野生鱼腥草黄酮类化合物清除DPPH自由基的作用
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摘要:以六盘水本地野生鱼腥草为原料,70%乙醇作为提取介质,提取野生鱼腥草黄酮类化合物。以抗坏血酸( VC)和VE为对照品,采用DPPH法研究野生鱼腥草黄酮提取物对自由基的清除作用。结果表明,野生鱼腥草黄酮提取物具有较强的抗氧化作用,在其浓度为51.644g/mL时其清除率可达62.27%,显著高于相同浓度下的VC和VE的清除率。因此,野生鱼腥草黄酮提取物可作为一种天然抗氧化剂。
中图分类号:Q58
文献标识码:A
文章编号:1674-9944(2010)07-0175-03
1 引言
生物体系中存在着大量的脂质氧化和自由基反应。现代医学研究证明,衰老、癌症及炎症等疾病与体内脂质过氧化和自由基有着直接的关系[1]。自由基会使体内的脂质和蛋白质发生链式反应,造成相关细胞结构与功能的破坏,其氧化产物和中间产物也会导致生物膜、酶、组织、基因等损伤,使人体发生病变。在抗氧化酶与内源抗氧化剂的合成量降低的情况下,如果不及时从体外补充外源性抗氧化剂以提高机体抗氧化能力,人体就会加速衰老、易患疾病。天然抗氧化剂有抑制体内脂质过氧化和氧自由基的作用,同时可促进体内抗氧化酶与内源性抗氧化剂的合成。因此,对清除自由基和抑制脂质过氧化作用的天然抗氧化剂研究,己得到普遍关注[2]。
鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb)为三白草科多年生草本植物蕺菜的干燥水上部分。产于我国长江流域以南各省。夏季茎叶茂盛花穗多时采收,洗净,阴干用或鲜用,名见《名医别录》。唐苏颂说:“生湿地,山谷阴处亦能蔓生,叶如荞麦而肥,茎紫赤色,江左人好生食,关中谓之 。菹菜,叶有腥气,故俗称:鱼腥草。” [3]
黄酮类化合物(Flavonoids)又称生物类黄酮(Bioflavonoid),一般能溶于水、稀乙醇、乙酸乙酯等极性溶剂中,难溶于乙醚、氯仿和苯。黄酮具有显著的抗氧化性能。黄酮类化合物具有消炎、改善微循环、抑菌、抗肝炎病毒、抗肿瘤等生理功能,有很高的药用价值。其抗氧化作用早已被人们所重视[4,5]。
2 材料与方法
2.1 原料与试剂
野生鱼腥草(采自六盘水牛亡山),二苯代苦味酰自由基(DPPH)为Sigma公司产品,抗坏血酸(VC),VE,芦丁(Rutin)标准品(比利时进口,北京化学试剂有限公司),无水乙醇,Tris,亚硝酸钠,硝酸铝,氢氧化钠,等试剂均为市售国产分析纯。
2.2 仪器
紫外分光光度计(UV-9100,北京瑞利公司),电子天平(SartoriusBS110S,北京赛多利斯仪器系统有限公司),高速万能粉碎机(FW80型,天津泰斯特仪器有限公司)。
2.3 鱼腥草黄酮类化合物样品的制备[6]
2.3.1 鱼腥草黄酮类化合物的提取方法
准确称取新鲜鱼腥草(65℃烘干至恒重)1g,于烧瓶中加入30mL70%的乙醇,65℃水浴浸提1.5h,过滤,并用70%乙醇定容至50mL,得到鱼腥草黄酮提取液。
2.3.2 鱼腥草黄酮类化合物样品浓度测定
绘制标准曲线。称取在120℃干燥至恒重的芦丁标准品10mg,用70%的乙醇溶解并定容至100mL,使其浓度为100μg/mL。将芦丁溶液用70%的乙醇稀释成0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL,各取1mL于试管中,加70%的乙醇1mL,加5% NaNO2溶液0.3mL,摇匀,静置6min,然后加10% Al(NO3)3溶液0.3mL,摇匀,静置6min,最后再加4% NaOH溶液2mL,摇匀,静置15~20min后,于510nm波长处测定吸光度A。
根据标准曲线的制作方法,以浓度(C,μg/mL)为横坐标,吸光度(A,510nm)为纵坐标,进行线性回归,得到回归方程:
y=0.00262x-0.01314,r=0.9992
鱼腥草黄酮类化合物样品含量的测定步骤:分别吸取1mL样品于10mL容量瓶中,用70%乙醇稀释到刻度。分别取1mL稀释液于试管中,加70%乙醇1mL,依次加入5% NaNO20.3mL,混匀后静置6min,加10% Al(NO3)3 0.3mL,混匀后静置6min,加4%NaOH溶液2mL,摇匀,静置10min,同时以70% 乙醇代替样品液配制空白试剂。在510nm 波长处测定吸光度。
2.4 鱼腥草黄酮类化合物对DPPH自由基的清除实验[7,8]
DPPH溶液的配制:准确称取44mgDPPH,用无水乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中,DPPH浓度为120μmo1/L,避光保存(0~4℃)。对照:0.1mL无水乙醇与3mL120μmo1/LDPPH溶液加入同一试管中,摇匀,在黑暗中放置30min,以无水乙醇为空白在517nm测定其吸光度Ac。
将鱼腥草黄酮提取液分别取0.1mL与3mL120μmo1/LDPPH溶液加入同一试管中,摇匀,在黑暗中放置30min,以无水乙醇为空白在517nm测定其吸光度Ai,并以下式计算其清除率:清除率(%) =[(Ac-Ai)/Ac]×100%,式中,Ac:0.1mL无水乙醇加3.0mLDPPH溶液的吸光度;Ai:0.1mL待测液加3.0mLDPPH溶液的吸光度。按照上面公式计算清除率,清除率越大抗氧化能力越强。
3 结果与分析
3.1 鱼腥草黄酮类化合物样品浓度测定结果
根据实验所得标准曲线回归方程为y=0.00262x-0.01314(式中y为吸光度,x为浓度(μg/mL)),计算样品液浓度,在510nm下测得鱼腥草黄酮提取液的吸光度y=0.122,根据公式计算得到x=51.644μg/mL。
3.2 对DPPH自由基的清除作用
DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基,呈紫色,在517nm处有强吸收,在有自由基清除剂存在时,DPPH的孤电子被配对,使其颜色变浅,在最大吸收波长处的吸光度变小,且这种颜色的变浅程度与配对电子数成化学计量关系。因此,可通过在此波长处吸光度的测定来评价自由基的清除情况。
分别取鱼腥草黄酮提取液0.06、0.08 、0.10mL分别加入70%的乙醇0.04、0.02、0mL,作为不同浓度的鱼腥草黄酮类化合物的样品液,分别标示为样品1、样品2和样品3。
测得Ac=1.076,根据公式清除率(%) =[(Ac-Ai)/Ac]×100%计算清除率,其结果如表1。
表1 不同浓度的鱼腥草黄酮提取液对DPPH的清除作用
样品123
样品浓度/μg/mL
30.98641.31551.644
吸光度0.6130.5160.406
清除率/%43.0352.0462.27
由表1可知,鱼腥草黄酮提取液对DPPH具有较好的清除作用,且在提取液浓度为51.644μg/mL时,清除效果最好,达到62.27%。
3.3 不同抗氧化剂清除DPPH自由基的比较
由表1可知,鱼腥草黄酮提取液对DPPH的最佳清除浓度51.644μg/mL,将VC、VE分别配制成51.644μg/mL的浓度,然后分别取鱼腥草黄酮提取液、VC、VE3种抗氧化剂0.1mL与3mL120μmol/LDPPH溶液加入同一试管中,摇匀,在黑暗中放置30min,以无水乙醇为空白在517nm测定其吸光度Ai,并分别计算其清除率,结果见下表2。
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表2 不同抗氧化剂清除DPPH自由基的比较
抗氧化剂类别浓度/μg/mL吸光度Ai清除率/%
野生鱼腥草黄酮提取液51.6440.40662.27
VC51.6441.0700.60
VE51.6441.0591.00
由表2可以看出,在相同浓度下,鱼腥草黄酮提取液的抗氧化能力显著高于VC与VE。
4 结语
野生鱼腥草中含有黄酮类化合物对DPPH自由基有较强的清除能力。而且黄酮类化合物对DPPH自由基的清除效果与黄酮浓度成正比。在相同浓度下,野生鱼腥草黄酮提取液的抗氧化能力显著高于VC与VE的。野生鱼腥草中黄酮类化合物含量高,提取工艺简单,重复性好,能有效清除自由基,是较强抗氧化性的保健食品,有很大的开发前景。
参考文献:
[1] 方允中,郑荣梁.自由基生物学的理论与应用[M].北京:科学出版社,2002.
[2] 张燕平.天然蜂胶对自由基的清除作用[J].食品与发酵工业,2002,28(l):48~52.
[3] 董世林.植物资源学[M].哈尔滨:东北农业大学出版社,1994.
[4] 毛莉娟,刘学文,冉 旭.苦丁茶中黄酮的提取工艺[J].食品技术,2002(11):18~21.
[5] 蓝航莲,孙树霞.柑橘类黄酮的生理活性研究进展[J].中国食物与营养,2003(2):44~66.
[6] 张 萍,王玉珠,李红宁,等.荞麦中生物类黄酮的提取方法研究[J].食品研究与开发,2007(2):45~48.
[7] 汪河滨,白红进,王金磊,等.黑果枸杞色素清除自由基活性的研究[J].食品研究与开发,2006(11):8~10.
[8] 谭 萍,方玉梅,张春生,等.苦荞种子黄酮类化合物清除DPPH自由基的作用[J].食品研究与开发,2008(12):20~23.
DPPH Radical Scavenging Effect of the Houttuynia Cordata
Thunb Flavonoids
Zhang Chunsheng, Fang Yumei, Wang Yihong, Tan Ping
(Liupanshui Teachers Institute; Shuicheng, 553004, China)
Abstract: With the local materials of Houttuynia cordata Thunb at Liupanshui, the activity component was extracted with 70% ethanol. Using the assay system of DPPH, the antioxidant activities of Houttuynia cordata Thunb flavonoids were studied and compared with those of VE and VC. The result shows that the extract of the Houttuynia cordata Thunb flavonoids could inhibit lipid peroxidation and scavenge active oxygen free radicals. The elimination of the density of the Houttuynia cordata Thunb flavonoids (51.644μg/mL) was attained by 62.27%, and remarkable exceeded the same density VEand VC. So the Houttuynia cordata Thunb flavonoids showed strongest inhibitory effect on the antionxidation of superoxidized anionic and lipid peroxidantion.
Key words: houttuynia cordata thunb; flavonoids; DPPH free radical
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