醇按极性递增进行硅胶柱层析， TLC检测合并，并按体积收集馏分，50ml收集一份。其中石油醚：乙酸乙酯（20：1）洗脱得晶体肉桂酸苄酯(9mg)，白桦脂酸(11mg)；石油醚：乙酸乙酯（10：1）洗脱部位经过硅胶柱层析得单体正己醛(17mg)；乙酸乙酯：甲醇（10：1）洗脱部位通过聚酰胺柱层析和中低压柱层析及RP-18柱层析得单体木犀草素7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(22mg)，苯丙烯酸(14mg)。3.广东紫珠活性成分的结构鉴定采用AB-8大孔树脂、Sephadex LH-20、RP18、硅胶和中低压等柱色谱方法，共分离鉴定出5个化合物。经1HNMR、13CNMR、1H-1H COSY、HSQC、HMBC等波谱与化学方法鉴定，分别确定了它们的结构。3.1 化合物1的结构鉴定:浅黄色无定型粉末,易溶于甲醇。酸水解检识到葡萄糖的存在。HCL-Mg反应溶液变粉红色，mp250-253℃，Rf 0.20 ( 氯仿－甲醇－醋酸，5：1：0.01)；1HNMR：δ12.08(1H，S，5-OH)，δ8.59(1H，S，4'-OH)；δ7.46(1H，d，J=8.4Hz，6′-H)，δ7.44(1H，brs，2′-H)；δ6.92(1H，d，J=8.4Hz，5′-H)；δ6,80(1H， brs，8-H)；δ6.78(1H，S，3-H)；δ6.46(1H，brs，6-H)；δ5.10(1H，d，J=7.4Hz，1″-H)；13CNMR(150MHz，DMSO-d6)数据见下表，该化合物的1HNMR［4］13CNMR［5］数据与木犀草素7－O-β-D-吡喃葡萄糖苷的数据基本一致。3.2化合物2的结构鉴定:浅黄色粘稠状液体，易溶于甲醇、丙酮中，FeCl3-K3［Fe(CN6)］试剂反应呈阴性，为非酚性成分。1H-NMR谱显示分子至少含有十个氢质子，看放大后的图谱，知溶剂峰掩盖了一部分氢的信号，δ9.75(1H，t，J=2,4Hz )知该氢为一活泼氢质子信号。δ2.4（2H,m）,δ1.63(2H, d, J=7,15Hz) ,δ0.87(4H,t, J=7,14Hz)。13CNMR谱中提示分子中含有六个碳，其中δ202.6应该为一醛基碳信号，DEPT135显示分子中含有一个羰基、四个CH2、一个CH3，推测分子中含有一醛基，同时结合1H-NMR谱中各氢的偶合关系，并查对相关文献资料确定化合物为正己醛。3.3化合物3的结构鉴定:白色无定型粉末，溶于甲醇及丙酮中，分子极易氧化变质。1HNMR谱显示：芳香区有10个氢质子，借此可以推测分子中可能含有两个苯环，δ6.59（1H，d, J=16Hz），δ7.82(1H，d，J=16Hz)这两个氢信号提示分子中含有一反式双键，且连在能共轭的基团上，得知分子中含有苯丙酰基，另外δ7.94（2H，d， J=8Hz），δ7.65(1H，t，J=7.8Hz)，δ7.57(2H，q)，δ7.50(2H，t，J=8.8Hz)，δ7.35(2H，d，J=3.3HZ)。13CNMR谱显示分子中含有13个碳信号，但13CNMR谱δ128.5左右的三个碳明显比别的碳信号峰高，推测可能为叠碳。DEPT135中给出如下信息：分子含有一个CH2，没有CH3，一个羰基碳、10个CH信号。推测分子中含有一苄基，且苄基中CH2携氧。综合以上分析并查阅相关文献，确定化合物3为苯丙烯酸苄酯，又名肉桂酸苄酯。3. 4化合物4的结构鉴定:化合物4为白色无定型粉末，易溶于水、甲醇中，1H-NMR谱显示化合物含有六组氢，且全为芳香区的信号，其中δ6.50（1H，d ，J=16Hz）, δ7.80 (1H，d, J=16HZ),二者构成连有吸电子基且能发生共扼的反式双键，除此之外还含有五个芳香氢质子，推测可能含有一单取代苯环，综合以上分析推测为苯丙烯酸，参考有关文献对比数据基本一致，故化合物4为苯丙烯酸。3. 5化合物5的结构鉴定:白色无定形粉末，易溶于丙酮，Rf0.47（环己烷：乙酸乙酯=4：1）Liberman-Burchard反应阳性。采用上述类似化学检测并结合光谱数据分析，及与文献对照，故鉴定为白桦脂酸。在接下来的实验中，将会通过二维图谱、质谱、高效液相色谱等对所分离到的五种单体化合物进行进一步的鉴定。广东紫珠中其他单体化合物的提取分离工作还在进行中，由于极性小的部位和极性大的部位容易出现新的单体化合物，因此将会对石油醚萃取部位和水部位进行重点分离。参考文献［1］江苏植物研究所等编著.新华本草纲要［M］.上海:上海科技出版社,1988.400～404［2］国家医药管理局中华本草编委会.中华本草［M］.第六卷.上海:上海科学出版社,1999.553［3］徐国钧,何宏贤,徐潞珊,等.中国药材学(上)［M］.北京:中国医药科学出版社,1996.915［4］周宏雷，袁欠菜.中华苦买菜化学成分的研究［J］. 中草药，199627（5）：267-268