检测乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟脲嘧啶的敏感性

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【摘要】目的：检测不同乳腺癌细胞株对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性。方法：体外培养乳腺癌低转移细胞株MCF-7和高转移细胞株MDA-MB-435S，并加入不同浓度的5-氟尿嘧啶，MTT法检测这两种细胞株对5-氟尿嘧啶的敏感性。结果：5-氟尿嘧啶对这2种细胞株的细胞生长均具有抑制作用，且抑制作用与给药剂量正相关。结论：应用MTT法可检测乳腺癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性，可用于指导临床选择合适的化疗药物，制定治疗方案。

【关键词】乳腺癌；5-氟尿嘧啶；MTT；MCF-7；MDA-MB-435S

【中图分类号】R737.9【文献标识码】A文章编号：1004-7484（2012）-05-0771-02乳腺癌是常见的妇科恶性肿瘤，术前或术后常辅以全身化疗以降低肿瘤的复发率。但乳腺癌存在显著的个体差异，临床上无法制定一个治疗方案适用于所有的乳腺癌患者，因此，必须根据患者乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性制定个性的治疗方案。MTT法常用于监测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。本文旨在通过MTT法检测乳腺癌低转移细胞株MCF-7和高转移细胞株MDA-MB-435S对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性。1.材料与方法

1.1材料：选取乳腺癌低转移细胞株MCF-7和高转移细胞株MDA-MB-435S进行细胞培养。化疗药物选取5-氟尿嘧啶，作用浓度分别为0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25、50和100μg/ml。其他试剂主要是MTT、DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶和DMSO。

1.2方法：10%FBS的DMEM培养基培养MCF-7和MDA-MB-435S，置于5%CO2的37℃孵箱中，每3d换液培养，至细胞汇合度达90%，0.25%胰酶消化细胞传代，调整细胞浓度至5×103/ml。取出2个96孔板，分别加入MCF-7和MDA-MB-435S细胞悬液，根据不同药物浓度和实验对照组分为9组，每组做6个复孔，每孔接种200μl细胞悬液。细胞贴壁后，加入不同检测浓度的5-氟尿嘧啶，剩余的1组加入DMSO作为溶酶对照，同时设置一组仅加培养基作为调零组，加样完毕后细胞放置孵箱培养72h。在培养第68h时，取出培养板，实验组每孔加入5mg/ml的MTT20μl，4h后弃上清，每孔加入150μlDMSO，放于摇床上震荡15-20min。酶标仪检测每孔OD值（λ=570nm），各实验分组取复孔平均值，重复上述实验3次。细胞抑制率（inhibit rate，IR）=（对照组平均OD值-实验组平均OD值）/对照组平均OD值×100%。

1.3统计学处理：采用SPSS14.0对资料进行统计分析，资料的描述用χ±s，认为P

不同作用浓度的5-氟尿嘧啶对乳腺癌低转移细胞株MCF-7和高转移细胞株MDA-MB-435S的抑制作用如表1所示。由表1可看出，随着5-氟尿嘧啶药物浓度的升高，该化疗药物对两种乳腺癌细胞株的抑制率逐渐升高，提示高浓度的5-氟尿嘧啶可显著抑制细胞生长；但从50μg/ml到100μg/ml，细胞的抑制率没有明显提高，5-氟尿嘧啶对细胞的抑制进入平台期；相同作用浓度的5-氟尿嘧啶对乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-435S的抑制作用更为明显，单因素方差分析结果显示，0.78、1.56、3.125、6.25、12.5、25μg/ml的5-氟尿嘧啶对MDA-MB-435S的抑制率显著高于MCF-7，且差异具有统计学意义，但50和100μg/ml的5-氟尿嘧啶对这两种细胞株的抑制率无显著差别，具体数据，（见表1）。

表1不同浓度5-氟尿嘧啶对MCF-7和MDA-MB-435S的抑制作用

细胞类型0.781.563.1256.2512.52550100MCF-721.42±6.3434.21±2.2541.32±8.3445.26±1.6452.48±1.1269.47±1.6381.52±5.6284.35±3.22MDA-MB-435S3426±3.9842.68±1.7354.37 ±3.1562.72±1.9373.47±1.8578.84±5.3490.52±5.2492.15±2.71P0.0130.0070.0040.0080.0010.0030.3820.4273.讨论

MTT法可用于观察细胞增殖和凋亡情况，常用于检测细胞对某种药物的敏感性和检测细胞的增殖情况和细胞活力。目前，临床研究多用MTT法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，为制定个性化的化疗方案提供理论依据。乳腺癌的治疗术前或术后需辅以化疗，由于肿瘤的异质性，合理的选择化疗药物，制定个性化的化疗方案对患者的预后、提高5年、10年生存率和提高患者的生活质量具有重要意义。5-氟尿嘧啶是一种广谱化疗药物，是乳腺癌化疗中的一线药物，但该药并不特异性的针对乳腺癌，且存在一定的毒性，临床研究也证实5-氟尿嘧啶并非对所有乳腺癌患者均有较好的化疗效果。因此，用药前判断肿瘤对化疗药物的敏感性有利于指导制定化疗方案。

本研究结果显示，随着5-氟尿嘧啶药物浓度的升高，对高转移和低转移乳腺癌细胞株的抑制率逐渐升高，但从50μg/ml到100μg/ml，细胞的抑制率没有明显提高，5-氟尿嘧啶对细胞的抑制进入平台期。因此，在临床选择用药时，如果患者耐受较好，可提高化疗药物浓度以增强治疗效果，但由于药物在达到一定浓度时具有平台效应和化疗药物的复兴，临床用药不能盲目的加大药物剂量。5-氟尿嘧啶对乳腺癌高转移细胞株的抑制作用优于低转移细胞株，提示临床用药时，5-氟尿嘧啶对恶性程度较高、存在较高转移风险的肿瘤可能具有比较好的化疗效果。

综上所述，MTT法可用于检测乳腺癌细胞对化疗药物5-氟尿嘧啶的敏感性，指导临床选择合适的化疗药物，制定个性化的化疗方案。