湘A 1号\2号对免疫缺陷动物免疫保护作用的研究

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摘 要：目的：探讨湘A 1号、2号对免疫缺陷动物的免疫保护作用。方法：通过小鼠腹腔注射环孢菌素A建立免疫缺陷动物模型，观察湘A1号、2号对免疫缺陷动物模型胸腺重量指数、肺重量指数、肝脏重量指数、腹腔巨噬细胞吞噬功能以及胸腺、脾脏、肺和小肠组织的病理变化的影响。结果：与模型对照组比较，湘A1号的低、中、高剂量组及湘A2号中、高剂量组可显著提高胸腺重量指数（P＜0.01或P＜0.05），湘A1号高剂量组、湘A2号中、高剂量组能显著降低肺重量指数（P＜0.01），湘A1号和A2号的低、中、高剂量组均可显著降低肝重量指数（P＜0.01或P＜0.05）；湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组能显著提高腹腔巨噬细胞吞噬百分率（P＜0.01），湘A1号中、高剂量及湘A2号低、中、高剂量组能显著提高腹腔巨噬细胞的吞噬指数（P＜0.01或P＜0.05）；湘A1号高剂量及湘A2号中剂量能明显减轻胸腺组织萎缩、局部脂肪变性，肺泡壁增厚，小肠上皮脱落等病理变化。结论：湘A1号、2号对环孢菌素A所致的免疫缺陷动物模型有一定的免疫保护作用。

关键词：湘A1号；湘A2号；环孢菌素A；免疫

中图分类号：R392文献标识码：A 文章编号：1673-7717（2011）04-0828-04

收稿日期：2010-11-16

基金项目：湖南省科技厅科技计划重点项目（2010FJ2007）； 湖南省卫生厅中医药科研基金重大课题（6201）

作者简介：朱惠斌（1968-）,女,湖南双峰人,副主任技师,研究方向：微生物检验及中医药防治感染性疾病的研究。

通讯作者：葛金文（1965-），男，湖南双峰人，教授，博士研究生导师，博士，研究方向：中西医结合基础与临床研究。

The Researches of Immune Protection Effects of Xiang A NO 1, Xiang A NO 2

on the Immunodeficiency Animal

ZHU Hui-bin【sup】1【/sup】, LU Fang-guo【sup】2【/sup】, HUANG Shun-ling【sup】3【/sup】, GUO Zi-hua【sup】3【/sup】,LIU Ji-yong【sup】2【/sup】,LI Ling【sup】2【/sup】,GE Jing-ren【sup】2【/sup】

（1.The First Affiliated Hospital of Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha,410007,Hunan,China

2.Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208,Hunan,China

3.Health Department of Hunan Province, Changsha 410008,Hunan,China）

Abstract:Objective: To investigate the immune protection effect of Xiang A NO 1 and Xiang A NO 2 on the immunodeficiency animal. Methods: The immunodeficiency mice model is established by intraperitoneal injection of cyclosporine A . To observe the effects of Xiang A NO 1 and Xiang A NO 2 on thymus weight index, lung weight index, liver mass index, abdominal macrophage function as well as the pathological changes of the thymus, lungs, liver and the small intestine of Immunodeficiency mice.Results: Compared with the model group, The low-dose group ,middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1and the middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO 2 could significantly enhance the immune organs thymus mass index（P＜0.01 or P＜0.05）；The high-dose group of Xiang A NO1 and the middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO 2 could significantly reduce lung weight index（P＜0.01 ）；The low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and Xiang A NO 2 could significantly reduce liver mass index（P＜0.01 or P＜0.05）；The low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and Xiang A NO 2 could significantly enhance the phagocytic percentage of peritoneal macrophages（P＜0.01）；The middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO1 and the low-dose group , middle-dose group, high-dose group of Xiang A NO 2 could significantly enhance the phagocytic index of peritoneal macrophages（P＜0.01 or P＜0.05）；The high-dore group of Xiang NO1 and the middle-dnse group of Xiang A NO 2 bould rignificantlx reduce qatholngical changes of thd thxmts atrnphy, partial fatty degeneration, alveolar wall thickening and Intestinal epithelial shedding. Conclusion: Xiang A NO1 and Xiang A NO2 play Immune protection On immunodeficiency mice model established by intraperitoneal injection of cyclosporine A .

Key words:Xiang A NO 1Xiang A NO 2cyclosporine Aimmune

人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染所致的获得性免疫缺陷综合征（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）是全球性的传染病，严重威胁人类的身心健康，艾滋病已成为一个严重的社会问题，其防治刻不容缓。高效抗逆转录病毒治疗（HAART）是治疗AIDS的主要方法，HAART显著降低了艾滋病相关疾病的发病率和死亡率，提高患者的生活质量，延长患者的寿命，但不能从根本上根除HIV。寻找安全有效的具有免疫调节功能的天然药物已成为防治AIDS的重要研究方向【sup】［1-2］【/sup】。在成功建立符合HIV致病机制的动物模型和研究湘A1号、2号对免疫缺陷模型小鼠T细胞亚群的影响的基础上【sup】［3-4］【/sup】，我们进一步研究了湘A 1号、2号对免疫缺陷动物的免疫保护作用，现将结果进行报告与分析。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 昆明系雄性小白鼠，体质重（18±22）g，年龄6～8周，购自湖南中医药大学动物实验中心，动物合格证号：SCXK（湘）2002001。

1.1.2 药物与试剂 湘A1号、湘A2号由湖南中医药大学第一附属医院制备，规格15g/包；贞芪扶正颗粒为甘肃扶正药业科技股份有限公司产品，产品批号070932，规格5g/包；环孢菌素A （CSA）为瑞士诺华大药房产品，产品批号：S00117A，规格：每支250mg/5mL，用时以无菌生理盐水稀释，冰箱保存；5%鸡红细胞混悬液、1%淀粉自制。

1.2 方法

1.2.1 造模与分组给药 取100只实验小鼠，除正常对照组外，其余小鼠腹腔注射环孢菌素A，隔日1次，共注射3次，正常对照组同步腹腔注射生理盐水【sup】［ 3］【/sup】。每天定期观察动物的一般症状，模型动物逐渐出现食欲减退、反应迟钝、毛失光泽等症状，初步判断模型建立成功；末次注射后第2天处死小鼠10只检测相关指标以评判模型。评判模型成功的当天分组,并经灌胃给药。实验设正常对照组、模型组对照组、阳性药物对照组、湘A1号观察组（低、中、高剂量共3组）、湘A2号观察组（低、中、高剂量共3组），每组10只。湘A1、2号观察组：根据成人用药量30g/60kg体质重，按体表面积换算成小鼠的等效剂量为中剂量（0.087g/20g・d），低剂量为中剂量的1/3倍，高剂量为中剂量的3倍；阳性对照药物（贞芪扶正颗粒）组，按成人用药量10g/60kg换算成小鼠的等效剂量（0.029g/20g）【sup】［5］【/sup】。每次0.7mL/只，1日2次，连续灌胃1周。模型组同步予安慰剂灌胃，正常组给予蒸馏水灌胃。

1.2.2 指标测定 ①药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、肺重量指数、肝重量指数的影响 给药结束后第2天称动物体重，眼眶放血法处死小鼠，解剖取出胸腺、肺、肝等脏器，于电子分析天平上称湿重。将器官重量（mg）除以体质重（g）得器官系数，比较组间差异的显著性。②药物对免疫缺陷的动物腹腔巨噬细胞吞噬功能影响 于停药后的第1天动物腹腔注射无菌的1%淀粉2mL，20h后腹腔注射5%RBC鸡红细胞悬液2mL，1h后取腹腔液推片，自然干燥，甲醇固定，瑞氏染色、镜检，计算吞噬百分率（%）吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的吞噬细胞数×100和吞噬指数被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数。③药物对免疫缺陷的动物胸腺、脾脏、肺组织病理变化的影响 于停药后第2天，眼眶放血法处死小鼠，剖取胸腺、脾脏、肺脏、小肠组织，用10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光学显微镜下观察其组织的病理改变。

1.2.3 统计学分析 采用SPSS 12.0软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间差异比较用单因素方差分析，差异有统计学意义时再用最小显著差值法 （LSD）进行两两比较。P≤0.0 5认为有统计学意义。

2 结 果

2.1 药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、肺重量指数、肝重量指数影响的检测结果

由表1可知：模型组动物胸腺指数下降，肺重量指数、肝重量指数增大，与正常组比较，差异显著（P＜0.0）。与模型组比较，湘A1号低、中、高剂量组及湘A2号中、高剂量组能显著提高免疫缺陷动物的胸腺重量指数（P＜0.05或＜0.01）；湘A1号高剂量组、湘A2号中、高剂量组能显著降低免疫缺陷动物的肺重量指数（P＜0.01）；湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组均能显著降低肝重量指数（P＜0.05或＜0.01）。其中湘A1号高剂量组对胸腺指数、湘A2号中剂量组对肺重指数、肝重指数的效果优于阳性对照组（P＜0.05）。

表1 药物对免疫缺陷动物胸腺重量指数、

肺重量指数、肝重量指数的影响（n10，±s）

注：与正常组比较，P＜0.01；与正常组比较，P＜0.05；与模型对照组比较，**P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05；与阳性药物对照组比较，P＜0.01；与阳性药物对照组比较，P＜0.05。

2.2 药物对免疫缺陷的动物腹腔巨噬细胞吞噬功能影响的结果

由表2可知：模型组动物腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数下降，与正常组比较，差异显著（P＜0.01）。与模型对照组比较，湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组均能提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞吞噬百分率（P＜0.01），其中湘A2号中、高剂量组效果优于阳性对照组；湘A1号中、高剂量及湘A2号低、中、高剂量组能明显提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞的吞噬指数（P＜0.01或P＜0.05），其中湘A1号高剂量组和湘A2号中剂量组的效果优于阳性对照组。

表2 药物对免疫缺陷动物腹腔巨噬

细胞吞噬功能的影响（±s，n10）

注：与正常组比较， P＜0.01；与正常组比较，P＜0.05；与模型对照组比较，**P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05；与阳性对照组比较，P＜0.01；与阳性对照组比较，P＜0.05。

2.3 药对免疫缺陷的动物胸腺、脾脏、肺和小肠组细病理变化影响的结果

由图1可知：与正常组比较，模型组动物胸腺萎缩、坏死、局部脂肫变性、皮质增厚、可见其中有淋巴小结样结构；脾脏代偿性白髓增多，脾小体增多变大，红髓中可见大量多核巨噬细胞；肺泡间质增厚、充血、水肿、有大量淋巴细胞浸润，有局灶性炎症改变；肠绒毛紊乱、固有层淋巴细胞增多、肠腔内有大量上皮脱落细胞。与模对煦组比较，湘A1高剂量组胸腺周围皮质与髓质比例基本正常，皮质中未见淋巴小结构；脏红髓与白髓质比例基本正常，红髓中有少野的巨噬细胞，未见特异性改变；肺泡间质无增厚、充血、水肿，肺间质少量淋巴细胞浸润，无炎症改变；小肠绒毛基本正常，肠腔内有少量上皮脱落。湘A2号中剂量组胸腺皮质与髓质比例基本正常，未见胸腺小体退行性变化；脾脏红髓中有少量多核巨噬细胞；肺组织结构基本正常；小肠绒毛基本正常，小肠腺结构正常，肠腔未见上皮脱落细胞。3 讨 论

艾滋病（AIDS）是人类获得性免疫缺陷病毒（HIV）引起的传染性疾病，可严重地推毁人的免疫系统而对生命构成极大的威胁。目前国际上公认的艾滋病的疗效指标分抑制艾滋病毒和提高机体的免疫功能两类【sup】［6］【/sup】。HAART治疗方案是通过抑制HIV复制,使病人的病毒血症受到一定程度的控制，降低传染性，提高生存质量，改善心理状态，减少机会性感染。但这种治疗方案存在着停药后病毒载量急剧反弹、严重不良反应等缺点。面对抗病毒治疗的缺陷，针对艾滋病毒主要破坏人体的免疫防御系统的特点，中医药学将研究的重点定位在免疫调节方面，为中医药防治艾滋病提供了新的思路。由于环孢菌素A对B细胞和巨噬细胞增殖和功能没有直接的抑制作用抑制，而可特异性地抑制CD【sub】4【/sub】【sup】+【/sup】T细胞的增殖分化，因此，以环孢菌素A制备的小鼠免疫缺陷动物模型符合HIV的致病机制【sup】［3,7］【/sup】。

胸腺是动物的重要免疫器官，是T细胞分化成熟的场地，其结构及功能与机体免疫状态紧密相关。胸腺指数的变化直接反映机体细胞免疫水平的高低。实验结果表明：湘A1号低、中、高剂量组及湘A2号中、高剂量组能显著提高免疫缺陷动物的胸腺重量指数均能保护免疫器官受损，能显著提高免疫缺陷小鼠的胸腺指数，尤以湘A1号中、高剂量组和湘A2号中剂量组的作用效果较好。

机体的免疫应答包括非特异性免疫、特异性体液免疫和特异性细胞免疫。单核细巨噬细胞的吞噬能力是衡量机体非特异性免疫功能的标志之一。当细菌、病毒等抗原性物质进入机体后，吞噬细胞可迅速将其吞噬和清除，吞噬细胞的吞噬百分率和吞噬指数可以反应其吞噬功能的强弱。实验结果显示：湘A1号、湘A2号低、中、高剂量组的均能提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞吞噬百分率；湘A1号中、高剂量及湘A2号低、中、高剂量组能明显提高免疫缺陷动物腹腔巨噬细胞的吞噬指数。这些结果提示湘A1号、2号能显著地提高机体的非特异性免疫功能，对机体免疫功能具有一定的保护作用。

当机体机体免疫功能低下、缺陷或紊乱时，易引起组织器官的继发性感染，免疫缺陷动物肺重指数、肝重指数增大、肺间有大量淋巴细胞浸润、小肠肠壁组织固有层淋巴细胞增多应该就是继发感染的结果。实验结果表明：湘A1号、2号能保护机体脏器免受损害，提高机体的免疫力，对免疫缺陷动物的脏器有保护作用。

参考文献

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