恰玛古蜜膏对小鼠免疫功能的影响
开篇：润墨网以专业的文秘视角，为您筛选了一篇恰玛古蜜膏对小鼠免疫功能的影响范文，如需获取更多写作素材，在线客服老师一对一协助。欢迎您的阅读与分享！
[摘要] 目的:研究恰玛古蜜膏对小鼠免疫功能的影响。方法:通过紫外分光光度法测定小鼠单核-巨噬细胞对血流中碳粒的清除能力及小鼠血清中IgM抗体水平;测定小鼠耳廓肿胀度,观察恰玛古蜜膏对二硝基氯苯诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响;镜检计数观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力。结果:恰玛古蜜膏40 g/kg剂量能明显提高小鼠单核-巨噬细胞对血流中碳粒的清除能力,促进小鼠血清中IgM抗体的生成,提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力;恰玛古蜜膏40 g/kg剂量和20 g/kg剂量能明显增强二硝基氯苯诱导的小鼠迟发型超敏反应。结论:恰玛古蜜膏可增强机体的免疫功能。
[关键词] 恰玛古;小鼠;免疫调节
[中图分类号] R285.5[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)02(c)-020-03
The effect of Brassica Campestris Ointment on immune function of mice
SUN Yan1, AN Xiqiang2, MA Yuan2, ZHANG Tao2, YAO Hua2, JIA Hongyan3, ZHANG Yahui1
(1.School of Pharmacy, Shihezi University, Shihezi 832000, China; 2.Institute of Meteria Medica, Xinjiang Uygur Autonomous Region, Urumqi 830004, China; 3.The Company of Health Products of Keping Shengquan, Urumqi 830000, China)
[Abstract] Objective: To study the effect of Brassica Campestris Ointment on immune function of mice. Methods: The influence of Brassica Campestris Ointment on carbongranular clearance ability of mononuclear macrophage in mice and the IgM level were determined by ultraviolet spectrophotometry, tumefaction of ear was determined through the delayed type hypersensitivity (DTH) induced by DNCB; the ability of englobing red blood cells of chicken of peritoneal macrophage in mice was observed by microscopic examination. Results: Carbongranular clearance ability of mononuclear macrophage, the level of IgM and the ability of englobing red blood cells of chicken of peritoneal macrophage in mice were enhanced significantly by the 40 g/kg dosage group of Brassica Campestris Ointment; DTH induced by DNCB was enhanced significantly by the 40 g/kg dosage group and 20 g/kg dosage group of Brassica Campestris Ointment. Conclusion: Brassica Campestris Ointment has effect on improving the immunological function of mice.
[Key words] Brassica campestris; Mice; Immune function
恰玛古(芜菁,Brassica campestris)是一种草本十字花科植物,又称蔓箐、狗头芥等。《中国中草药大全》、《维吾尔药志》、《中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)》等对恰玛古的植物来源、药材性状、化学成分、药理作用等都有详细记载。恰玛古为一种无毒副作用的植物,具有性温排毒、提高机体免疫功能、促进消化、清肺、消肿、降血脂、抗癌等药理作用[1]。恰玛古蜜膏由恰玛古和蜂蜜为主要原料制成,本文通过实验研究对其在调节机体免疫功能方面的作用进行初步探讨,为进一步开发其药用价值提供依据。
1材料与方法
1.1实验动物
昆明种小鼠,雌雄兼用,体重18～22 g,均由新疆医科大学实验动物中心提供,动物合格证号[新医动字(新)syxk2003-0001]。
1.2受试样品与试剂
1.2.1受试样品恰玛古蜜膏,棕黄色,膏状,成人每次20～50 g,每天3次,由新疆柯坪圣泉实业有限公司研制(批号20090203)。
1.2.2试剂二硝基氯苯(DNCB)(天津市光复精细化工研究所,批号20070421);丙酮(天津市科密欧化学试剂开发中心,批号20060301);麻油(新疆馨泉投资有限公司,批号20080204);印度墨汁(Solarbio试剂公司);硫化钡(西安化学试剂厂,批号051022);碳酸钠(天津市盛淼精细化工有限公司,批号070520);生理盐水(新疆制药厂,批号07110721)。
1.2.3试液配制4% Giemsa染液(姬姆萨染料1.0 g、甘油66.0 ml、甲醇66.0 ml);Alsever溶液(葡萄糖4.10 g,柠檬酸钠1.60 g,氯化钠0.84 g,蒸馏水200 ml,无菌过滤);都氏试剂(碳酸氢钠0.500 g,氰化钾0.025 g,高铁氰化钾0.100 g,蒸馏水500 ml)。
1.3实验仪器
SP-752分光光度计(上海光谱仪器有限公司);AL204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);80-2离心机(江苏省金坛市医疗仪器厂);显微镜CH30(日本OLYMPUS产品);立式压力蒸气灭菌器(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。
1.4方法
1.4.1恰玛古蜜膏对二硝基氯苯诱导的小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响[2-4]选取昆明种小鼠40只,体重18～22 g,按性别、体重随机分为4组,分别为模型对照组和恰玛古蜜膏3个剂量(40、20、10 g/kg)给药组,各给药组连续灌胃给药13 d,模型对照组给等量的蒸馏水(DW)。于给药后第8天,每组小鼠用8%硫化钡涂抹于腹部脱毛,范围约3 cm×3 cm,每组小鼠均用1% DNCB丙酮麻油溶液(1∶1)50 μl均匀涂抹于褪毛区致敏,并于第2天再强化1次。致敏5 d后,将1% DNCB溶液10 μl均匀涂抹于各组小鼠右耳廓两面进行攻击。攻击24 h后,颈椎脱臼处死小鼠,剪下左右耳片,用打孔器取下直径8 mm的耳片,称重,以肿胀度来表示DTH的程度,计算肿胀抑制率。
肿胀度=右耳重-左耳重。
肿胀抑制率(%)=[(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度]×100%。
1.4.2恰玛古蜜膏对小鼠单核-巨噬细胞碳清除能力的影响[5-7]选取昆明种小鼠40只,体重18～22 g,按性别、体重随机分为4组,分别为空白对照组和恰玛古蜜膏三个剂量(40、20、10 g/kg)给药组,各给药组连续灌胃给药10 d,对照组给等量的蒸馏水。末次给药1 h后,各组小鼠尾静脉注射印度墨汁生理盐水溶液(1∶4),按每10 g体重注射0.1 ml计算。各组小鼠分别于注射后2 min(T1)和10 min(T2)眼眶取血20 μl,加入2 ml 0.1% Na2CO3溶液中,摇匀后于600 nm测吸光度值A1和A2,将动物处死后,取肝、脾称重,计算碳廓清指数K值和吞噬指数α。
K=(logAl-logA2)/(T2-T1)。
α=■×体重/(肝重+脾重)。
1.4.3恰玛古蜜膏对小鼠血清中IgM抗体水平的影响[8-9]选取昆明种小鼠40只,动物分组及给药剂量同“1.4.2”,各给药组连续灌胃给药12 d,对照组给等量的蒸馏水。各组小鼠均在第4天给药后2 h腹腔注射SRBC悬液0.2 ml/只。末次给药1 h后,眼眶取血,离心分离血清,用生理盐水稀释200倍后按表1加样。
表1 测定样品吸光度值的加样
Tab.1 The spotting blank of determining the absorbance of sample
各管加样后于37℃水浴保温10 min,水浴终止反应后离心(2 000 r/min,10 min)。取上清液1 ml加都氏试剂3 ml于试管内。同时取SRBC稀释液0.25 ml、都氏试剂4 ml于另一支试管内,充分摇匀,放置10 min,于540 nm处以对照管作空白,分别测定各管吸光度值,计算半数溶血值HC50和抑制率。
HC50=(样品吸光度值/SRBC半数溶血吸光度值)×血清稀释倍数。
抑制率(%)=[(对照组HC50-给药组HC50)/对照组HC50]×100%。
1.4.4恰玛古蜜膏对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响[10-12]选取昆明种小鼠40只,动物分组及给药剂量同“1.4.2”,各给药组连续灌胃给药10 d,对照组给等量的蒸馏水。于末次给药1 h后,各组小鼠腹腔注射5%鸡红细胞0.4 ml,8 h后处死,剖腹露腹膜,向腹腔内注入生理盐水2 ml,轻揉腹部1 min,吸取腹腔液0.2 ml涂于载玻片上,37℃孵育30 min,取出,以生理盐水冲洗玻片,吹干,丙酮-甲醇(1∶1)固定5 min,4% Giemsa染液染色3～5 min,用蒸馏水漂洗,晾干后,在显微镜下观察200个巨噬细胞,计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/200个巨噬细胞×100%。
吞噬指数=被吞噬的鸡红细胞总数/200个巨噬细胞。
1.5 统计学方法
数据用均数±标准差(x±s)表示,正态分布的两组的均数比较用t检验,用SF 9.0软件进行处理,P
2 结果
2.1 恰玛古蜜膏对二硝基氯苯诱导的小鼠迟发型超敏反应的影响
不同剂量的恰玛古蜜膏都有提高小鼠耳肿胀度的作用,与对照组比较,恰玛古蜜膏40 g/kg和20 g/kg剂量肿胀度显著高于对照组(P
表2 恰玛古蜜膏对小鼠迟发型超敏反应的影响(x±s,n=10)
Tab.2 Effects of Brassica Campestris Ointment on delayed type hypersensitivity in mice (x±s,n=10)
与对照组比较,*P
2.2恰玛古蜜膏对小鼠单核-巨噬细胞碳清除能力的影响
不同剂量的恰玛古蜜膏都有提高小鼠单核-巨噬细胞碳清除能力的作用,与对照组比较,恰玛古蜜膏40 g/kg剂量可明显提高小鼠碳廓清指数K和吞噬指数α(P
表3 恰玛古蜜膏对小鼠巨噬细胞碳清除能力的影响(x±s,n=10)
Tab.3 Effects of Brassica Campestris Ointment on the function of phagocytosis in mice (x±s, n=10)
与对照组比较,*P
2.3恰玛古蜜膏对小鼠血清中IgM抗体水平的影响
不同剂量的恰玛古蜜膏都有提高小鼠血清中IgM抗体水平的作用,恰玛古蜜膏40 g/kg剂量与对照组比较,差异有统计学意义;半数溶血值HC50显著高于对照组(P
表4 恰玛古蜜膏对小鼠血清溶血素含量的影响(x±s,n=10)
Tab.4 Effects of Brassica Campestris Ointment on productions of hemolysin in mice (x±s,n=10)
与对照组比较,*P
2.4 恰玛古蜜膏对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
不同剂量的恰玛古蜜膏都有提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的作用,恰玛古蜜膏40 g/kg剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数明显高于对照组(P
表5 恰玛古蜜膏对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响(x±s,n=10)
Tab.5 Effects of Brassica Campestris Ointment on phagocytosis of mouse peritoneal macrophages (x±s, n=10)
与对照组比较,*P
3讨论
实验结果显示,恰玛古蜜膏能提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力,明显增强DNCB引起的迟发型超敏反应,提高小鼠单核-巨噬细胞清除血液中碳粒的能力,提高小鼠血清中IgM抗体水平。因此,根据实验结果可判定恰玛古蜜膏具有良好的增强免疫功能的作用,是一种良好的免疫促进剂。目前对恰玛古在其药理方面作用的研究甚少,本研究初步显示了恰玛古在提高机体免疫功能方面的药理作用,为其进一步开发恰玛古的药用价值提供必要的依据。
[参考文献]
[1]中华人民共和国卫生部.中华人民共和国卫生部药品标准(维吾尔药分册)[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1999:62-63.
[2]徐叔云,卞如濂,陈修.药理实验方法学[M].3版.北京:人民卫生出版社,2002:1420.
[3]陈龙全,陈朝.复方竹节参片抗风湿作用的免疫调节机制研究[J].中国医药学报,2003,18(4):247.
[4]邱果,包旭.杜仲叶醇提取物对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床,2008,24(4):41-43.
[5]陈奇.中药药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1993:317.
[6]宴洪波,梁文.黄芪的免疫调节及抗病毒作用[J].华南国防医学杂志,2008,22(6):69-70.
[7]邓文龙.人参对网状内皮系统吞噬功能的影响[J].中医杂志,1983,24(7):546.
[8]郑丽兰,许剑琴.中药免疫机理研究进展[J].动物医学进展,2004,25(6):32-34.
[9]黄凯,杨新波.金丝桃苷对正常小鼠免疫功能的影响[J].药学学报,2009,25(2):133-135.
[10]李仪奎.中药药理实验方法学[M].上海:上海科学技术出版社,1991:158-159.
[11]王莉,尹幸念,谢国梁.螺旋藻片免疫调节作用的实验研究[J].中国现代药物应用,2009,3(7):108-109.
[12]张小梅.黄芪多糖的免疫调节作用及抗肿瘤作用研究进展[J].大连大学学报,2003,24(6):101-104.
(收稿日期:2009-10-14)