补肾健脾养血活血法改善血管性认知障碍大鼠行为学障碍的研究
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[摘要] 目的：观察补肾健脾养血活血法对血管性认知障碍（VCI）大鼠行为学的影响。方法：造模前随机选取10只大鼠为假手术组，其余大鼠采用反复夹闭双侧颈总动脉结合腹腔注射硝普钠降低血压改良法建立VCI大鼠模型，造模成功后将其随机分为康欣胶囊复方组（复方组）、康欣胶囊简化方组（简方组）、西药对照组、模型组，每组10只。经过3周药物干预后，通过Morris水迷宫观察模型大鼠逃避潜伏期和穿越平台次数，测试其学习记忆能力。结果：与模型组比较，复方组、简方组、西药对照组逃避潜伏期明显缩短[（14.57±3.99）、（16.93±2.54）、（18.42±7.35）s]，穿越平台区域的次数明显增多[（6.90±1.86）、（7.20±1.75）、（6.10±2.46）次]，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：补肾健脾养血活血立法的康欣胶囊能明显改善VCI大鼠的行为学障碍。
[关键词] 血管性认知障碍；行为学障碍；康欣胶囊；Morris水迷宫
[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2011）12（b）-024-03
Study of invigorating kidney and strengthening spleen, nourishing blood and promoting blood method in improving the behavior of rats with vascular cognitive impairment
SHEN Shuanghong1, SHEN Xiaodong2, WU Tongyu1, GONG Degui3, MAO Jingjie1, DU Jian1
1.Research Institute of Traditional Chinese Medicine and Western Medicine, Fujian University of Traditional Chinese Medicine, Fujian Province, Fuzhou 350108, China; 2.Department of Traditional Chinese Medicine, the Second Hospital of Agricultural Reclamation in Heilongjiang Province, Jiamusi 150007, China; 3.Department of Rehabilitation, the Second People's Hospital of Fujian Province, Fuzhou 350003, China
[Abstract] Objective: To observe the impact of invigorating kidney and strengthening spleen, nourishing blood and promoting blood method on behavior of rats with vascular cognitive impairment (VCI). Methods: 10 rats were chosen randomly as sham operation group before operation, the left rats were caused by the reformed method of lowering blood pressure by clipping two sides of total artery in neck repeatedly combined with Sodium Nitrate of intraperitoneal injection to make vascular cognitive impairment model, which were randomly divided into four groups, namely Kangxin capsule compound group (compound group), Kangxin capsule simplified group (simplified group), western medicine control group and model group, with 10 rats in each group. After treatment for 3 weeks, the escape latency, the times of crossing platform and the learning and memory capacity of the model rats were observed by morris water maze. Results: Compared with model group, the escape latency of rats in Kangxin capsule group, compound group, simplified group and western medicine control group were shortened obviously [(14.57±3.99), (16.93±2.54), (18.42±7.35) s] and the times of crossing platform were increased obviously [(6.90±1.86), (7.20±1.75), (6.10±2.46) times], the differences were significant (P＜0.05). Conclusion: Kangxin capsule made by invigorating kidney and strengthening spleen, nourishing blood and promoting blood can improve behavior of VCI model rats.
[Key words] Vascular cognitive impairment; Behavior impairment; Kangxin capsule; Morris water maze
血管性认知障碍（vascular cognitive impairment，VCI）是由脑血管病危险因素明显的脑血管病（如脑梗死、脑出血）或不明显的脑血管病（如白质疏松、慢性脑缺血）引起的认知功能障碍[1]。采用血管性认知障碍的概念，极大地提高对由血管病变或血管危险因素引起的各种认知障碍的认识，防治痴呆的发生。既往研究表明，补肾健脾养血活血法治疗血管性痴呆取得了良好效果，本研究探讨补肾健脾养血活血法立方的复方中药对VCI大鼠行为学障碍的影响，揭示其对VCI的作用机制。
1 材料与方法
1.1 动物与药物
动物选用6个月龄雄性SD大鼠（购自上海斯莱克实验动物有限公司），体重为250～300 g，共70只。
复方中药康欣胶囊由福建屏山制药有限公司（批号：900418；规格：0.3 g/粒）提供。复方由女贞子、枸杞子、菟丝子、何首乌、黄精、黄芪、淫羊藿、当归、丹参、丹皮、酸枣仁、、山楂等药物组成。简化方由黄芪、淫羊藿、丹参、当归组成。各组用药量2.43 g/kg，相当于人常用剂量。西药喜得镇由瑞士山德士药厂与天津华津制药厂合作生产[（91）卫药准字X-156号，1 mg/片]，混悬液浓度为0.027 mg/ml，相当于人常用剂量。硝普钠，由北京双鹤现代医药技术有限公司生产，批号：0305072。
1.2 血管性认知障碍动物模型的建立
VCI大鼠的造模方法：采用王蕊等[2]造模方法并加以改进：分将大鼠用10%水合氯醛（3 ml/kg）腹腔注射麻醉，仰卧固定在手术台上，常规消毒，取颈正中切口，钝性剥离结缔组织和颈前肌群，分离双侧颈总动脉，腹腔注射硝普钠2.5 ml/kg后，无创微动脉夹夹闭双侧颈总动脉10 min，再通10 min，再夹闭10 min，再通后，永久结扎右侧颈总动脉，并剪断。伤口洒青霉素粉适量，缝合伤口。假手术组手术过程同模型组，但不阻断双侧颈总动脉，不注射硝普钠，在手术过程中，保持动物肛温（37.0±0.5）℃。
1.3 分组与给药
造模前按随机数字表随机抽取10只为假手术组。其余大鼠进行造模。在造模后存活（术中死亡20只）的40只大鼠随机分为康欣胶囊复方中药组（复方组）、康欣胶囊简化方中药组（简方组）、西药对照组、模型组，每组10只。造模后第2周予以每日胃灌注（4.5 ml/kg各种液体），假手术组和模型组用生理盐水灌胃，复方组、简方组和西药对照组分别予康欣胶囊全方、康欣胶囊简化方和喜得镇混悬液，均每日给药1次，连续灌药3周。给药两周后开始Morris水迷宫实验，共6 d，期间继续给药，次日处死动物。
1.4 行为学观察
Morris水迷宫[3]：水迷宫的水池直径100 cm，深50 cm，水深30 cm，水温（26±2）℃，水面覆一层泡沫塑料屑，池壁上4个等距离点分水池为4个象限，池壁外标4个入水点，任选一象限在其中央放置平台。平台无色透明，直径6 cm，高28 cm，平台没于水面下2 cm，水池周围参照物保持不变。Morris水迷宫主要包括定位航行实验和空间探索实验两个部分。
定位航行实验：检测大鼠对平台位置的学习和记忆的能力。连续训练5 d，每日上午、下午两个时段，两次间隔8 h以上。在每个时间段训练4次，分别从4个象限的入水点将大鼠放入水中。如果大鼠在60 s内爬上平台，并停留3 s以上，则认为大鼠找到平台，此为潜伏期。如果60 s内大鼠未能找到平台，则拖拽其尾部，将其引导到平台，熟悉10 s，此时潜伏期按60 s计算。每次训练间隔为5 min。计算每一时段4个方向潜伏期的平均数，然后把每一日上午、下午两个时段潜伏期的平均数作为该日的游泳结果。
空间探索实验：测试大鼠学会寻找平台后，对平台空间位置记忆的能力。定位航行实验后，即在第6天上午，撤去平台，取任意一个入水点将大鼠放入水中，观察并记录60 s内大鼠穿过原平台区域的次数。
1.5 统计学方法
使用SPSS 11.0统计软件进行分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，组间比较采用q检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 造模后血管性认知障碍大鼠一般情况
苏醒后大鼠活动能力下降，自发运动减少，少数大鼠自发运动增加。48 h内所有存活大鼠都逐渐恢复正常饮食及大便。
2.2 各组大鼠Morris水迷宫试验比较
与假手术组比较，模型组大鼠逃避潜伏期延长，穿越平台次数减少（P＜0.05）；复方组、简方组、西药对照组与模型组比较，逃避潜伏期明显缩短，穿越平台区域的次数明显增多（P＜0.05）；复方组、简方组、西药对照组两两比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。
表1 各组大鼠逃避潜伏期及穿越平台区域次数比较（x±s）
注：与模型组比较，P＜0.05，P＜0.05
3 讨论
临床和神经心理学研究表明，按照痴呆的诊断标准不能发现许多血管因素导致的认知障碍，尤其是未达到痴呆标准者，也就不能实现早期发现和早期预防。因此，一些学者提出应该用更宽泛的VCI概念来代替血管性痴呆，目的是将血管性痴呆的诊断从传统的痴呆标准中摆脱出来。VCI是一种可以预防的痴呆，早期治疗具有可逆性[4]。因此，广泛采用VCI诊断标准，对处于早期或症状前期的患者进行治疗及Ⅱ级预防和Ⅰ级预防，意义深远。
中医学认为，本病的发病与肾精不足、五脏亏虚、气血不足有密切关系。康欣胶囊以补肾健脾、养血活血为立法，方中女贞子、黄精等补肾填精，淫羊藿温肾壮阳，当归养血活血，佐以丹皮、山楂等药。药理研究表明，方中诸药多具有清除氧自由基、抗衰老、增强免疫力、抗动脉粥样硬化、减轻脑缺氧缺血后再灌注损伤等多种作用。既往的研究显示，康欣胶囊有效增加海马、下丘脑等部位乙酰胆碱（Ach）、多巴胺（DA）的合成；防止神经细胞凋亡，从而保护神经细胞，改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力[5-6]。
Morris水迷宫实验是检测空间方向、反射时间、视知觉和结构应用等空间学习记忆能力。本实验选用逃避潜伏期、通过平台次数等指标，来反映大鼠学习记忆能力。大鼠空间记忆力越好，其逃避潜伏期越短，通过平台次数也越多。本实验研究结果显示，假手术组大鼠的各指标均明显优于模型组，说明模型组大鼠出现明显的学习记忆障碍，造模成功。复方组、简方组、西药对照组与模型组比较，逃避潜伏期明显缩短、穿越平台区域的次数明显增多，说明各用药组均能明显改善大鼠学习记忆能力。
对于血管性认知障碍这个新概念，目前中医、西医都处于探索研究阶段。中医药在改善症状，延缓病程进展，减缓长期服用西药的不良反应，提高疗效等方面有一定的优势，因此通过本次动物实验观察，以期能为中医药对VCI的深入研究有所裨益。
[参考文献]
[1] 贾建平.重视血管性认知障碍的早期诊断和干预[J].中华神经科杂志,2005,38(1):4-6.
[2] 王蕊,杨秦飞,唐一鹏,等.大鼠拟“血管性痴呆”模型的改进[J].中国病理生理杂志,2000,16(10):914-916.
[3] Morris R. Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat [J]. Neruosci Methods,1984,11(1):47-60.
[4] Gorelick PR. Status of risk factors for dementia associated with stroke [J]. Stroke,1997,28(2):459-463.
[5] 蔡晶,杜建,刘锡,等.康欣胶囊及其拆方对肾虚血瘀型大鼠神经细胞保护作用的研究[J].中医杂志,2007,48(5):453-455.
[6] Jing C, Fan Z, Jian D. Effects of glossy privet fruit on neural cell apoptosis in the cortical parietal lobe and hippocampal CA1 region of vascular dementia rats [J]. Neural Regeneration Research,2008,3(25):1192-1211.
（收稿日期：2011-10-21）