不同产地岗梅根茎中酮甾醇3―O―β―D葡萄糖苷的含量测定

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摘要：目的 建立岗梅根、茎中酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷的含量测定方法，比较不同产地岗梅根、茎中酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷的含量。方法 采用高效液相色谱法。色谱柱为Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-水（95∶5），流速为1.0 mL/min，柱温25 ℃。蒸发光散射检测器参数：漂移管温度为90 ℃，氮气流速为1 L/min。结果 酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷在0.250～3.992 ?g范围内呈良好的线性关系（r=0.999 5），平均回收率为98.2%，RSD=2.0%（n=6）。岗梅根中含量在0.114～0.303 mg/g之间，岗梅茎中含量在0.061～0.224 mg/g之间。结论 本方法简单快捷、准确可靠，可用于岗梅药材的质量控制。岗梅根中酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷含量比岗梅茎高。

关键词：岗梅；酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷；含量测定；高效液相色谱-蒸发光散射检测器

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2013.05.020

中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）05-0058-02

岗梅主要分布在我国广东、广西等地，其性寒味苦，有清热解毒、生津止渴、利咽消肿、散瘀止痛之功效，主要有效成分为三萜皂苷类化合物[1]。岗梅传统入药部位为冬青科植物梅叶冬青Ilex asprella（Hook.et Arn.）Champ.ex Benth.的干燥根，但由于资源日渐缺乏，今已根茎合用。然而根、茎中总皂苷含量差异较大[2]，为了进一步比较其差异，本试验采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（HPLC-ELSD）建立了岗梅药材中的一种三萜皂苷――酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷[3]的含量测定方法，测定并比较不同产地岗梅根、茎中的含量。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪（自动进样器：岛津SIL-20A；泵：岛津LC-20AT；柱温箱：岛津CTO-10AS VP；蒸发光散射

基金项目：广东省教育部产学研结合项目（2011B090400191）

通讯作者：陈丰连，E-mail：

检测器：Alltech 3300 ELSD；处理软件：岛津LC Solution）， MODEL HN1006超声清洗器（中国华南超声设备厂），Sartious BP211D分析天平。

酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品（自制，纯度>98%），甲醇，水。超纯氮气购于广州市粤港工业气体有限公司。岗梅药材采于广东平远GAP基地、从化、化州等地，经广州中医药大学中药鉴定教研室童家老师鉴定为冬青科植物梅叶冬青Ilex asprella（Hook.et Arn.）Champ.ex Benth.的干燥根和茎。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

取酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品适量，精密称定，置容量瓶中，加入甲醇，制成含酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷0.998 mg/mL的对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

取过60目筛岗梅5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇100 mL，称定质量，超声处理（功率300 W，频率50 kHz） 30 min，取出，放冷，用甲醇补足减失的质量，移取50 mL，回收甲醇，浓缩后加甲醇定容至5 mL，过0.45 ?m微孔滤膜，作为供试品溶液。

2.3 色谱条件与系统适用性试验

Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为甲醇-水（95∶5），流速1.0 mL/min，柱温25 ℃。蒸发光散射检测器参数：漂移管温度90 ℃，氮气流速1 L/min，增益4。进样量：20 ?L。酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷与其他峰分离度大于1.5。理论塔板数按酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷计应不少于10 000。色谱图见图1。

2.4 精密度试验

精密移取0.998 mg/mL酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品溶液0.5 mL至10 mL量瓶，加甲醇稀释至刻度，连续进样5次，记录峰面积， RSD=0.9%。结果表明仪器精密度良好。

2.5 线性关系考察

精密移取0.998 mg/mL酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品溶液0.5、1.0、2.0 mL于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得0.049 9、0.099 8、0.199 6 mg/mL溶液，精密移取0.049 9 mg/mL溶液2.5、5 mL，分别置于10 mL量瓶，加甲醇至刻度，得0.025 0、0.012 5 mg/mL溶液，取以上作为对照品溶液。分别吸取上述5种浓度溶液各20 ?L进样，以峰面积的对数为纵坐标，以所进对照品含量的对数为横坐标，进行线性回归。得回归方程Y=1.009 3X+6.324 3，r=0.999 5。结果表明，酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品在0.250～3.992 ?g之间呈良好的线性关系。

2.6 稳定性试验

取“2.2”项下供试品溶液，分别于0、1、2、4、6、12、24 h分别进样分析，记录峰面积， RSD=1.3%。结果表明，供试品溶液至少在24 h内稳定性良好。

2.7 重复性试验

取同一批岗梅样品6份，每份5.0 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷含量。酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷的平均含量为0.136 mg/g， RSD=2.3%。

2.8 加样回收率试验

取已准确测定的同一批岗梅根样品6份，每份2.50 g，精密称定，分别精密加入0.099 8 mg/mL酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷对照品溶液3.0 mL，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，测定酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷含量。酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷平均回收率为98.2%，RSD=2.0%，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取不同产地样品1份（根、茎来自同一植株），按“2.2”项下方法，每份样品平行制备2份供试品溶液，分别进样测定，每份供试品溶液进样测定2次，计算含量。结果见表2。

3 讨论

本试验对比了二极管阵列检测器（DAD）和蒸发光散射检测器（ELSD）。酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷的最大吸收波长为204 nm，处于紫外末端吸收，若使用DAD，则信号不强，且易受流动相干扰，而使用ELSD，灵敏度较高，误差小，受流动相影响小，基线平稳。

本试验考察了20、40倍甲醇提取的方法，结果一致，故确定以20倍甲醇提取。ELSD检测器漂移管温度考察了70、80、90 ℃，发现在90 ℃条件下基线较平稳，噪声较低，故采用90 ℃。氮气流速考察了1.0、1.5、2.0 L/min，图谱差异不大，故采用1.0 L/min流速。

样品测定结果表明，岗梅根与岗梅茎中酮甾醇3-O-β-D葡萄糖苷含量差异较明显，岗梅根中含量在0.114～0.303 mg/g之间，岗梅茎中含量在0.061～0.224 mg/g之间。同一株岗梅，根中皂苷含量比茎高。这是否说明其根药效比茎好，根与茎的量效关系如何，还有待今后进一步研究。

参考文献：

[1] 赖小平，苏子仁，李耿.岗梅抗流感有效部位的制备及测定方法：中国， 101879200[P].2010-11-10.

[2] 黄锦茶.岗梅化学成分与药材质量研究[D].广州：广州中医药大学， 2011.

[3] 黄锦茶，陈丰连，曾元儿，等.岗梅根的化学成分研究[J].中草药，2012， 43（8）：1475-1478.

（收稿日期：2012-10-18，编辑：陈静）