HPLC法测定桑寄生中槲皮苷含量

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摘要： 目的：建立桑寄生配方颗粒中槲皮苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以Welch materials Ultimate AQ-C18（4.6×250mm，5μm）为色谱柱，以乙腈-0.4%磷酸溶液（15∶85）为流动相，检测波长360 nm，流速1.0 mL·min?1 ，柱温30℃。结果：槲皮苷在0.005～0.270μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r = 1.0000），平均回收率为99.72%±1.56%（平均值±RSD，n=9）。结论：该方法专属性强、快速、简便、重复性好，可用于桑寄生配方颗粒的质量控制。

关键词： 桑寄生配方颗粒；hplc；槲皮苷；含量测定

桑寄生为桑寄生科植物桑寄生Taxillus chinensis （DC.） Danser的干燥带叶茎枝。中药配方颗粒是指在中医药理论指导下，采用现代生产工艺，以水作为提取溶媒，对药材饮片进行煎煮，过滤，浓缩，干燥，制粒等工序制备得到的提取物制剂[3] 。桑寄生配方颗粒具有储存方便，调剂精确，口感较好的特点。桑寄生配方颗粒目前尚无其含量测定方法。为了控制药品质量，本文建立了高效液相色谱法测定桑寄生配方颗粒中槲皮苷的方法，该方法操作简便，可用于桑寄生配方颗粒的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪（美国）；Sartorius BP210S电子分析天平（德国）；KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

槲皮苷对照品（批号：110786-200503，中国药品生物制品检定所）；桑寄生配方颗粒（批号： A120717、A120241、A120975），由培力（南宁）药业有限公司提供。

甲醇、乙腈为色谱纯、水（超纯水），其余均为分析纯。

2 方法与结果

2 .1 色谱条件

色谱柱：Welch materials Ultimate AQ-C18（4.6×250mm，5μm）；流动相：乙腈-0.4%磷酸（15：85）；检测波长：360nm；柱温：30 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取槲皮苷对照品，置容量瓶中，加甲醇-水（1：1）溶液使溶解并定容至刻度，摇匀，即得槲皮苷对照品溶液（0.05mg/ml）。

2.2.2 供试品溶液的制备

取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入甲醇-水（1：1）溶液25ml，称定重量，超声提取30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇-水（1：1）溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液的制备

取桑寄生配方颗粒中所用辅料即药用糊精适量，按“2.2.2”项下的供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

2.2.4 专属性试验

分别精密吸取上述槲皮苷对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，进样分析。结果见图1。

Figure 1 Taxilli Herba Formula Granules of HPLC

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系的考察

分别精吸量取“2.2.1”项下槲皮苷对照品溶液0.2ml、0.5ml、1.0ml、2.0ml、5.0ml、10.0ml，置10ml的量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取上述溶液各10μl，注入液相色谱仪进行测定。以各对照品的进样量（μg）X为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线，得槲皮苷的标准曲线Y=1809.4X-9.442； R2=1（r=1.0000，n=9）结果表明：槲皮苷进样量在0.005～0.270μg范围内时，峰面积与进样量呈良好的线性关系。

2.3.2 精密度试验

精密吸取槲皮苷对照品溶液10?l，重复进样6次，测定峰面积，其RSD为0.18%。结果表明，仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验

取同一批供试品溶液，分别于0h、2h、4h、8h、12h进样10?l，测定峰面积，其RSD为0.38%，结果表明供试品溶液在12小时内稳定。

2.3.4 重复性试验

取同一批样品，研细，取6份，每份约2g，精密称定，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10?l进样，测定峰面积，结果槲皮苷含量的RSD（%）值小于2.0%，说明本方法重复性较好。

2.3.5 加样回收率试验

取已知含量的本品9份，每份约0.25g，精密称定，分别精密加入适量的对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10?l，采用上述色谱条件，测定，计算加样回收率。

由结果可知，槲皮苷的回收率在96.75%～102.62%，RSD%﹤5%，表明本方法准确度良好。适用于定量分析。

2.3.6 样品含量测定

取本品3批，取约0.5g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，进行测定，结果见表2.

桑寄生水煎液中含有金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷等，通过对桑寄生配方颗粒分析得知，有部分批次的异槲皮苷，和金丝桃苷的含量不稳定。通过检索文献得知，由于桑寄生所寄生的寄主不同，异槲皮苷和金丝桃苷的含量也不同[4]。因此以槲皮苷作为桑寄生配方颗粒的质控指标。

中药配方颗粒是传统煎剂的延生， 具有储存，使用方便，调剂精确，口感较好的特点，但要保证其质量的稳定性，建议厂家对原材料进行质量控制，只有使用符合《中国药典》所述的原料药，配方颗粒的质量才能得到保证，配方颗粒才会有更广阔的前景。

参考文献：

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典（2010年版一部）[S]. 北京： 中国医药科技出版社， 2010年.

[2] 国家中医药管理局《中华本草》编委会编.中华本草[M]. 上海： 上海科学技术出版社，1999.2·605-2·610.

[3] 郭玫， 余晓辉， 邵晶. 中药配方颗粒研究概况[J]. 河南中医学院学报， 2003， 18（107）： 86-88.

[4] 李永华， 卢栋， 朱开昕，等. 对桑寄生使用混乱的分析[J]. 广西中医学院学报， 2007， 10（2）： 69-71.