HPLC测定舒通安泰胶囊中大黄素和大黄酚的含量

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摘要：目的 建立舒通安泰胶囊中大黄素、大黄酚的高效液相色谱测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定大黄素、大黄酚的含量，色谱柱为Thermo C18柱（5 ?m，4.0 mm×250 mm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15），检测波长为254 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃。结果 大黄素的进样量在0.016～0.080 ?g之间时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 6。大黄酚的进样量在0.032～0.160 ?g时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 8。结论 本测定方法简便、准确、重复性好，可用于舒通安泰胶囊的质量控制。

关键词：舒通安泰胶囊；高效液相色谱法；大黄素；大黄酚；含量测定

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.11.023

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）11-0061-02

舒通安泰胶囊是酒泉市中医医院院内制剂（批准文号：甘药制字Z04090932）。该处方以大黄为君药清热毒、荡邪滞、行瘀血，以黄连为臣药清热祛火，以当归、三七为佐使药活血化瘀、润肠通便。诸药合用，共奏清热泻火、活血化瘀、润肠通便之功效，治疗便秘疗效显著。为有效控制该制剂质量，我们采用高效液相色谱法（hplc）对舒通安泰胶囊中大黄素、大黄酚进行了含量测定。

1 仪器与试药

LC-20A高效液相色谱仪（日本岛津公司），紫外检测器；AE-240电子分析天平（Mettler Toledo）；KH-250DB型超声波清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）。

大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110756- 200110），大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号110796-200716），舒通安泰胶囊样品（酒泉市中医院自制，批号20090501、20090502、20090503），甲醇为色谱纯（山东禹王实业有限公司化工分公司，批号20100722271），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-0.1%磷酸溶液（85∶15）为流动相，检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，柱温30 ℃。理论板数按大黄素峰计算应不低于4000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取经五氧化二磷减压干燥至恒重的大黄素和大黄酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL分别含大黄素8 ?g、大黄酚16 ?g的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品20粒的内容物，混匀，研细，取约1 g，精密称定，加甲醇25 mL加热回流提取40 min，滤过，残渣用10 mL甲醇分2次洗涤，合并甲醇液，置50 mL圆底烧瓶中，挥去甲醇，残渣加10%的盐酸溶液10 mL，超声提取（功率220 W，频率50 kHz）5 min，加氯仿10 mL，回流提取1 h，分取氯仿层，酸液用8 mL氯仿提取2次，合并氯仿液，用无水硫酸钠脱水，挥去氯仿，残渣加甲醇溶解并稀释至25 mL，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例称取除大黄外的其余药材，按工艺方法制备阴性样品，按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验

按“2.1”项下色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液各取10 ?L进样。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有一相同保留时间的色谱峰，阴性对照在此保留时间无干扰。见图1。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液各2、4、6、8、10 ?L，在上述色谱条件下进样测定，记录色谱图及峰面积积分值。以峰面积积分值为纵坐标，以进样量为横坐标，分别计算大黄素与大黄酚的回归方程。结果表明，大黄素的进样量在0.016～0.080 ?g之间时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 6。大黄酚的进样量在0.032～0.160 ?g时，进样量与峰面积积分值之间呈良好线性关系，r=0.999 8。

2.5 稳定性试验

精密量取供试品溶液10 ?L，在上述色谱条件下进样测定，每隔一定时间（0、3、6、9、12 h）进样测定1次，记录色谱图及峰面积积分值，结果大黄素RSD=2.40%，大黄酚RSD=2.76%。表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10 ?L，在上述色谱条件下连续进样5次，记录峰面积积分值，计算，结果大黄素与大黄酚RSD分别为0.97%、0.76%。表明精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批号样品5份，按“2.2.2”项下方法制备，依法测定，计算，结果本批样品中大黄素平均含量为0.153 4 mg/g （RSD=0.82%），大黄酚为0.296 7 mg/g（RSD=1.76%）。表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取本品6份，精密称定，分别加入大黄素和大黄酚对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算大黄素和大黄酚的含量。结果表明：样品中大黄素平均回收率为99.1%，RSD=1.79%；大黄酚平均回收率为99.5%，RSD=2.36%。见表1、表2。

2.9 样品含量测定

分别称取3批样品各2份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10 ?L，依法测定，记录色谱图，计算大黄素与大黄酚的含量，结果见表3。

3 讨论

本试验对供试品的提取条件进行了考察，分别采用甲醇、氯仿为溶剂，进行加热回流提取和超声处理（功率220 W，频率50 kHz），此方法对大黄素、大黄酚提取较完全。

本研究参照2010年版《中华人民共和国药典》（一部）[1]初步建立了舒通安泰胶囊中大黄素及大黄酚含量的HPLC测定方法。方法学考察表明，本法准确可靠、专属性强、重复性好，可作为本制剂含量测定的质量控制标准，为制剂的生产质量和临床应用提供了依据和保障。

参考文献：

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：22.

（收稿日期：2013-05-02，编辑：陈静）