亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体用于诊断肝癌的研究

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【摘要】 目的 采用亲和吸附离心管法检测甲胎蛋白异质体(AFPL3)，分析甲胎蛋白异质体AFPL3在诊断肝癌的临床应用价值。方法 选择121例甲胎蛋白AFP阳性患者血清(≥10ng/ml)。使用亲和吸附离心管方法检测血清甲胎蛋白异质体AFPL3，并且对研究对象进行跟踪，分析甲胎蛋白异质体用于临床在鉴别肝癌的作用。结果 以甲胎蛋白异质体AFPL3≥10%作为诊断指标，肝癌患者血清中甲胎蛋白异质体AFPL3异常升高者明显高于其他肝病患者(P

【关键词】

甲胎蛋白异质体；肝癌；离心法

The studies of alphafetoprotein isoforms using with centrifugal column method in diagnosis of hepatocelluar carcinoma

XING Huaiguang, LI Jie， Han shanle.Department of Radioimmunoussay, Liaocheng Peoples Hospital, Liaocheng 252000， China

【Abstract】 Objective To explore the clinical significance of alphafetoproteinL3(AFPL3) with centrifugal column method in the diagnosis of hepatocelluar carcinoma Methods The serum samples of 121 patients with

elevated AFP level(≥10ng/ml) were detected by chemiluminescence immunoassay for AFP and centrifugal column method for AFPL3,and the clinical value of AFPL3 were studied in the differentiation diagnosis of hepatocelluar cancerResults The level of AFPL3(%) in serum of patients with hepatocellular carcinoma was significantly higher than those in the patients with other liver diseases(P

【Key words】

Alphafetoprotein isoforms；Hepatocelluar carcinoma；Centrifugation

肝癌是世界上最常见的10种恶性肿瘤之一，全世界每年约有25万人肝癌［1］；肝癌发病之初较为隐匿，临床难以检出，临床诊断是一般多为晚期，治疗效果差，因此早期发现肝癌并且及时治疗可以提高患者的5年存活率。近年随着影像学的发展，一部分体积小的肝癌患者得以及时发现，患者5年存活率有了一定的提高。但是影像学技术检测用于诊断肝癌仍然受到很多的限制，使很多患者未能及时得到准确诊断，失去了最佳的治疗时机。甲胎蛋白(AFP)定量检测是目前早期发现肝癌的主要血清学标志物，但是其他一些疾病也可能引起甲胎蛋白的升高，特别是属于肝癌高危监测人群的慢性肝炎、肝硬化患者［1,2］。因此寻找肝癌早期诊断高灵敏度、高特异性的鉴别指标具有重要的临床意义。

近年研究发现，良性肝病时肝细胞坏死后再生性AFP与恶性肝癌细胞产生的AFP在糖链结构上有差异［3］，而且不同糖链的AFP与凝集素的亲和性不同，因此根据与凝集素亲和性不同，可对AFP的来源进行判断。其中AFPL3即甲胎蛋白异质体为肝癌细胞所特有。国内外研究表明，AFPL3是肝癌高度特异性指标，比单纯检查总甲胎蛋白能显著提高准确率，可以不受甲胎蛋白≥400ng标准的限制。但是长期以来AFPL3指标无法在临床做为常规指标使用，原因是AFPL3与甲胎蛋白的差异只存在于糖链上，之前报道的检测方法为凝集素亲和电泳方法，方法复杂，不宜做为肝癌鉴别的常规检测方法。因此很有必要研究新的方法检测AFPL3［4，5］。

本研究采用亲和吸附离心管方法检测患者血清中的甲胎蛋白异质体，并且对患者进行跟踪，探讨甲胎蛋白异质体检测用于鉴别肝癌的临床意义，

1 资料与方法

11 一般资料 选取我院2009年9月至2010年8月的均为 甲胎蛋白阳性(AFP≥10ng/ml)的住院患者121例，男89例，女32例，年龄25~67岁，平均517岁。其中，肝癌患者58例，肝硬化患者32例，慢性活动性肝炎患者31例。诊断标准为2000年中华医学会转染病与寄生虫学分会、肝病学分会联合修订的“病毒性肝炎防治方案”中病毒性肝炎诊断标准［6］及卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的《新编常见恶性肿瘤诊治规范》中有关原发性肝癌的诊断标准。所有标本温育分离血清后立即检测。

12 试剂和方法 甲胎蛋白异质体检测采用亲和吸附离心管法，试剂由北京热景生物技术有限公司提供，甲胎蛋白检测采用化学发光法，仪器为美国贝克曼化学发光免疫分析仪DXI 800型。

13 统计学方法 应用SPSS 130软件进行统计分析，不同组别间AFPL3的比较采用单因素方差分析，P

2 结果

21 甲胎蛋白(AFP)在肝癌与非肝癌患者中的分布

121份血清标本中，58份来自临床诊断为肝癌的患者，另外63份来自非肝癌患者，临床诊断为肝硬化或慢性肝炎患者。根据甲胎蛋白AFP的含量将研究对象分为3组：≥400 ng/ml组、200~400 ng/ml组以及≤200 ng/ml。在58份肝癌标本中有32份AFP≥400ng/ml，占5517%；

22 AFPL3在良恶性肝脏疾病中的分布

以AFPL3(%)≥10%作为临界指标，肝癌及慢性肝炎、肝硬化标本AFPL3 %测定结果见表2。58份肝癌标本中有56份测定结果为阳性,达7931%。63份非肝癌中5份阳性。而肝癌标本的AFPL3 (%) 分布明显不同于慢性肝炎、肝硬化标本,前者集中于AFPL3(%)≥10，后者集中于10以下,两者相比，差异有统计学意义(P

23 AFP 与 AFPL3在肝癌诊断中的作用比较

当AFP设定为≥400 ng/ml时，32例肝癌在此范围，其敏感性仅为5517%(32/58)，其特异性为8571%(54/63)，符合率7166%［(32+54)/121］；

对于甲胎蛋白异质体AFPL3%≥10%，其敏感性为7931%(46/58)，特异性为9206%(58/63)符合率8595%［(46+58)/121］。

以上数据显示，检测甲胎蛋白异质体(AFPL3)的肝癌诊断符合率比单独检测甲胎蛋白明显提高，结果见表3。

3 讨论

甲胎蛋白AFP是肝癌重要的血清学指标。由于AFP也在肝细胞癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、胆道肿瘤和肿瘤等的血清中出现，而15%~58%的慢性乙肝患者和1147%的肝硬化患者血清中的AFP会有所升高。因此在高危人群中，AFP作为肝癌诊断指标尚缺乏特异性［6］。

肝癌的早期诊断是基于对长期患有慢性肝脏疾病的高危人群的跟踪筛查，目前临床常通过腹部超声和血清AFP的检测来对肝癌进行早期筛查。有研究显示，血清AFP对肝癌的阳性预测值是32%，腹部超声的阳性预测值是54%。可以看出目前临床所用方法对肝癌的预测率不足。

而甲胎蛋白异质体(AFPL3)对于肝癌的预测已经是公认非常有效的一个指标，研究报道敏感性可以达到94%。AFPL3的检测能够在慢性乙肝患者和肝硬化等高危人群中发现直径

目前AFPL3检测常用的方法有植物凝集素免疫交叉电泳技术，该方法技术要求高、操作繁琐、试剂昂贵，限制了AFPL3检测在临床的应用。美国FDA于2005年批准检测该指标应用于肝癌诊断，并把甲胎蛋白AFPL3诊断肝癌的阳性界定值为10%。如果患者血清中总AFP只有轻微的升高而AFPL3所占的比例超过10%，这就提示肝癌发生的可能性很大［8］。

本研究采用亲和吸附甲胎蛋白异质体AFPL3，原理为采用亲和离心柱技术分离出甲胎蛋白异质体，然后再定量测定样本中甲胎蛋白和甲胎蛋白异质体的含量，两者相比较即可得到患者血清中甲胎蛋白异质体的比例，用于诊断肝癌，临床应用很方便。

本研究中，尚有12例肝癌患者血清AFPL3%

总之，对肝癌的准确诊断是提高患者生存率和生活质量的重要前提。研究利用亲和离心柱法检测AFPL3，操作简便，节约成本，用于肝癌诊断有较好的敏感性和特异性，如与AFP联合使用，做为肝癌筛查的联合试验指标，应有很高的临床应用价值。

参考文献

［1］ 殷正丰甲胎蛋白异质体作为肝癌标志物的临床应用实用肿瘤杂志，2004，19(1)：14.

［2］ 沈铮，沈霞甲胎蛋白及其异质体检测的临床应用价值上海医学检验杂志，2000，15(6)：361366.

［3］ Li D, Mallory T AFPL3：a new generation of tumor marker for hepatocellular carcinoma Clin Chim Acta，2001，313(1)：1519.

［4］ 青柳璺肿瘤标志物的临床诊断意义及展望―甲胎蛋白(AFP)L3组分日本医学介绍，2005，26：4950.

［5］ Hu KQ, Kyulo NL Clinical significance of elevated alphafetoprotein (AFP) in patients with chronic hepatitis C, but not hepatocellular carcinoma Am J Gastroenterol, 2004,99(5)：860865.

［6］ 游绍莉，辛绍杰.229例甲胎蛋白明显升高肝病患者的临床分析.实用预防医学,2006,13(6)：16131614.

［7］ 徐爱芳.新微量离心柱法检测甲胎蛋白异质体对肝癌诊断的研究.中华实验和临床病毒学杂志,2007,21(1)：6769.

［8］ Shiraki K, Takase K, Tameda Y, et al A clinical study of lectinreactive alphafetoproteinas an early indicator of hepatocellular carcinoma in the followup of cirrhotic patients Hepatology, 1995, 22：802807.