HPLC测定祖卡木胶囊中罂粟碱的含量
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摘要：目的建立hplc测定祖卡木胶囊中罂粟碱含量的方法。方法色谱条件：DIKMA C8（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱；流动相为甲醇-乙腈-1％乙酸铵-1％三乙胺（40∶20∶39∶1）；流速1.0 mL/min，检测波长为240 nm。结果罂粟碱的线性范围为10.91～218.16 ng，r＝0.999 9，平均回收率为97.5％，RSD＝1.01％。结论本法处理简便，测定结果准确，重复性好，可用于本品的质量控制。
关键词：高效液相色谱法；祖卡木胶囊；罂粟碱；含量测定
中图分类号：TQ460.72文献标识码：A文章编号：1672-979X(2007)10-0019-03
Determination of Papaverine in Zukamu Capsules by HPLC
LI Huan-dan1，LI Xue-jun2，LIU Feng3 ，ZHANG Qing-lei3，ZHOU Hong-bing1*
（1. Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006, China; 2. Xinjiang Qikang-habo Parmaceutical Co., Ltd., Urumqi 830054, China）
Abstract：Objective To establish a method for the determination of papaverine in Zukamu Capsules. MethodsThe separation was performed on DIKMA C8 column (250 mm×4.6 mm，5μm).The mobile phase was methanol-acetonitrile -1% ammonium acetate -1% triethylamine (40∶20∶39∶1) with a flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was 240 nm. Results The linear range of papaverine was 10.91 ～218.16 ng (r＝0.999 9) . The average recovery was 97.5％ with RSD 1.01％. Conclusion This method is simple, accurate and reproducible and can be used for the quality control of Zukamu Capsules.
Key words：high performance liquid chromatography; Zukamu Capsules; papaverine; determination
祖卡木胶囊由山奈、睡莲花及罂粟壳等药的提取物组成，具有调节异常气质，清热，发汗，通窍的功效，用于治疗感冒咳嗽，发热无汗，咽喉肿痛，鼻塞流涕等症。方中罂粟壳含有罂粟碱，久服易成瘾，过量摄入会引起心率不齐，严重时致人死亡[1]。本研究用HPLC测定罂粟碱含量，以期较好地控制本品的质量，保证用药安全、合理与有效。
1仪器与试药
LC-10AT高效液相色谱仪（日本岛津公司）；HW-2000色谱工作站；C8柱（250 mm×4.6 mm，5μm）（迪马公司）；甲醇为色谱纯（天津四友生物医学技术开发公司）；水为超纯水；余试剂为分析纯；盐酸罂粟碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：171214-200403）
2方法与结果
检测波长根据预试验，测得其λmax＝238.5 nm，结合文献[2-5]报道，确定为240 nm，吸收光谱图见图1。
2.1色谱条件
色谱柱：DIKMA C8柱；流动相：甲醇-乙腈-1%乙酸铵-1%三乙胺（40∶20∶39∶1）；流速：1 mL/min，检测波长：240 nm；进样量：20μL。
2.2溶液的制备
2.2.1供试品溶液的制备取装量差异项下的内容物约2.5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加入氨试液10 mL润湿碱化后，加三氯甲烷50 mL，振摇5 min，超声80 min后移至分液漏斗中，静置分层，分取三氯甲烷层，水浴挥干三氯甲烷，残渣用甲醇溶解并移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，进柱前用0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
2.2.2对照品溶液的制备取盐酸罂粟碱适量，105 ℃下干燥2 h，精密称定，加甲醇制成每1 mL含54.54 μg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.3阴性对照溶液的制备去除祖卡木胶囊处方中的罂粟壳，按祖卡木胶囊生产工艺制备阴性制剂，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。
2.3方法的专属性考察
照上述色谱条件，分别取供试品溶液、对照品溶液和阴性对照溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，结果显示，盐酸罂粟碱的峰形良好，且与样品杂质峰完成分离，阴性对照溶液无干扰。结果见图2。
2.4标准曲线
精密吸取上述对照品溶液0.1，0.2，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，通过20μL定量环，注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得标准曲线方程为：y = 4 684.2x－5 581（r＝0.999 9），结果见表1。
以上结果表明，在11～218 ng范围内，盐酸罂粟碱峰面积与进样量有良好的线性关系。
2.5精密度试验
取盐酸罂粟碱对照液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释到刻度。按上述色谱条件连续进样6次，每次20 μL，测定峰面积，分别为464 210，453 328，461 056，463 675，457 764和447 245， RSD为1.44%，表明精密度良好。
2.6重复性试验
取同一批号（060906）样品，平行制备6份供试品溶液，分别测定含量，结果见表2。测得平均含量为20.56μg・g－1， RSD为1.75%。
2.7稳定性试验
取供试品溶液（批号：060328）按上述色谱条件，每隔2 h进样1次，记录峰面积，分别为497 189，477 794，480 610，483 490，491 087，结果表明供试品溶液在8 h内稳定，RSD为1.64%。
2.8加样回收试验
取已知罂粟碱含量的样品（批号 060907-1）约1.25 g，精密称定，共6份，分别精密加入盐酸罂粟碱对照液（54.54μg/mL）0.5 mL，按2.2.1方法平行制备供试品溶液，分别测定含量，平均回收率为97.3%，RSD为1.07%。见表3。
2.9样品的测定
取5批样品，分别按2.2.1方法平行制备供试品溶液，分别进行含量测定，5批样品中罂粟碱的含量测定结果如下，见表4。
3讨论
3.1流动相的选择
考察甲醇-乙腈-1%乙酸铵-1%三乙胺的比例分别为55∶5∶39∶1，50∶10∶39∶1，45∶15∶39∶1，40∶20∶39∶1和30∶30∶39∶1，结果以为流动相分离效果最好。
3.2供试品溶液制备方法的选择
本品中罂粟碱含量相对较少，故用液液提取方法提取富集。基本方法是利用罂粟碱呈碱性，经氨试液或氨水的碱化后游离，然后用有机溶剂三氯甲烷提取。比较了两者碱化试剂，发现用氨水碱化容易产生乳化现象，不易分层，故用氨试液为碱化试剂。提取方法上比较了冷浸法（室温24 h）和超声提取法，结果表明超声提取法提取效率高，结果稳定。超声时间方面，比较了20，40，60，80，100 min的提取率，结果表明，时间延长到60 min，提取率基本不再提高。为保证提取完全，把超声时间确定为80 min。
参考文献
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