对普通细菌药敏试验影响因素的探讨

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吉林省结核病医院检验科，吉林九台130500

【摘要】本文通过对细菌药物敏感试验过程中的几个影响因素（实验操作过程中的影响因素、培养基质量的影响因素、药物敏感纸片本身质量的影响因素）的探讨，使细菌室的工作人员能够更准确地做好细菌培养和药物敏感试验，为临床提供可靠地检验结果，更好地服务病人，从而提高细菌药敏试验的质量，为病人的用药提供依据。

【关键词】细菌；敏感；药物敏感试验

【中图分类号】R446.5【文献标识码】A文章编号：1004-7484（2012）-05-1126-02从临床标本中，分离细菌的目的是为疾病的病原学诊断提供依据，也即查找与疾病相关的微生物，及其对抗生素的敏感性，对临床诊断、治疗、预后和流行病学调查很有价值。在分离时应掌握以下原则。

人体的很多部位与外界生活环境相通，存在正常菌群，但不致病，故分离时应区别标本中是常居菌群污染还是致病菌。如痰标本，由于咳出时必须经过口咽部，而口咽部又存在大量的正常菌群，标本必然混杂有常居菌群，故了解口咽部存在的常居菌群，对于区分致病菌是必要的。另外，机体的某些部位是无菌的，如检到细菌，应视为致病菌，如血液、脑脊液、骨髓等要求采集标本过程，按照操作规程进行，排除标本污染，特别是条件致病菌，必要时重复取样。

了解标本来源及临床信息，有目的地检出病原菌，因此要求送检至细菌室的标本必须同时有一完整、清楚的申请单，包括标本来源、是否用过抗生素和采集时间、部位和方法等，否则，临床细菌室有权力将标本退回。首先，根据标本的具体情况（来源及可能致病菌），选择合适的可用于细菌分离的培养基和培养环境。比如在进行痰标本的分离时，可以选择血琼脂或巧克力琼脂的培养基；在对链球菌（化脓性、肺炎链球菌）及白喉杆菌进行分离时，可以选择血平板进行；对于革兰阴性菌进行分离培养时选择中国蓝等；对于嗜血杆菌进行分离筛选时，可选择巧克力琼脂进行培养；根据不同的标本，选择合适的培养环境，有利于提高诊断检验的正确率。

随着近年来抗生素的普遍应用，耐药性增加，细菌敏感性变化，药敏试验已经成为医务人员和患者非常重视的一种用以选择药物的手段，以防止药物使用不当，导致耐药菌株的产生［1］，避免对患者的治疗带来影响。

细菌对于抗生素的耐药性或敏感性可以分为3个层次。①耐药：在使用抗生素（一般剂量）后，并没有对细菌的生长繁殖产生抑制作用，使其在组织或者血液中的浓度并没有降低，此过程跟细菌所处的部位没有关系；②中介：在使用高剂量的抗生素后，细菌的生长和繁殖可以被抑制，使其浓度降低；③敏感：在使用抗生素（一般剂量）后，既可以对细菌的生长和繁殖产生抑制作用，从而达到治疗疾病的目的。对于药敏纸片扩散法（K-B法）而言，根据抑菌环直径大小与最低抑菌浓度的相关性，结合临床上一直敏感或耐药菌株的状态，其结果是可靠的。WHO推荐K-B法，其目的在于技术的简单和可重复性。本法特别适用于肠杆菌科细菌等快速生长的致病菌，但不适用于专性厌氧菌及酵母菌样菌等某些特殊菌种。无论用哪种方法接种，只要质控菌株的抑菌环在预期范围内，均可按统一解释标准报告结果。但并非从感染病人分离到的微生物都必须做药敏试验，对于污染、集体共生的正常细菌群和那些被认为引起感染的微生物，应先分纯，鉴定菌种后再做药物敏感试验。

对细菌进行药敏试验，其结果的准确性收到多种因素的影响，在临床工作过程中，根据以往的经验，其主要的影响因素主要表现在以下几个方面：1.药敏试验过程中的主要影响因素

1.1保证细菌纯度。药物敏感性主要是根据某种细菌纯培养时产生的抑菌环的大小进行判断的，不同细菌对药物的敏感性有所差异，因此，其产生的抑菌环大小也不尽相同。当细菌纯度不同时，产生的抑菌环大小与纯度较高的该细菌产生的抑菌环就会存在差异，导致错误判断，因此，对于致病菌在进行药敏实验时必须保证其纯度。在选择致病菌的菌落时，应选择一种或两种认为可能是致病菌的菌落，并分别做它们的细菌鉴定试验，根据鉴定结果，再进行相应的药敏实验，医生可以综合各个药敏试验的结果，从而正确的选择药物。

1.2细菌浓度的影响。在进行药敏实验前，必须将细菌配制为具有一定浓度的菌液。根据WHO的相关规定，合适的菌液浓度为每毫升1.5亿个左右。若其浓度较低，可能会增加其敏感性，表现为对各种药物都敏感；若其浓度较高，则可能会增加其耐药性［2］，表现对各种药物耐药。

1.3菌液分布。在进行药敏实验前，将菌液在培养基上进行涂板时，要保证其均匀在培养基上分布，若分布不均，则有可能对药敏结果产生误差。一般在涂菌后的15min以后，才能够在其上贴药敏纸片。主要原因是，将细菌涂在培养基上后，细菌对培养基的环境要有一定时期的适应，15min即可，时间也不宜过长，时间较长则有可能产生耐药；在药敏纸贴好20min后，可以将其放入温箱进行孵育（37℃）。

1.4在对药敏纸进行粘贴时，每次拿药敏纸事都要将镊子在酒精灯上烧一下，防止不同药敏纸间相互影响，从而对药敏结果的正确性带来影响。同时，对于药敏纸的粘贴位置，应该在培养皿的周边，主要是由于在培养皿的中部培养基厚度不够。2.培养基方面的影响因素

2.1培养基种类。根据不同的致病菌，选择合适的培养基进行药敏试验。一般而言，主要是根据世界卫生组织的规定，选择M-H培养基，其进行药敏试验效果较好，主要原因是在此种培养基中，含有低胸腺嘧啶，能够与磺胺类药物产生竞争作用；此外，其中含有Ca2+、Mg2+离子，能够发挥其触酶的作用。同时，有的细菌生长需要有其特殊的要求，比如：对于淋球菌进行药敏试验，需要应用巧克力淋球菌的培养基。

2.2培养基的厚度。对于药敏试验，其要求培养基的厚度约为4mm，若其厚度过厚时，可以增加耐药性，容易出现假阳性；若培养基过薄，可以增加其敏感性，使得一些耐药菌结果出现错误，表现为敏感；同时在试验时不能将药敏纸放在培养皿的中部，而是应该在其周围放置，以免出现抑菌环异常，应该耐药的敏感，应该敏感的反而耐药，给临床提供不准确的报告。3.药敏纸方面的影响因素

3.1药敏纸的药量和PH值。若采用半饱和法进行制作，一般药敏纸质量在10μg作用；若用饱和法进行制作，其质量在20μg左右；药敏纸的PH值一般在7作用［2］，对于保持药物活性比较合适。

3.2药敏纸片的厚度及直径。一般而言，药敏纸片的在1mm左右，对于药物的扩散及细菌的生长具有促进作用；药敏纸片的直径在6.00-6.35mm左右；若纸片的厚度不适，或者直径过大或过小，都会影响到实验的结果。

3.3药敏纸片的质量。药敏纸片质量的好坏是影响药敏试验准确性的重要因素，不同生产厂家的药敏纸片间存在偏差，即使是同一批生产的也可能存在误差，因此，在进行实验前对药敏纸片进行检验，确定其准确度，对于一些准确度较低的纸片应该舍弃，只有满足条件的药敏纸片才可以用于实验。对于纸片的保存，一般应该在-10℃进行保存，避免潮湿的环境，目的是保证药物的活性。

3.4药敏纸片的保质期。对于长时间保存的药敏纸片，应该使用标准菌株进行定期检查，主要根据抑菌环的大小进行判断，若其大小发生变化，则说明药敏纸片失效，不能进行药敏实验。

综上所述，上述问题是细菌室的工作人员在日常工作中要经常接触到的问题，也是细菌室的工作人员进行药敏实验时保证结果准确可靠时必须仔细考虑的问题，作为细菌室的工作人员应该对上述影响因素引起重视，为临床准确用药提供依据，对症用药，使病人早日康复。参考文献

［1］杨文杰，陶家驹，张宾，等.大型综合医院524株细菌的分离鉴定及其耐药性分析［J］.中国全科医学，2001，4（10）：781-783.

［2］董亮，吴大纬，孙恩华，等.临床疗效及药敏试验研究［J］.中国全科医学，2004，7（7）：451.