洗必泰碘纳米微乳抗微生物实验

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摘要　目的：观察洗必泰碘微乳剂的杀菌效果。方法：以洗必泰碘微乳为研究对象，将其采用对倍稀释法，以不同浓度对标准菌株大肠杆菌(ATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)进行悬液定量杀菌试验，观察灭菌效果。结果：该微乳剂在有效碘浓度9.38μg/ml作用1分钟时，平均杀灭率达99.99％以上。结论：洗必泰碘微乳剂为强而有效的杀菌剂。

关键词　洗必泰碘络盐；微乳：消毒效果

洗必泰碘络盐是一种高效、快速、广谱杀菌剂，对多种微生物具有良好灭活作用。洗必泰碘络盐难溶于水。一般需要用乙醇、二甲基甲酰胺等有机溶剂助溶，对制剂及使用构成一定局限。我们合成洗必泰碘络盐，并将之制成质量浓度为1％的纳米微乳，该洗必泰碘络盐微乳不含上述有机溶剂。且具有良好的水溶性。我们对该洗必泰碘络盐微乳进行抗微生物效能试验。

1　材料和方法

1．1　实验对象及材料：1％质量浓度洗必泰碘纳米微乳(本室自制)，吐温80(AR)，卵磷脂，硫代硫酸钠(AR)，大肠杆菌(ATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)。

1．2　有效碘含量测定：参照《消毒技术规范》第三版“有效碘含量测定”规定，采用碘量法进行。吸取微乳样品5 ml及醋酸1滴，用0.1 mol／L硫代硫酸钠标准液滴定，待溶液呈淡黄色时加入0.5淀粉溶液10滴，继续滴定至蓝色消失，记录硫代硫酸钠消耗的ml数。根据公式N.V＝N'.V'计算有效碘含量，则1ml硫代硫酸钠相当于12.69 mg碘。

1．3　消毒剂的稀释：检测时用蒸馏水稀释。将质量浓度1％洗必泰碘纳米微乳原液为第一管，用对倍稀释法，令各管洗必泰碘质量浓度依次为10000μg，5000μg，2500μg，1250μg，625μg，312.5 μg，156.25μg，78.1μg，39μg，19.53μg，9.76μg，4.88μg，2.44μg／ml。

1．4 中和剂选择试验：中和剂选吐温+卵磷脂+硫代硫酸钠：实验菌种为大肠杆菌(8099)。参照《消毒技术规范》步骤。试验分8组：(1)消毒剂+菌悬液+PBS；(2)(消毒剂+菌悬液)+中和剂；(3)(中和剂+菌悬液)+PBS；(4)(消毒剂+中和剂)+菌悬液；(5)(PBS+菌悬液)+PBS；(6)同批次PBS接营养琼脂平板；(7)同批次中和剂接营养琼脂平板；(8)未接种营养琼脂平板。试验结果．以第六、七、八组无菌生长，第三、四、五组组间菌数相差不超过10％，第二组长菌，第一组不长菌或菌落数远少于第二组时，为选用的中和剂及其浓度适宜。

1．5　悬液定量杀菌试验：参照《消毒技术规范》“悬液定量杀菌试验”步骤，试验菌为大肠杆菌(AATCC8099)、金黄色葡萄球菌(ATCC6538)。取约108 cfu／ml菌悬液0.1 ml，与5 ml各浓度洗必泰碘微乳稀释液混合，分别作用30秒、60秒、120秒3个作用时间，再与中和剂作用10分钟，活菌计数测定洗必泰碘纳米微乳对上述微生物的最低杀菌浓度。

2 结果

2．1　洗必泰碘微乳的有效碘含量：质量浓度1％洗必泰碘络盐纳米微乳原液中，有效碘含量为0.4805％。

2．2　洗必泰碘微乳中和剂试验结果：试验表明，以0.2％硫代硫酸钠+0.2％卵磷脂+2％吐温-80作中和剂。获得较满意的结果，中和剂有效地中和了洗必泰碘微乳作用1分钟的抑菌能力，而它本身并不阻碍细菌的生长。

2．3　洗必泰碘微乳杀菌作用：据有效碘含量测定结果，1％洗必泰碘络盐纳米微乳有效碘含量为4805μg/ml；对倍稀释后，有效碘浓度梯度顺序对应为4805μg，2402μg，1201μg，600μg，300μg，150μg，75 μg，37.53 μg，18.76μg，9.38μg，4.69 μg，2.34μg，1.17μg/ml；经检测，洗必泰碘微乳有效碘含量为37～75μg／ml时，作用30秒，平均杀灭率达99．99％，当有效碘浓度下降至9.38μg/ml时，作用1分钟亦可达到相同的杀菌效果。

3　讨论

3．1　洗必泰碘杀菌原理：洗必泰碘络盐的强力杀菌机理。是对微生物发生了多靶位攻击联合效应。洗必泰碘络盐中，亚氨基与亚氨酰胺基团形成离域的电子高密度结构，碘以I的形式参与电子离域体，并与大分子的空间结构紧密结合，借助与自身的表面活性，增加有效碘在微生物的靶位上的浓度；在离域电子作用下，I还可穿透细胞壁，攻击细胞内部靶位。

3．2　洗必泰碘微乳的杀菌效能：洗必泰碘络盐具有良好的杀菌作用，在常温条件下，有效碘浓度在31～62 ppm时作用15秒，对繁殖体大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的平均杀灭率达99.99％以上。洗必泰碘络盐不溶于水，通常要用乙醇或混合溶媒(含量达45％～75％)稀释。本研究利用微乳技术，在相应的乳化剂及助乳化剂配合下，令洗必泰碘络盐成微乳状态；在预实验中显示，1％质量浓度的洗必泰碘络盐微乳，能与水任意比例混溶，其有效碘浓度在常温下能保持长期稳定。杀菌试验显示。洗必泰碘络盐微乳有效碘含量在9.38μg/ml时，1分钟内可99.99％杀灭大肠杆菌与金黄色的抗微生物活性与文献报道的洗必泰碘非微乳制剂的杀菌技能基本一致。因此，从配方角度看。微乳剂作为含洗必泰碘络盐的消毒剂载体剂型，具有一定的合理性与可行性。

3．3　洗必泰碘微乳有助于改善消毒剂的适应性：本研究的洗必泰碘微乳剂由于不含乙醇。在消毒剂应用上将有更佳的适应性。目前洗必泰碘络盐消毒剂多为含乙醇溶液(含量45～75％)，对创面及黏膜刺激性明显，不含醇的水溶性洗必泰碘微乳剂在保留杀菌效能的同时还能减少对组织的刺激。另有文献报道，洗必泰碘络盐与表面活性剂合用，有提高火器创伤创面清洁及消毒效果的作用。因此。微乳剂作为洗必泰碘络盐消毒剂载体具有实用性的发展潜力。