牡丹皮饮片水提取浸膏对大鼠高脂性脂肪肝的干预作用
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摘 要：目的：观察牡丹皮饮片水提取浸膏（CMPAE）对大鼠高脂性脂肪肝的药效学影响。方法：建立大鼠高脂性脂肪肝模型，同时采用灌胃给药，观察CMPAE对其血清脂质、肝功能、肝脏脂质以及氧化、抗氧化损伤指标的变化，并对肝脏组织进行病理学检查。结果：含生药量0.25g・mL【sup】-1【/sup】、0.5g・mL【sup】-1【/sup】和1g・mL【sup】-1【/sup】的CMPAE可明显降低高脂性脂肪肝大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）水平；同时观察到高脂性脂肪肝大鼠肝脏组织中TC、TG水平和丙二醛（MDA）含量明显下降，而超氧化物歧化酶（SOD）活性显著增高；肝脏组织病理学改变也在一定程度上得到了减轻。结论：CMPAE可明显抑制大鼠高脂性脂肪肝的形成，其作用机制可能与调节脂质代谢，抗氧化损伤有关。
关键词：牡丹皮；高脂性脂肪肝；大鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0896-03
Intervention effects of Cortex Moutan pieces aqueous extract on
hyperlipidemic fatty liver in rats
LI Xiang-yang【sup】1,2【/sup】,GONG Qi-hai【sup】2【/sup】,WU Qin【sup】2【/sup】, ZHANG Huan-ying【sup】1【/sup】,LI Zhi-yi【sup】1【/sup】,SHI Jing-shan【sup】2【/sup】
（1.Department of Pharmacology，Shangqiu Medical School，Shangqiu 476005, Henan,China；
2.Department of Pharmacology，Zunyi Medical School，The key Laboratory of Basic Pharmacology of
Guizhou Province，Zunyi 563003,Guizhou,China）
Abstract:Objective: To investigate the pharmacodynamic effects of CMPAE on hyperlipidemic fatty liver in rats.Methods: Rat model of hyperlipidemic fatty liver was established, while the experimental rats were gavaged CMPAE.The changes of serum lipids, liver function, liver lipid and oxidation, anti-oxidative stress indicators were observed, and liver tissue was given pathological examination.Results: The levels of serum total cholesterol （TC）, triglyceride （TG）, low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）, alanine aminotransferase （ALT）,aspartate aminotransferase （AST） were significantly reduced in hyperlipidemic fatty liver rats by given CMPAE （which contains crude drug） at doses of 0. 25g・mL【sup】-1【/sup】, 0.5g・mL【sup】-1 【/sup】and 1g・mL【sup】-1【/sup】.We also observed that the levels of liver tissue TC, TG and maleic dialdehyde （MDA）content were significantly decreased, while superoxide dismutase （SOD） activity was significantly increasedchanges of liver histopathological has been abatementted.Conclusion: CMPAE could significantly inhibit the formation of hyperlipidemic fatty liver in rats, its mechanism may be related to regulating lipid metabolism and anti-oxidative damage.
Key words:Cortex Moutanhyperlipidemic fatty liverrat
牡丹皮（CM，Cortex Moutan）系毛茛科植物牡丹（Paeonia suffruticosa Andr.）的干燥根皮，为常用中药材之一。祖国传统医学认为CM具有清热凉血、活血化瘀之功效，因而CM被应用于温毒发斑、吐血、夜热早凉、无汗骨蒸、经闭痛经、痈肿疮毒、跌扑伤痛等症状。现代药理学研究发现CM中含有酚及酚苷类、单萜及其苷类、三萜、甾醇及其苷类、黄酮、有机酸、香豆素等活性化学成分，具有抗动脉粥样硬化、降血压、心肌细胞保护、降血糖、降血脂、治疗湿疹等多种作用【sup】［1-5］【/sup】。
本实验观察到CM饮片水提浸膏（CM pieces aqueous extract，CMPAE）对大鼠高脂性脂肪肝产生较好影响并初步探讨其机制，从而为传统中药材CM的开发利用提供基础药理学依据。
1 材 料
1.1 试剂和药品 CM饮片，洛阳康鑫中药饮片有限公司产品，采用直接煎煮提取法【sup】［6］【/sup】制作CMPAE，临用时分别配置成不同浓度；胆固醇，Sigma公司产品；丙基硫氧嘧啶片，上海复星朝晖药业有限公司产品；脱氧胆酸钠，北京奇华盛生物技术发展中心产品；非诺贝特胶囊，北京京丰制药有限公司产品；各指标检测试剂盒均为南京建成生物工程研究所产品。
1.2 动物分组 健康雄性Wistar大鼠60只，清洁级，3～4月龄，体重150～180g，由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供，合格证号：SCXK-（军）2002008。随机分为6组：正常对照组（Control group，C）、高脂模型组（Model group，M）、CMPAE低剂量组（Low dose CMPAE group，LCMPAE，含CM生药0.25g・mL【sup】-1【/sup】）、CMPAE中剂量组（Middle dose CMPAE group，MCMPAE，含CM生药0.5g・mL【sup】-1【/sup】）、CMPAE高剂量组（High dose CMPAE group，HCMPAE，含CM生药1g・mL【sup】-1【/sup】）、非诺贝特组（Fenofibrate group，FF，30mg・kg【sup】-1【/sup】）。
2 方 法
2.1 建立动物模型 按照文献【sup】［7］【/sup】制作大鼠高脂性脂肪肝模型，除C组大鼠给予普通饲料，每天灌胃等体积双蒸水外，其余各组大鼠均给予高脂饲料，同时每天灌胃相应剂量的药物，连续进行6周。
2.2 指标检测 实验6周后，将大鼠禁食12h，按10mg・kg【sup】-1【/sup】腹腔注射4%水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，采用酶法，全自动血生化分析仪测定血清总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyeride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）的含量；赖氏法测定血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）；比色法测定血清天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase, AST）；胆固醇氧化酶-PAP和磷酸甘油氧化酶-PAP法测定肝脏组织中TC和TG含量；肝脏组织苏木精-伊红（hematoxylin and eosin，HE）染色；并进行肝脏组织中丙二醛（maleic dialdehyde，MDA）含量和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性的测定。
2.3 统计学处理 实验数据按随机对照设计的要求收集整理，以均数±标准差（±s）表示。组间比较采用One-way ANOVA分析，以P＜0.05认为有统计学意义。
3 结 果
3.1 CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠血清检测指标的的影响 M组大鼠血清TC、TG、LDL-C、ALT和AST均显著高于C组（P＜0.05），而CMPAE能够明显降低高脂性脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-C、ALT和AST的水平（P＜0.05），见表1。
表1 CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠血清TC TG
LDL-C ALT和AST的影响（n8，±s）
注：与C组比较：P＜0.05；与M组比较：P＜0.05（下同）。
3.2 CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠肝脏组织检测指标的影响 和C组比较，M组大鼠肝脏组织TC、TG水平和MDA含量显著升高（P＜0.05），SOD活性显著降低（P＜0.05），CMPAE能够明显降低大鼠肝脏组织TC、TG水平和MDA含量（P＜0.05），而使SOD活性显著升高（P＜0.05），见表2。
表2 CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠肝脏组织TC TG
MDA含量和SOD活性的影响（n8，±s）
3.3 CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠肝脏组织病理变化的影响 C组大鼠肝小叶结构规则,肝细胞索排列整齐，肝窦清晰可见，大部分肝细胞胞浆丰富,界限清楚,细胞中央有大而圆的核，未见肝细胞内出现脂滴。而M组肝窦消失，肝细胞广泛脂变，表现为空泡状，形似脂肪细胞。各给药组大鼠肝小叶内细胞脂变程度逐渐减轻。CMPAE组部分肝窦结构较为清晰，肝细胞胞浆内脂滴大量减少或消失，见图1。4 讨 论
目前对于高脂性脂肪肝治疗尚缺乏理想的药物，临床上常用的贝特类、他汀类调血脂药虽然降血脂作用明显，但易引起肝损伤。因此，利用我国传统药用资源的优势，开发有效调节血脂，又能对肝脏产生保护作用的调脂药物具有重要意义。
研究资料表明高脂性饲养可造成大鼠脂质代谢紊乱，会出现血脂升高以及肝脏的脂质堆积【sup】［8］【/sup】。长期摄入高脂食物，脂肪吸收增加，肝脏摄取脂肪酸及其酯化作用增强，内源性血脂、脂蛋白合成增多，当肝脏对TG、VLDL等合成超过其运转后，就会在在肝细胞内蓄积，从而形成脂肪肝，病理学上出现一系列肝细胞脂变、肝窦受压狭窄、缺血变性等表现。此外，脂肪肝的形成还与肝脏内氧化应激和脂质过氧化反应损伤引起的“二次打击”有关，相关研究发现脂质过氧化反应干扰了肝内脂质代谢。因此，降低血脂、清除肝脏中堆积的脂肪、增加肝脏的抗氧化能力就成了治疗脂肪肝的重要方法【sup】［9-10］【/sup】。
本实验发现CMPAE能够减轻高脂性脂肪肝大鼠肝脏脂肪变性，其可能原因和CMPAE降低高脂性脂肪肝大鼠血清TC、TG、LDL-CT水平，减少TC和TG在肝脏中蓄积，以及降低肝脏组织中MDA含量、提高SOD活性，从而对抗氧化损伤有关；此外，本实验还发现，CMPAE能够显著降低高脂性脂肪肝大鼠血清ALT和AST的水平，这提示CMPAE对高脂性脂肪肝大鼠的肝脏功能具有保护作用。而CMPAE为什么能够改善高脂性脂肪肝大鼠脂质的代谢？是否与其影响相关脂质代谢酶的活性有关或脂质受体功能的调节有关？这正是我们下一步工作的方向。
总之，本实验表明CMPAE可能通过降低血脂、减少脂质在肝脏中的蓄积以及抗氧化损伤对大鼠高脂性脂肪肝的形成起到抑制作用。
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