脑梗塞患者血中一氧化氮对血小板功能的影响

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【摘要】目的 研究脑梗塞患者血中一氧化氮（NO）的含量与血小板功能之间的关系。方法 将20例脑梗塞患者分别于发病急性期和稳定期采用硝酸还原酶法测血中NO含量；用光电比浊法和免疫荧光分析法分别测定血小板聚集率（PAgT）和血小板α-颗粒膜蛋白（GMP-140）水平；同时检测正常对照15例。结果 血清中NO含量在发病急性期较正常对照明显增高（P

【关键词】脑梗塞；一氧化氮；血小板功能

一氧化氮（Nitric Oxide, NO）是一种重要的信使分子，效应分子和免疫调节分子，在体内具有广泛的生物作用[1，2]。近年来，NO在多个系统的生理病理过程中所起的重要作用不断被发现。本文以脑梗塞患者为研究对象，测定其血中NO含量、血小板聚集率（PAgT）和血小板膜α-颗粒膜蛋白（GMP-140）三项指标，以探讨血中NO含量变化对血小板功能的影响。

1材料与方法

1.1 对象：20例脑梗塞患者（病例组）均为神经内科住院患者，入院前2周内未服用过影响血小板功能的药物，其中男女各10例，平均年龄65岁。正常对照组15例，均为健康检查者，无冠心病、糖尿病史，平均年龄64岁。与病例组比较，两组在年龄上无显著性差异（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 标本制备：全部患者于发病的急性期（第一天）及稳定期（治疗后第七天）分别空腹抽取静脉血，以1ml静脉血离心3000rpm，10min，分离血清冰冻保存用于NO测定；以4.5ml静脉血，加0.5ml，109mmol/L枸橼酸钠抗凝，离心后分别制备富血小板血浆（PRP）和贫血小板血浆（PPP），用于PAgT测定；以1ml静脉血，0.1ml，3％EDTA・K2抗凝，离心后取血浆-30℃低温保存，用于血小板GMP-140测定。

1.2.2 血清中NO含量测定：采用硝酸还原酶法。试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，按试剂盒说明书操作。

1.2.3 PAgT测定：采用光电比浊法。ADP（终浓度6μmol/L）和ADR（终浓度1：100）两种诱导剂。血小板聚集、凝血因子分析仪为北京中勤世帝科学仪器有限公司产品。

1.2.4 血小板GMP-140的测定：采用免疫荧光分析法。CD62荧光抗体由上海复兴生物制剂所提供，流式细胞仪为美国库尔特公司产品，按说明书操作。

1.2.5 统计学处理：数据以均数±标准差（X±S）表示，组间比较用t检验。

2结果

2.1 脑梗塞患者血中NO的含量变化

结果发现，脑梗塞患者于发病急性期血中NO的含量较正常对照组高，而稳定期血中NO含量降至正常对照组水平（见表1）。

*与正常对照组相比P0.05

2.2 脑梗塞患者PAgT的变化

无论以ADP还是ADR为诱导剂，在脑塞患者发病急性期与正常对照组比较都有显著性降低(PADP

*与正常对照组相比P0.05

2.3 脑梗塞患者血小板GMP-140的含量变化

研究发现脑梗塞发病急性期和稳定期的GMP-140含量无显著性差异（P>0.05），但与正常对照组相比均有显著性差异（P

*与正常对照组相比P

3讨论

NO在全身的作用极为广泛，在脑中的作用则更为突出。研究表明，NO在体内外均是强效的脑血管扩张因子。在基态下，脑血管都有NO的形成，这些合成的NO用以维持脑血管的基本张力和脑循环，其细胞来源可能是胶质细胞或神经元[1]。

NO与脑梗塞的关系，自从NO被认识以来，其在缺血性脑损害所起的作用一直是研究的重点。近年来研究的结果有分歧，这表明对NO在脑梗塞中的作用机制需要进一步研究[3]。关于NO在脑梗塞时的变化，本研究发现，患者于发病急性期（第一天）血中NO的含量明显升高（131.54±35.94μmol/L），和正常对照组比有显著性差异（P

本研究发现，在NO升高的脑梗塞发病急性期，PagT明显降低，与正常对照有显著性差异（PADP

血小板GMP-140是分子量为140KD的颗粒膜蛋白，存在于血小板α-颗粒膜表面，当血小板活化时，GMP-140随着α颗粒的释放，迅速在活化血小板表面表达，通过微血管时因血小板破碎而释放入血，是最具特异性的血小板活化标志物[5]，因此血浆内GMP-140的含量可以特异地反映血小板活化和破坏的程度。本研究发现，脑梗塞患者发病急性期和治疗后稳定期较正常对照组均有显著性差异（P0.05）。我们认为脑梗塞时血浆中血小板GMP-140含量的降低，可能是由于NO对血小板抑制作用所致。

总之，通过对脑梗塞急性期和治疗后的稳定期血中NO含量、PAgT和血小板GMP-140水平的检测显示，随着脑梗塞早期血中NO含量的增加，则血小板的聚集功能降低；而稳定期NO含量降低时，则血小板聚集功能即恢复。血小板GMP-140是反映血小板活化和释放功能的标志物，它在NO增高时反而降低，并且在急性期和稳定期之间无显著性变化。由于本研究采用的病例在治疗前及治疗过程中没有使用干扰血小板功能的药物，所以血中NO的增高对血小板的聚集、释放和活化均有抑制作用。充分认识上述血液病理变化并检测血中NO、PAgT、GMP-140的水平，对脑梗塞患者诊断、治疗及预后观察具有重要价值。

参考文献

[1] 钱红松. 一氧化氮合酶与脑缺血. 国外医学脑血管疾病分册. 1996; 4（4）

[2] 陶玉超. 一氧化氮与临床关系的研究进展. 国外医学生理、病理科学与临床分册. 1997; 17（2）

[3] Lin Mo Jun. Inhibitory effects of S-nitrosocaptopril on vasomotor tone. Acta pharmacological sinica. 1998 Sep; 19（5）

[4] 何建方. 脑出血患者血浆血小板α-颗粒膜蛋白的变化及临床意义. 中国危重病急救医学.1998,4; 10（4）

[5] 高元明. 慢性肺心病患者血小板功能的研究. 中华结核和呼吸杂志. 1998,7; 21（7）