金毛鳞伞粗多糖抑菌试验研究

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摘要：采用水提醇沉法提取金毛鳞伞（Pholiota aurivella）粗多糖，用滤纸片法来测定其抑菌效果。金毛鳞伞粗多糖对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）具有抑菌作用，其中对大肠杆菌的抑菌作用最明显，枯草芽孢杆菌次之，对金黄色葡萄球菌的抑菌作用最弱；金毛鳞伞粗多糖对青霉（Penicillium）、黑曲霉（Aspergillus niger）等霉菌几乎没有抑菌作用。

关键词：金毛鳞伞（Pholiota aurivella）；粗多糖提取；抑菌作用

中图分类号：S646；S482.2 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）01-0068-02

Researches on Bacteriostatic Action of Crude Polysaccharide from Pholiota aurivella

TANG Yu-qin，WANG Hai-yang，ZHAO Yi-tao

（Jilin Agricultural and Technology College， Jilin 132101，Jilin，China）

Abstract： The polysaccharide from Pholiota aurivella was extracted by water and precipitated by ethanol. The bacteriostasis of the polysaccharide was determined by nitrocefin-based test. The results showed that the polysaccharide from Pholiota aurivella had bacteriostatic action on Staphylococcus aureus， E. coli and Bacillus subtilis. The action was most obvious for E. coli， followed by bacillus subtilis and the bacillus subtilis. The polysaccharide shows rarely bacteriostatic action on moulds like Penicillium or Aspergillus niger.

Key words： Pholiota aurivella； polysaccharide extraction； bacteriostatic action

收稿日期：2013-02-04

基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究项目（吉教科合字[2011]第267号）

作者简介：唐玉琴（1964-），女，吉林德惠人，教授，主要从事食用菌教学与科研工作，（电话）13596351391（电子信箱）；

通讯作者，赵义涛，教授，主要从事植物营养教学与科研工作，（电话）13504388183（电子信箱）。

金毛鳞伞（Pholiota aurivella）属担子菌亚门（Basidiomycotina）层菌纲（Hymenomycetes），伞菌目（Agaricales）球盖菇科（Strophariaceae），鳞伞属（Pholiota）[1]。是我国珍稀的野生食用菌，其营养丰富、味道鲜美，同时还具有很好的药效。粗多糖是金毛鳞伞主要的活性物质，但目前对金毛鳞伞粗多糖的生物活性研究甚少[2]。为此，本研究初步探讨了金毛鳞伞粗多糖对金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、大肠杆菌Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、青霉（Penicillium）、黑曲霉（Aspergillus niger）的抑菌作用。

1 材料与方法

1.1 供试材料

1.1.1 供试菌种 金毛鳞伞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、青霉、黑曲霉均由吉林农业科技学院食用菌研究所提供。

1.1.2 培养基配方组成 金毛鳞伞液体培养基配方：玉米粉50.0 g、豆粕50.0 g、葡萄糖20.0 g、K2HPO4 3.0 g、MgSO4·7H2O 4.0 g、无菌水1 000 mL，pH 6.5。细菌培养基配方：牛肉膏5.0 g、蛋白胨10.0 g、NaCl 5.0 g、琼脂2.0 g、无菌水1 000 mL、pH 7.2～7.4。霉菌培养基配方：马铃薯200.0 g、葡萄糖20.0 g、琼脂20.0 g、无菌水1 000 mL。

1.1.3 主要设备 SW-CJ-IBU/S型超净工作台（上海博讯实业有限公司），ZSP-A0403型生化培养箱（上海智城分析仪器制造有限公司），KQ3200DE型超声波粉碎机（昆山市超声仪器有限公司），DHG-924A型浓缩仪（上海一恒科学仪器有限公司），KDC-1044型低速离心机（科大创新股份有限公司），MWCO1000透析袋（69 mm×6.4 mm，上海源叶生物科技有限公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 金毛鳞伞菌丝体的培养 在超净工作台上，将金毛鳞伞菌接种到液体浅层培养基中，在转速为160 r/min、26 ℃条件下，培养14 d后将菌丝体过滤取出，备用。

1.2.2 供试菌液的制备 在超净工作台上，将细菌在37 ℃条件下活化24 h，霉菌在28 ℃下活化48 h，然后用无菌生理盐水分别将各供试菌配制成含菌量约为107～108 CFU/mL的供试菌液备用[3]。

1.2.3 粗多糖的提取 采用水提醇沉法。称取一定量的金毛鳞伞菌丝体，烘干粉碎后过60目筛，然后用热水浸提，在浸提液中用细胞粉碎机粉碎，纱布过滤，除去滤渣浓缩、透析后，用蛋白酶法去蛋白后用Sevage法脱蛋白[4]，再加入适量95%乙醇，静置过夜，离心冻干后得金毛鳞伞粗多糖。

1.2.4 最小抑菌浓度的测定 用二倍稀释法将粗多糖溶液稀释成浓度分别为100.000 mg/mL、50.000 mg/mL、25.000 mg/mL、12.500 mg/mL、6.250 mg/mL、3.125 mg/mL、1.563 mg/mL 7个梯度[5]。采用滤纸片法[6]，将直径为6 mm的滤纸片浸泡于各浓度粗多糖溶液中2 h，分别吸取0.500 mL各供试菌悬液涂布于平板培养基上，在每个培养基表面放3片浸泡好的滤纸片，然后将细菌类（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌 、枯草芽孢杆菌）置于37℃培养箱中培养36 h，霉菌类（青霉、黑曲霉）置于28 ℃培养箱中培养48 h，测量各供试菌在不同浓度下的抑菌圈大小，以无菌水组作为对照（即金毛鳞伞粗多糖浓度为0）。

2 结果与分析

2.1 金毛鳞伞粗多糖对各供试菌的最小抑菌浓度

金毛鳞伞粗多糖对各供试菌的最小抑菌浓度试验结果见表1。由表1可知，金毛鳞伞各浓度粗多糖对霉菌均未出现抑菌圈，对大肠杆菌的最小抑菌浓度为6.250 mg/mL，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为50.000 mg/mL，对枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为15.000 mg/mL。

由于25.000～12.500 mg/mL的浓度梯度较大，所以试验测定了枯草芽孢杆菌在金毛鳞伞粗多糖浓度分别为21.000 mg/mL、18.000 mg/mL、15.000 mg/mL时的抑菌效果，发现枯草芽孢杆菌在粗多糖浓度为15.000 mg/mL时出现抑菌圈，所以最终确定枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度为15.000 mg/mL。由于6.250～3.125 mg/mL的浓度梯度也较大，所以试验测定了大肠杆菌在金毛鳞伞粗多糖浓度分别为5.000 mg/mL、4.000 mg/mL时的抑菌效果，结果显示，大肠杆菌在粗多糖浓度为5.000 mg/mL时未出现抑菌圈，所以大肠杆菌的最小抑菌浓度为6.250 mg/mL。

2.2 金毛鳞伞粗多糖对各供试菌的抑菌效果分析

由于霉菌在金毛鳞伞粗多糖各浓度下均未出现抑菌圈，所以此阶段只分析金毛鳞伞粗多糖对3种细菌的抑制作用（表1）。采用滤纸片法，测定50.000 mg/mL、100.000 mg/mL金毛鳞伞粗多糖对各供试菌的抑菌效果，以抑菌圈直径的大小作为金毛鳞伞粗多糖抑菌效果的检验指标。结果表明，不同浓度粗多糖对细菌的抑菌作用不同，在抑菌浓度范围内，随着粗多糖浓度的增加抑菌效果会增强。金毛鳞伞粗多糖对大肠杆菌的抑菌效果最强，粗多糖浓度为100.000 mg/mL时抑菌圈直径为10.24 mm，粗多糖浓度为50.000 mg/mL时抑菌圈直径为9.54 mm；其次是枯草芽孢杆菌，粗多糖浓度为100.000 mg/mL时抑菌圈直径为9.27 mm，粗多糖浓度为50.000 mg/mL时抑菌圈直径为 7.54 mm；最弱的是金黄色葡萄球菌，粗多糖浓度为100.000 mg/mL时抑菌圈直径为6.59 mm、粗多糖浓度为50.000 mg/mL时抑菌圈直径为6.05 mm。

3 小结与讨论

本研究采用滤纸片法对提取出来的金毛鳞伞粗多糖抑菌效果进行了初步研究。结果发现，金毛鳞伞粗多糖对霉菌几乎没有抑菌作用，而对细菌有较好的抑制作用，并且随着浓度增加抑菌效果增强。其中对大肠杆菌效果最好，枯草芽孢杆菌次之，对金黄色葡萄球菌效果较差，三者最小抑菌浓度分别为6.250、15.000、50.000 mg/mL。粗多糖浓度在100.000 mg/mL时，各供试菌的抑菌圈直径分别为10.24、9.27、6.59 mm；在50 mg/mL时，抑菌圈直径分别为9.54、7.54、6.05 mm。

粗多糖的化学结构与其生理活性之间有一定的关系，本试验提取的是金毛鳞伞菌丝体粗多糖，而粗多糖的化学结构和抑菌机理还有待于进一步研究。

参考文献：

[1] 杨 雪，曹哲明，刘吉开.金毛鳞伞的分离、鉴定及营养特性的初探[J].食用菌，2003（2）：11-12.

[2] 马 玲.3种食用菌中多糖的提取与测定[J].中国卫生检验杂志，2005（2）：174.

[3] 刘 莹.三种食用菌粗多糖体外抗菌活性研究[J].食用菌，2009（2）：66-68.

[4] 韩天龙，李知平.食用菌实体多糖的提取工艺研究和保健作用探讨[J].吉林工程技术师范学院学报，2005（3）：14-16.

[5] 辛英姬，方绍海，王筱凡，等.茶树菇多糖抑菌效果的试验[J].食用菌，2011（4）：64-65.

[6] 董爱文，陈建华，周 辉，等.爬山虎多糖的提取及抑菌作用[J].广州食品工业科技，2003（4）：15-17.