VHL蛋白及HIF―1α蛋白在结直肠癌中的表达及其相关性的研究
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【摘要】 目的：探讨结直肠癌中vhl（von Hippel―Lindau）蛋白的表达与hif-1α蛋白表达的意义，并分析两者的相关性。方法：应用免疫组化Envisin二步法检测58例结直肠癌及20例结直肠粘膜炎症组织中VHL及HIF-1α的表达。结果：（1）VHL在结直肠癌组织中的阳性率为46.55%（27例/58例），低于在结直肠粘膜炎症组织中的95%（19例/20例），差异有显著性（P
【关键词】 VHL；HIF-1α；结直肠癌；免疫组化
【中图分类号】R735.3+5 【文献标识码】B【文章编号】1005-0019（2013）12-0553-01
VHL （von Hippel―Lindau）基因是1993年被鉴定的肿瘤抑制基因，是在研究VHL综合征时发现的。VHL基因主要通过其编码的蛋白质pVHL发挥抑癌作用。pVHL的一个重要功能是与转录延长因子Elongin和 Cu12蛋白组成VEC （pVHI-ElonginC-ElonginB-Cul2）复合物（又称复合体CBCVHL），其已被证实属于E3-泛素蛋白酶系统，有介导蛋白降解的作用[1]。缺氧诱导因子HIF（hypoxia inducible factor）是已知由VEC复合物降解的最重要的蛋白，包括HIF-1，HIF-2和HIF-3，HIF-1α是HIF-1的功能基团。本文通过免疫组化法检测pVHL和HIF-1α蛋白在结直肠癌和结直肠炎症组织的表达，探讨其在结直肠癌发生发展中的作用及它们之间的相互关系。
材料与方法
1.1研究材料 收集贵阳医学院附属医院1994年1月―1998年12月间结直肠癌手术标本共计348例，选取其中具有完整临床及随访资料并且术前均未经化疗和放疗的同一组织学类型（管状腺癌Ⅱ级）及治疗方法相同的病例58例。同时收集同期结直肠粘膜炎症标本20例做对照。
1.2主要试剂 浓缩型鼠抗人单克隆抗体VHL购自迈新生物有限公司，兔抗人多克隆抗体HIF-1α购自博士德生物有限公司，为工作液。SuperPicTure通用型试剂盒购自广州深达生物有限公司，DAB显色剂购自北京中杉生物有限公司。
1.3 方法：
1.3.1 标本处理与常规HE染色，按常用病理技术操作规范进行。
1.3.2免疫组织化学染色：采用Envision法。VHL抗体工作浓度1：75。操作按说明书进行。用PBS代替一抗做空白对照。
1.3.3 结果判定：免疫组化结果以胞浆内出现浅黄色至棕褐色颗粒为阳性细胞标志与大多数细胞染色特征决定。
1.3.4 统计学方法：运用SPSS16.0统计软件数据包进行数据处理，采用x2检验和 x2关联性分析。
2 结果
2.1 免疫组化结果
2.1.1 VHL的表达
VHL蛋白主要表达于细胞浆，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒或团块。VHL蛋白在癌组织及直肠黏膜慢性炎症组织中都能检测到（图1、图2）。20例慢性炎症组织中阳性率为95%（19/20），而在结直肠癌组织中为46.55%（27/58），可见，VHL在结直肠癌组中的表达明显低于炎症组，两者比较差异有显著性（P
图1：结直肠癌中VHL呈阳性表达 Envision法 X200 图2：结直肠黏膜慢性炎症组织中VHL呈阳性表达 Envision法 X200
2.1.2 HIF-1α的表达
HIF-1α主要表达于细胞浆，阳性染色细胞呈棕黄色颗粒或团块。HIF-1α蛋白在癌组织及直肠黏膜慢性炎症组织中都能检测到（图3、图4）。58例结直肠癌标本中有43例阳性，阳性率为74.14%。20例对照中4例阳性（20%）。HIF-1α在结直肠癌中的表达明显高于结直肠炎症组织，两者间有显著性差异（P
图3：结直肠癌中HIF-1α呈阳性表达 Envision法 X200 图4：结直肠黏膜慢性炎症组织中HIF-1α呈阳性表达 Envision法 X200
表1 VHL和HIF-1α在结直肠癌和结直肠粘膜炎症组织中的表达
表2 VHL、HIF-1α的表达与结直肠癌患者临床病理参数之间的关系
2.1.3 VHL与HIF-1α表达的关系
VHL与HIF-1α在结直肠癌组织中表达具有相关性（x2=9.098，P
表3 结直肠癌中VHL与HIF-1α表达之间的相关性
3 讨论
VHL基因主要通过其编码的蛋白质pVHL发挥抑癌作用。本实验中结直肠癌中pVHL的表达，显著低于慢性炎症组织，表明pVHL的低表达可能与结直肠癌的发生、发展相关。本实验还表明pVHL表达可能与结直肠癌肿瘤淋巴结转移有关。HIF-1的两个亚单位（HIF-1α和 HIF-1β）广泛表达于体内的组织和细胞。研究发现HIF-lα参与调控转录活性的下游靶基因多达6O多种，而这些调节最终导致肿瘤的浸润和转移[2]。本次试验中，我们发现HIF-1α在结直肠癌中的表达高于炎症对照的表达，差异有显著性（P
已知由pVHL结合、由VEC复合物降解的最重要的蛋白是缺氧诱导因子HIF。当VHL基因发生改变时，将有可能导致其表达的蛋白质pVHL减少或者异常[3]。其所组成的VEC复合物减少或异常，降解蛋白质的能力下降，则HIF的表达增加。所以在恶性肿瘤中，VHL的表达和HIF的表达是相关的。在本次试验中，我们证实了结直肠癌中VHL的表达与HIF-1α的表达有相关性（P
参考文献
[1] Shehata BM，Stockwell CA，Castellano-Sanchez AA，et al.Von Hippel-Lindau （VHL） disease：an update on the clinico pathologic and genetic aspects[J].Adv Anat Pathol.2008，15（3）：165-171.
[2]Zagzag D，Lukyanov Y，Lan L，et a1.Hypoxia-inducible factor 1 and VEGF upregulate CXCR4 in glioblastoma：implications for angiogenesis and glioma cell invasion[J].Lab Invest.2006，86（12）：1221-1232.
[3] Giménez-Bachs JM，Salinas-Sánchez AS，Sánchez-Sánchez F，et a1.VHL protein alterations in sporadic renal cell carcinoma[J]. Clin Oncol.2007，19（10）：784-789.