HPLC法测定归芍胶囊中芍药苷的含量
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[摘要] 目的:建立用hplc测定归芍胶囊中的芍药苷含量方法。方法:采用高效液相色谱法，C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相:甲醇-水(25∶75)，检测波长:230 nm，流速:1 ml/min。结果:芍药苷在0.41～4.08 μg范围内线性关系良好，芍药苷的平均回收率为98.9%,RSD=0.6%(n=5)。结论:该方法灵敏、专属性好、重现性好。
[关键词] 归芍胶囊;芍药苷;高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2008）08（c）-036-02
Determination of paeoniflorin in Guishao capsules by HPLC
YU Jie
(Nanjing Xuanwu Hospital，Nanjing210018，China)
[Abstract] Objective:To establish a HPLC method for determination of Paeoniflorin in guishao capsules. Methods:The HPLC method was used C18 column(250 mm×4.6 mm,5 μm).The mobile phase was methanol-water(25∶75).The detection wavelength was 230 nm.The flow rate was 1ml/min. Results: The calibration curve was linear in the range of 0.41～4.08 μg.The average recovery was 98.9% (RSD=0.6%). Conclusion：The method is sensitive, specific and repeatable.
[Key words] Guishao capsules;Paeoniflorin;HPLC
归芍胶囊由当归、川芎、白芍等组成，养血和血，理气调经，用于月经不调，月经紫黑色等症。本文采用HPLC法测定归芍胶囊中芍药苷的含量。结果表明，该法灵敏专属性强，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
1仪器与试剂
岛津10 Avp液相色谱仪，岛津10 Avp紫外检测器，岛津UV-2100型可见-紫外分光光度计。芍药苷对照品(批号0736-200022，中国药品生物制品检定所，供含量测定用);甲醇(色谱纯);水为重蒸馏水;其余试剂均为分析纯。归芍胶囊(南京市中医院制剂室生产，批号：060301，060402，060503，
060608，060709，060801)。
2方法与结果
2.1色谱条件
色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)。流动相为甲醇-水(25∶75)。柱温：室温。流速：1 ml/min。检测波长为230 nm。
2.2对照品溶液的制备
精密称取芍药苷对照品10.22 mg，置于50 ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度,摇匀，即得(每1 ml中含芍药苷0.204 4 mg)。
2.3供试品溶液的制备
取归芍胶囊的内容物，研细，取约0.1 g精密称定，置50 ml量瓶中，加甲醇约40 ml，超声处理20 min，冷却至室温，加甲醇至刻度，摇匀，静置，用0.45 μm的微孔滤膜滤过，即得。
2.4阴性对照品溶液的制备
按处方比例和生产方法，制备不含芍药苷的阴性样品，按“2.3”项下方法，制备阴性对照品溶液。
2.5空白干扰试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，各10 μl按照上述色谱条件进行测定，结果阴性对照品溶液在与芍药苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故无干扰。见图1。
2.6线性关系实验
分别精密量取对照品溶液2.0,4.0,6.0,8.0,10.0,12.0,15.0,
20.0 μl,按上述色谱条件进行测定。以对照品进样量X为横坐标、峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线，其回归方程为:Y=1 216X+5.48，r=0.999 9 。结果表明，芍药苷在0.41～4.08 μg范围内线性关系良好。
2.7稳定性试验
精密量取供试品溶液102.2 μg/ml分别于0,2,4,6,8,10,12 h进样20 μl依法测定1次，共测定7次峰面积,RSD 1.70%。结果表明，供试品溶液在12 h内稳定。
2.8精密度试验
精密吸取供试品溶液102.2 μg/ml，按上述色谱条件操作，进样20 μl，重复进样5次，测定其峰面积,RSD 0.41%。
2.9重现性试验
对同一批样品5份（批号060301），照“2.3”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样分别测定其峰面积，计算含量，平均含量为4.300 mg/粒,RSD 0.1%。以上试验结果表明：该方法的重现性良好。
2.10回收率试验
精密称取已知含量的样品(含量4.300 mg/粒，17.20 mg/g，批号060301)约0.1 g，分别精密加入浓度为0.876 mg/ml芍药苷对照品溶液各2.0 ml，按“2.3”项下方法制备，分别精密量取10 μl测定峰面积,按回归方程计算含量，计算回收率，结果见表1。
2.11样品测定
取6批样品，按“2.3”项下方法制备供试液，按上述色谱条件操作，进样10 μl测定，按外标法计算，测定结果见表2。
3讨论
3．1检测波长的选择
取芍药苷对照品溶液适量，以流动相配制成对照品溶液，置分光光度计中，于190~400 nm波长范围内扫描，结果芍药苷对照品溶液在230 nm处有最大吸收。经验证，供试品在此条件下测定效果良好，故选定230 nm为芍药苷的检测波长。
3．2选择提取时间
参考文献[1,2]，超声处理20 min，芍药苷已提取完全。故选择提取时间为20 min。
[参考文献]
[1]王骊丽，黄熙，任平，等.反相高效液相色谱法测定冠心二号汤剂中芍药苷和阿魏酸的含量[J].成都中医药大学学报，2001,24(1):51-52.
[2]冯毅凡，孟霄，苏薇薇，等.乌鸡白凤丸中阿魏酸和芍药苷的含量测定[J].中药材，1999,22(10) :532-533.
（收稿日期：2008-03-10）
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