高效液相色谱法测定天麻头风灵颗粒中天麻素的含量

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摘 要 目的：建立测定天麻头风灵颗粒有效成分含量的方法。方法：采用HPLC对天麻头风灵颗粒中天麻素的含量进行测定。结果：天麻素在0．02004~0．1002 μg之间具有良好的线性关系，平均回收率为100．06%，RSD=1．10%(γ=5)。结论：该方法灵敏、重现性好，适用于天麻头风灵颗粒中天麻素的含量测定。

关键词 天麻头风灵颗粒 天麻素 高效液相色谱法

天麻头风灵颗粒由天麻粉碎成细粉及玄参、牛膝、玄参、当归、川芎等中药材水煎液提取物混合而制成的颗粒剂。具有滋阴潜阳、祛风、强筋骨之功效，用于顽固性头痛、长期手足麻木、慢性腰腿酸痛，临床用于治疗头风头痛的效果很好。为了控制天麻头风灵颗粒的质量，保证临床用药效果，本实验建立了HPLC测定天麻头风灵颗粒中天麻素的方法。经方法学考察证实该方法特异性高，回收率和精密度好，结果满意。

仪器与试剂

Waters 600高效液相色谱仪，Waters 2487紫外-可见波长检测器，十万分之一微量分析天平，天麻素(0807-9702)购自中国药品生物制品检定所，甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

方法与结果

色谱条件［1，2］色谱柱：ReliaSil．C 1 8(4．6mm~250mm，5 u m)；流动相：乙腈O．05%磷酸(2：98)；柱温：室温。流速0．6ml/分；检测波长220nm；对照品溶液的制备：精密称取天麻素对照品5．01mg，置10ml量瓶中，加乙腈-水(2∶98)混合液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取1ml，置50ml量瓶中，加乙腈-水(2∶98)混合液稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：取本品10g，研细，取约3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇50ml，称定重量，加热回流3小时，放冷再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加乙腈-水(2∶98)混合液溶解，转移至10ml量瓶中，用乙腈-水(2∶98)混合液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液的制备：按处方制备取不含天麻药材的样品颗粒剂，按供试品溶液的制备方法制成相应的阴性样品溶液。

线性关系考察：精密吸取天麻素对照品溶液2、4、6、8、10μl分别注入液相色谱仪，测定天麻素色谱峰面积。以天麻素的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：y=3．30×104～3．38×103x，r=0．9996。结果表明：天麻素在0．02004~0．1002μg之间呈良好的线性关系。

精密度实验：精密吸取同一供试品溶液(批号：050301)5 μl，重复进样6次，分别计算天麻素的质量分数，结果其RSD为1．28%。

稳定性试验：精密吸取对照品溶液5 μl，分别于0、2、4、24、36小时测定峰面积，计算得天麻素峰面积的RSD为0．95%，表明对照品天麻素在36小时内稳定。

重现性实验：取样品，精密称定5份，制备供试品溶液，进样测定计算天麻素的质量分数，其RSD为1．25%。

回收率实验：采用加样回收法。取批号为050302的样品5份，每份1．5g，置具塞锥形瓶中，各精密加入天麻素对照品0．15mg，制备供试品溶液，进样，测定。结果天麻素平均加样回收率为100．06%，RSD为1．10%。

样品测定：取3批天麻头风灵颗粒制备供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5 μl，进样，测定，结果见表l。根据结果，暂定本品以干燥品计，含天麻素总含量不得少于0．085mg／g。

讨 论

高效液相色谱法是继气相色谱之后，20世纪70年代初期发展起来的一种以液体做流动相的新色谱技术。

高效液相色谱是在气相色谱和经典色谱的基础上发展起来的。现代液相色谱和经典液相色谱没有本质的区别。不同点仅仅是现代液相色谱比经典液相色谱有较高的效率和实现了自动化 操作。经典的液相色谱法，流动相在常压下输送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压力可达4.9×107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们称它为高压、高速、高效或现代液相色谱法。

液相色谱分离原理及分类和气相色谱一样，液相色谱分离系统也由两相--固定相和流动相组成。液相色谱的固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上1层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物由流动相液体推动进入色谱柱。根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异进行分离。色谱分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小，决定色谱过程的保留行为。

根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化合键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。

流动相的确定：本实验曾选择乙腈：0．05%磷酸(3∶97)溶液系统，结果天麻素的保留时间过短且天麻素的出峰区间有干扰。而采用本实验的流动相即乙腈：0．05%磷酸(2∶98)，天麻素保留时间适中，峰形得到明显的改善。

样品检测波长：取天麻素对照品，加乙腈-水(2∶98)混合液制成每1ml中含天麻素1mg的溶液，作为对照品溶液，进行紫外检测。结果选定测定波长λmax=220nm。

本实验建立的高效液相色谱法测定加样回收率高，是一种快速、简便、较准确的方法。

参考文献

1 ChP(中国药典)．Vol I，2005

2 Liang JJ，Tian DF，et a1．Determination of the contents of gastrodine in Rhizoma Gastrodiae from different regions by HPLC．Journal of Shenyang Pharmaceutical University，2006，23(1)：26-28