毛细管气相色谱法测定月饼中的山梨酸\苯甲酸和脱氢乙酸

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摘要：目的 建立一种同时测定月饼中山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的毛细管柱气相色谱方法。方法 在碱性条件下, 样品在水溶液中超声、高速匀浆提取、硫酸锌去除基体干扰, 用正己烷洗涤、去除正己烷层，提取液经酸化后用乙酸乙酯提取,离心分离用气相色谱进行分离测定。结果 浓度在0～200μg/ml时,各组分线性良好(苯甲酸r=0.9994,山梨酸r=0.9998，脱氢乙酸r=0.9994)，方法的相对标准偏差为4.65%～9.36%,回收率为92.48%～102.05%。结论该方法提取简便、快速、准确、稳定, 结果令人满意，适用于月饼等高脂肪食品中山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的检测。

关键词：毛细管气相色谱；月饼；山梨酸；苯甲酸；脱氢乙酸

Abstract: To Create a capillary column gas chromatography method for simultaneous determination of sorbic acid, benzoic acid, and dehydrogenation of moon cake in acetic Sample in an aqueous solution under alkaline conditions, ultrasound, high-speed homogenizer extraction, removal of matrix interference zinc sulfate, to remove the n-hexane layer was washed with n-hexane, the extract was dried after acidification, extracted with ethyl acetate, centrifugal separation by gas chromatographic separation and determination. Result: Concentration in 0 ~ 200μg/ml, each component linear was good(the benzoic acid r = 0.9994, sorbic acid r = 0.9998, the dehydroacetic acid r = 0.9994). The relative standard deviation was 4.65% to 9.36%, and the recovery rate was 92.48% to 102.05%.Conclusion: The method is simple, rapid, accurate, stable, satisfactory results, suitable for high-fat foods such as moon cake sorbic acid, benzoic acid and dehydroacetic acid testing.

Keywords: capillary gas chromatography; moon cake; sorbic acid; benzoic acid; dehydroacetic acid

中图分类号：O657.8 文献标识码：A 文章编号

山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸是很常用的化学合成防腐剂,能有效抑制细菌、霉菌和酵母菌的繁殖生长,延长食品保存时间并保持食品原有的风味，但过量或超范围使用对人体健康是有危害的，因此,我国食品安全国家标准GB2760对山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的使用量都做了严格的规定[1]。目前食品中山梨酸、苯甲酸采用GB/T5009.29-2003中规定方法测定，脱氢乙酸采用GB/T5009.121―2003中规定方法测定。由于酱油、果汁、腐乳、酱菜基本不含脂肪，可提取后直接进样分析[6]，而月饼中含有油脂类成分[5]，传统方法很难将油脂类成分从提取液中去除，本方法在碱性条件下[3], 样品在水溶液中超声、高速均浆提取、硫酸锌去除基体干扰、 用正己烷洗涤、去除正己烷层，提取液经酸化后用乙酸乙酯提取,离心分离用气相色谱进行分离测定。

1材料与方法

1.1实验材料

PE公司XL气相色谱仪，氢火焰离子化检测器，氮气(纯度>99.999％)；氢气(纯度>99.999％)，HP一35石英毛细管色谱柱(30m×0.32mm×0.25μm)；电子天平：瑞士普利塞斯制造;50mL带刻度塑料离心管；高速均浆机;高速离心机。

山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸标准品纯度均大于99.5%；氢氧化钠、硫酸锌、正己烷、盐酸均为分析纯；乙酸乙酯（色谱纯）；蒸馏水。

1.2试验方法

1.2.1色谱条件

HP一35石英毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：250℃ ；柱温：150℃10℃/min210℃20℃/min240℃(2min) ；检测器温度300℃;N2:5mL/min;H2; 50mL/min;空气；500mL/min.

1.2.2标准储备溶液的制备准确称取山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸标准品各0.0500g溶于乙酸乙酯中[2]，

定容只50mL,此溶液每毫升含山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸1.0mg.

1.2.3标准曲线的制作

取标准储备液，以乙酸乙酯稀释至含20，50,100,150,200μg/mL山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的标准使用液，分别进样1.0μL,以保留时间定性，用峰面积对山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的浓度计算回归方程。

1.2.4样品前处理

称取均匀的样品2.00g于50mL带刻度塑料离心管,加入35mL蒸馏水混匀，加2mL2%的氢氧化钠溶液，超声处理10min后，高速均浆1min，加2mL15%的硫酸锌溶液混匀后定容只50mL,以4000转/min离心1min，过滤，滤液中加2mL2%的氢氧化钠溶液混匀，再加5mL正己烷摇匀静止分层，弃去正己烷层，剩余液体中加1mL（1+1）的盐酸混匀，准确加入5.00mL乙酸乙酯混匀，为避免产生乳化现象、以4000转/min离心1min，取上清液1.0μL供气相色谱分析。

2结果与讨论

2.1色谱条件的选择

山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸都是极性物质，，常采用5％DEGS+1％ 磷酸色谱柱测定[4]。本文用HP-35(35%-苯基)-甲基聚硅氧烷中等极性石英毛细管色谱柱进行分离，可以使目标化合物与干扰杂质完全分离，效果好、峰形尖锐、有利于检测定量和提高方法的灵敏度，这也是本方法不经浓缩而直接进样的基础。相关图谱（见图1-图2）

图1标准物质色谱图：出峰顺序依次是山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸

图2样品中添加标准物质色谱图：出峰顺序依次是山梨酸、苯甲酸、脱氢乙酸

2.2线性范围和检出限（见表1）

表1 山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸的回归曲线和检出限

以标准物质的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标做线性回归分析，并根据信噪比S/N=3,计算最低检出浓度，实验证明山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸在0～200μg/ml时,各组分性关系良好；方法灵敏度高，可以满足日常检测的需要。

2.3提取方法选择

本实验方法在碱性条件下, 山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸几乎全部电离，他们以酸根离子形式存在，易溶于水相中，而在有机相中几乎不溶，用硫酸锌去除基体干扰，离心过滤可以除去部分不溶的脂类物质，脂类物质是易溶于有机相中的，用正己烷除去剩余脂类物质；在酸性条件下[5]，他们几乎不电离，以山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸形式存在，此时他们易溶于乙酸乙酯，离心分离从而使得被测组分与脂类物质有效的分离。

2.4方法的回收率和精密度

在月饼中添加3种不同浓度水平的山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸，按1.2.4方法提取处理后用气相色谱FID检测器进行检测，从检验结果看，回收率在92.48%～102.05%，相对标准偏差在4.65%～9.36%，结果（见表2）

表2 方法的回收率和精密度实验

2.5小结

本文研究的毛细管柱气相色谱法同时测定月饼等高脂肪食品中山梨酸、苯甲酸和脱氢乙酸具有操作简便、分离效果好、检出限低、精密度高、检测结果准确、可以满足日常检测的需要。

参考文献

[l]GB2760―2011，食品添加剂使用卫生标准[s]．北京：中国标准出版社．

[2]GB／T5009．29―2003，食品中苯甲酸、山梨酸的测定[s]．北京： 中国标准出版社．

[3]王.食品中脱氢乙酸的快速前处理方法[J].福建分析测试，2010，19（3）：62-66

[4]Gonzdlez M，Gallego M，Valcdrcel M．Gas chromatographic flow method for the Dreconcentration and simultaneous determination of antioxidant and preservative additives in fatty foods[J]．J Chromatogr，l999，848(1―2)：529―536．

[5]陈子雷，张红，王文博等.气相色谱法测定糕点中山梨酸和苯甲酸的含量[J].食品与药品，2006,8（11）：52-53

[6]林燕玲.分散液相微萃取方法的改进[J].萍乡高等专科学校学报，2011,28(6):83-88