盐酸特比萘芬乳膏体外透皮扩散试验方法的建立报告

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【摘要】以盐酸特比萘芬乳膏剂为例，探索并建立乳膏剂型体外透皮性能的研究方法，从而提高新品种研发力量。采用立式接受池装置（RYJ-6B型药物透皮扩散试验仪），以0.9%生理盐水模拟身体内环境，可以猪皮代替人体皮肤，180转/min模拟人体液运动状态。

【关键词】透皮；扩散；试验方法

文章编号：1004-7484（2013）-11-6849-011

具体操作

1.1透皮扩散试验方法的建立

1.1.1透皮扩散试验条件采用RYJ-6B型药物透皮扩散试验仪扩散池（6.5mL）及猪腹部离体皮肤。离体皮肤固定于样品池与接受池之间，角质层面向样品池，均匀涂抹乳膏，皮肤背面与接受液紧密接触（不得有气泡）。有效扩散面积约2.8cm2，接受系统置于（37±0.5）℃的恒温水浴中，电磁搅拌，转速为180r/min。分别于1、3、6、12、24h取接受液2mL，并补充相同体积的接受液，24h后终止试验。

1.1.2猪离体皮肤的处理取猪放血处死，经观察皮肤无红肿、充血、破损现象。用电动剃须刀除去腹部毛，取下已去毛的腹部猪皮，小心除去皮下脂肪，洗净，切割成小块皮肤，立即进行透皮试验，其余离体皮肤浸泡于生理盐水中，置于-4℃冰箱中备用。

1.2接受液0.9%生理盐水。

1.3含量测定方法的建立色谱条件：乙腈-四氢呋喃-pH7.8的缓冲液（取10%四甲基氢氧化铵14.5ml，置1000ml的量瓶中，加水950ml，用0.7mol/L磷酸溶液调节pH至7.8±0.05，加水稀释至刻度）（65：10：25）为流动相，检测波长280nm，理论塔板数按盐酸特比萘芬峰计算应不低于2000，盐酸特比萘芬与杂质峰的分离度应符合要求；进样量10μL。

1.4标准品溶液的制备精密称取盐酸特比萘芬标准品10.41mg，置于200mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准品贮备液。精密量取上述溶液1mL置于10mL容量瓶中，加生理盐水稀释至刻度，作为标准品溶液（5.21μg/mL），约相当于乳膏透过1%的浓度）。

取做完扩散试验的整块皮肤，刮去表面残留药膏，用生理盐水冲洗，稍晾干，剪去多余皮肤，将与软膏接触的面积约为2.8cm2的皮肤剪碎研磨至乳糜状，移至具塞锥形瓶中，加入20mL无水乙醇，超声提取40min，5000r/min离心，倾取上清液，滤过，挥干，用甲醇溶解，移至5mL容量瓶并稀释至刻度，即得供试品溶液。2体外扩散试验方法验证

2.1检测方法的确定

2.1.1高效液相色谱仪岛津LC-2010。

2.1.2色谱柱COSMOSIL 8C18-PAQ 250×4.6mm 5μm。

2.1.3检测器紫外检测器（双波长224nm、280nm）。

2.1.4色谱条件同药学资料含量测定方法。

2.1.5接受液的制备取参比制剂约0.8g，依照上述透皮扩散试验方法，分别于1、3、6、12、24小时取2ml的接受液，滤过，作为供试溶液，并补充同体积的接受液。

2.1.6供试溶液的制备透皮扩撒试验终止后，取下皮肤，刮去表面药膏，用生理盐水洗净，依照上述溶液的制备方法操作提取皮肤中的盐酸特比萘芬，并定容置5ml的量瓶中，滤过，作为皮肤贮留量供试溶液。

2.2专属性

2.2.1高效液相色谱仪岛津LC-2010。

2.2.2色谱柱COSMOSIL 8C18-PAQ 250×4.6mm 5μm。

2.2.3检测器紫外检测器。

2.2.4标准品溶液的制备精密称取盐酸特比萘芬标准品10.30mg于200mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，作为标准品贮备液。精密量取上述溶液1ml置于10ml容量瓶中，加生理盐水稀释至刻度，作为标准品溶液（5.15μg/ml约相当于乳膏透过1%的浓度）。

2.2.4.1供试品溶液a在接受液中均未检出盐酸特比萘芬，因此，取上述标准品贮备液1ml置于10ml容量瓶中，加空白透过皮肤所得的生理盐水空白渗透液稀释至刻度，滤过，作为供试品溶液a。

2.2.4.2供试品溶液b取做完扩散试验的整块皮肤，刮去表面残留药膏，用生理盐水冲洗，稍晾干，剪去多余皮肤，将与软膏接触的面积约为2.8cm-2的皮肤剪碎磨至乳糜状，移至具塞锥形瓶中，加入20ml无水乙醇，超声提取40min，5000r/min离心，倾取上清液，滤过，挥干，用甲醇溶解，移至5ml容量瓶并稀释至刻度，即得供试品溶液b。

2.3溶液稳定性将皮肤透过量的供试品溶液与皮肤贮留量的供试品溶液，再精密量取10μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，并记录两种溶液分别放置0小时、4小时、8小时、10小