高效液相色谱法测定半夏厚朴汤不同煎液中和厚朴酚含量

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【摘要】目的探讨高效液相色谱法测定半夏厚朴汤合煎液与分煎液中和厚朴酚的含量变化。方法使用Agilent 1100高效液相色谱仪，C18柱（4.6mm×200mm，5μm），流动相为甲醇-水（78：22），流速为1.0ml/min，检测波长为294nm，分析半夏厚朴汤不同煎液中和厚朴酚的含量变化。结果半夏厚朴汤的合煎液与分煎液中和厚朴酚含量无显著差异。结论不同的煎煮方式对和厚朴酚的含量均无影响。

【关键词】高效液相色谱法；半夏厚朴汤；和厚朴酚；分煎；合煎

半夏厚朴汤由半夏一升（12g），厚朴三两（9g），茯苓四两（12g），生姜五两（9g），苏叶二两（6g）组成，出自汉代张仲景《金匮要略》，具有降逆化痰、行气散结之功效，原来主要用于梅核气的治疗，近年来研究发现厚朴的有效成分厚朴酚及和厚朴酚具有抗抑郁的活性，临床常用于治疗精神性疾病，如抑郁症、焦虑症等[1]。厚朴是半夏厚朴汤方中君药，和厚朴酚、厚朴酚是其主要成分。我院用高效液相色谱法测定半夏厚朴汤不同煎液中和厚朴酚含量，比较用分煎法与合煎法制得的汤剂中和厚朴酚含量差异，探讨不同制法对中和厚朴酚溶出量的影响。

1资料

1.1仪器使用Agilent 1100高效液相色谱仪，DAD检测器，四元输液泵，自动进样器，Agilent 1100色谱工作站。Bp211D十万分之一电子分析天平（德国，Sartorius）；KQ-300DE型超声仪。

1.2材料中药材，厚朴、半夏、生姜、茯苓、紫苏叶，经市药品检验所鉴定均符合2010年版《中国药典》一部收载品种标准。和厚朴酚购自中国药品生物制品检定所，批号：110730―200609，甲醇（色谱纯，天津光复精细化工研究所），乙腈（色谱纯HPLC级，德国默克，批号：LOTi593830124），水为实验室自制去离子水。

2方法

2.1色谱条件色谱柱为DiamonsilC18柱（4.6mm×200mm，5μm），保护柱：GeminiC18（4×3.0mm，Phenmenex，USA），以甲醇：水78：22为流动相，流速为1.0ml/min，柱温30℃，检测波长为294nm，进样量10μL。

2.2溶液制备对照品溶液制成浓度为10.6μg/ml；将厚朴9.0g，半夏12.0g，生姜9.0g，茯苓12.0g，紫苏叶6.0g，加入10倍量的水煎煮后，滤出药渣再加10倍量的水煎煮，将两次煎液过滤后合并制成干粉。称取适量干粉，用甲醇溶解定容至刻度，制成合煎液供试品溶液；分煎液供试品溶液将药材分别加10倍量的水，制得各药材的煎液，合并过滤后，减压干燥成干粉。称取相当原药材处方量的干粉，同合煎液法制得分煎液供试品溶液；按供试品溶液制备法再分别制备不含厚朴药材的分煎液、合煎液的阴性对照品溶液。

2.3线性关系精密称取和厚朴酚对照品10.60mg，置于100ml容量瓶中，用甲醇稀释配制成质量浓度分别为5.300、3.975、2.981、2.236、1.677、1.258g/L的系列和厚朴酚对照品溶液，各精密吸取10μL，按上述色谱条件依次测定，以峰面积积分值（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程y=54873x-1041.6，r=0.9998（n=6），和厚朴酚浓度在范围内1.259-5.300g/L范围内与峰面积线性良好。

2.4精密度试验精密吸取1.677g/L的和厚朴酚对照品溶液，连续进样6次，得出和厚朴酚RSD=0.6%，表明仪器的精密度良好。

2.5稳定性试验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，10h时测定。结果合煎液含量的RSD为1.1%，分煎液的为0.9%，表明两种供试品溶液在24h内均稳定。

2.6加样回收率试验按分煎液、合煎液制备的半夏厚朴汤及其配方颗粒汤剂各6份，每份取1ml加入10ml容量瓶中，精密加入和厚朴酚对照品3个质量浓度（106、132.5、159mg/L）1ml，甲醇定容至10ml，摇匀，滤液过0.45μm滤膜，进行加样回收试验。

3结果

和厚朴酚在合煎液中浓度为15.89mg/L、分煎液中浓度为16.04mg/L。可见分煎液与合煎液中和厚朴酚的浓度含量无明显差异。

4讨论

高效液相色谱法又叫做高压或高速液相色谱、高分离度液相色谱或近代柱色谱，以液体为流动相，采用高压输液系统，是色谱法的一个重要分支。高效液相色谱法测定半夏厚朴汤等其他复方制剂中的和厚朴酚含量，可用多种流动相系统[2-3]，有甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水多种比例系统，均可达到良好的分离效果。用高效液相色谱法测定和厚朴酚与杂质峰能达到良好的分离，杂质不影响和厚朴酚的含量测定。和厚朴酚具有明显的、持久的中枢性肌肉松弛，中枢神经抑制作用，抗炎，抗菌，抗病原微生物，抗溃疡，抗氧化，抗衰老，抗肿瘤，降低胆固醇等药理作用，用于治疗急性肠炎，细菌性或阿米巴痢疾，慢性胃炎等，在抗菌作用方面，厚朴酚对格兰氏阳性菌、耐酸性菌、丝状真菌有显著的抗菌活性，对变形链球菌有更加显著的抗菌作用，对葡萄球菌的抑制作用最强。临床主要的功能主治是通湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳。通过对半夏厚朴汤合煎汤剂与分煎汤剂的和厚朴酚含量进行了对比研究，证明在相同条件下，在分煎与合煎煎煮过程中半夏厚朴汤中和厚朴酚的含量无其他影响因素。

参考文献

[1]郑平，王文忠，欧英勇，等.高效液相色谱法测定半夏厚朴泡腾片中厚朴酚及和厚朴酚的含量[J].时珍国医国药，2006，17（11）：2209-2210.

[2]冯华，聂明华，罗秀琼，等.高效液相色谱法测定半夏厚朴汤不同煎液中和厚朴酚含量[J].中国药业，2012，21（4）：21-22.

[3]许景景，吴纤愫.高效液相色谱法测定吐泻肚痛胶囊中厚朴酚与和厚朴酚含量[J].中国药业，2010，19（20）：36-38.